一种果蔬中氟吡菌胺的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明提供一种生物有毒有害物质的检测方法，特别地提供一种蔬菜水果中氟吡 菌胺的测定方法，属于农副产品中有毒有害物质残留安全检测领域。
【背景技术】
[0002] 氣吡菌胺（fluopicolide)化学名称为2,6_二氣_N_[ (3_氣_5_二氣甲基_2_ [!比 啶基）甲基]苯甲酰胺，由德国拜耳作物科学公司开发的苯甲酰胺类杀菌剂，具有保护和广 谱治疗作用。
[0003]
[0004] 氟吡菌胺分子式
[0005] 氟吡菌胺主要应用在各类蔬菜和葡萄上，对霜霉病、疫病、晚疫病、猝倒病等常见 卵菌纲病害具有杰出防效，其主要作用于细胞膜和细胞间的特异性蛋白，因其具有优良的 系统传导性和较强的薄层穿透力，对病原菌各主要形态均有较好的抑制作用；对作物和环 境安全，特别适用于优质、绿色蔬菜生产；能够为新叶、茎干、块茎、幼果提供全面和持久保 护，由于药剂能够经叶面快速吸收，所以耐雨水冲刷，为雨季蔬菜防病提供可靠保障。
[0006] 然农作物中残留过多的氟吡菌胺会危害人体的健康，故很多国家对农作物中的 氟P比菌胺最大残留限量均作出了相关规定，如英国MRLs :马铃薯0. 02ppm、葡萄2ppm ;欧盟 MRLs :黄瓜CL 5ppm、番前Ippm ;中国MRLs :番前CL lppm、黄瓜CL 5ppm、大白菜CL 5ppm、西瓜 0· lppm、马铃薯 0· 05ppm、辣椒 0· lppm。
[0007] 随着食品安全标准的日益提高，对于能够快速、灵敏、准确地检测果蔬中尽可能多 的氟吡菌胺残留的检测方法存在迫切需求，也是目前农作物领域中深入研究的重点和难点 课题之一。然迄今为止，针对果蔬中残留的氟吡菌胺进行快速检测尚无一套完整可靠的方 法，因而本发明应运而生。该方法能简便快捷、灵敏、准确地测定出果蔬中残留的氟吡菌胺， 大大降低检测成本和缩短检测时间。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是要解决现有技术中的问题，提供一种简便、快速、准确、灵敏度高、 重复性好的氟吡菌胺检测方法。
[0009] 本发明的所述检测方法，包括如下步骤：
[0010] ⑴样品处理：将含氟吡菌胺的样品使用有机溶剂进行提取后再进行萃取净化；
[0011] ⑵标准溶液配制：将不含氟吡菌胺的同种类基质空白样品按步骤⑴处理，得样 品提取净化后的残渣，加入适量氟吡菌胺标准溶液，涡旋混匀，得不同浓度的氟吡菌胺混合 标准工作液；
[0012] (3)溶液检测，将试样溶液和标准溶液按下述条件分别顺次进行液相色谱仪分离 和质谱检测：
[0013] (3. 1)液相色谱仪分离：Agilent Proshelll20 EC-C18 (3. OmmX 100mm，2. 7 μ m) 色谱柱；0. 1%甲酸水溶液为流动相Α、甲醇为流动相B进行线性梯度洗脱；流速为0. 4mL/ min ;柱温为30°C ;进样量为2 μ L，定量方法为外标法（峰面积）；
[0014] (3. 2)质谱检测：ESI源正模式电离；多反应监测（MRM);鞘气温度为350°C ;鞘气 流量为12L/min ;雾化气压力为40psi ;毛细管电压：3000V(ESI+)，3500V(ESI_);干燥气温 度为300°C ;干燥气流量为7L/min-l ;
[0015] (4)按下式计算试样液中氟吡菌胺含量：
[0016]
[0017] 式中：Ci-试样中氟吡菌胺的浓度；
[0018] Ai-试样色谱峰面积；
[0019] As-氟吡菌胺混合标准工作液色谱峰面积；
[0020] Cs-氟吡菌胺混合标准工作液浓度。
[0021] 在本发明所述检测方法的上述步骤（1)中，作为一个实施方式的样品提取方法 为：准确称取20g精确至0.1 g的样品至250mL三角瓶中，加40mL乙腈，在高速匀浆机中匀 浆lmin，收集滤液至装有5-7gNaCl的200mL具塞量筒中，盖上盖子后，剧烈振荡lmin，室温 下静置lh，取上清液10mL，蒸发溶剂至近干，残渣用2mL二氯甲烷-甲醇溶解。
[0022] 在本发明所述检测方法的上述步骤（1)中，作为一个实施方式的样品萃取方法 为：将样品转移至弗罗里硅土固相萃取柱中，再用二氯甲烷-甲醇洗涤样品瓶，每次4mL， 洗涤2次，并将洗涤液全部转入固相萃取柱中，收集全部流出液，蒸发溶剂至近干后，用5mL 甲醇复溶，并过〇. 22 μ m有机相滤膜，得待检测试样溶液。
[0023] 其中，所述二氯甲烷-甲醇体积比为95 : 5。
[0024] 其中，所述蒸发溶剂至近干所采用的实施方式并无特别限定，如可自然挥发、加 热挥发、水浴下用高纯氮吹仪温和吹至近干等，为快速得到样品，优选采用水浴温度可为 40-55 cC 〇
[0025] 其中，过滤所使用的有机膜并无特别限定，如可为聚四氟乙烯，其孔径可为 0. 22_0. 45 μ m，其目的是过滤去除杂质，以免影响后续检测。
[0026] 与现有技术相比，本发明所述检测方法的优点在于：简便、快捷、准确、灵敏度高、 检测时间短，缩短检测周期，降低检测成本。
【附图说明】
[0027] 图1是氟吡菌胺0. 01mg/kg图谱
[0028] 图2是甘蓝-空白图谱
[0029] 图3是甘蓝添加0. 01mg/kg图谱
[0030] 图4是葡萄空白图谱
[0031] 图5是葡萄添加0. 01mg/kg图谱
【具体实施方式】
[0032] 下面结合具体实施例进一步说明本发明。以下实施例仅为示意性实施例，并不构 成对本发明的不当限定，本发明可以由
【发明内容】
限定和覆盖的多种不同方式实施。除非特 别说明，本发明采用的试剂、化合物和设备为本技术领域常规试剂、化合物和设备。
[0033] L仪器条件
[0034] (1)质谱条件：ESI源正模式电离；多反应监测（MRM);鞘气温度：350°C ;鞘气流 量：12L/min ;雾化气压力：40psi ;毛细管电压：3000V(ESI+)，3500V(ESI_);干燥气温度： 300°C ;干燥气流量：7L/min ;质谱采集参数如表1所示：
[0035] 表1 MRM监测模式下6种农药质谱采集参数
[0037] ⑵液相条件：Agilent Proshelll20 EC-C18 (3. OmmX 100mm，2. 7 μ m)色谱柱；流 动相A :0. 1 %甲酸水溶液；流动相B :甲醇；流速：0. 4mL/min ;柱温：30°C ;进样量：2 μ L，定 量方法：外标法（峰面积）；梯度洗脱条件如表2所示：
[0038] 表2梯度洗脱条件
[0040] 2.样品处理
[0041] 准确称取20g精确至0.1 g的样品至250mL三角瓶中，加40mL乙腈，在高速匀浆机 中匀浆lmin，收集滤液至装有5-7gNaCl的200mL具塞量筒中，盖上盖子后，剧烈振荡lmin， 室温下静置lh，取上清液10mL，蒸发溶剂至近干，残渣用2mL二氯甲烷-甲醇溶解，转移至 固相萃取柱中，再用二氯甲烷-甲醇洗涤样品瓶，每次4mL，洗涤2次，并将洗涤液全部转入 固相萃取柱中，收集全部流出液，蒸发溶剂至近干后，用5mL甲醇复溶，并过0. 22 μ m有机相 滤膜，得待检测试样溶液。
[0042] 3.标准溶液配制
[0043] 将不含氟吡菌胺的同种类基质空白样品按"2.样品处理"步骤处理，得样品提取净 化后的残渣，加入适量氟吡菌胺标准溶液，涡旋混匀，配制成不同浓度的氟吡菌胺混合标准 工作液。
[0044] 4.测定
[0045] 在上述色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相 对响应值，直至相邻2针氟吡菌胺的响应值相对变化小于1. 2%时，按照标样溶液、试样溶 液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
[0046] 5.将测得的结果代入下式进行计算，得出氟吡菌胺的含量：
[0047]
[0048] 式中：Ci-试样中氟吡菌胺的浓度；
[0049] Ai-试样色谱峰面积；
[0050] As-氟吡菌胺混合标准工作液色谱峰面积；
[0051] Cs-氟吡菌胺混合标准工作液浓度。
[0052] 以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能 因此理解为本发明专利范围的限制，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以 在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化和改进，这些变化和改进都落入本发明要求的 保护范围内。
【主权项】
1. 一种蔬菜水果中氟吡菌胺的检测方法，包括如下步骤： (1) 样品处理：将含氟吡菌胺的样品使用有机溶剂进行提取后再进行萃取净化； (2) 标准溶液配制：将不含氟吡菌胺的同种类基质空白样品按步骤（1)处理，得样品提 取净化后的残渣，加入适量氟吡菌胺标准溶液，涡旋混匀，得不同浓度的氟吡菌胺混合标准 工作液； (3) 溶液检测，将试样溶液和标准溶液按下述条件分别顺次进行液相色谱仪分离和质 谱检测： (3.1)液相色谱仪分离：Agilent Proshelll20EC-C18(3.0mmX100mm，2.7ym)色谱 柱；0. 1 %甲酸水溶液为流动相A、甲醇为流动相B进行线性梯度洗脱；流速为0. 4mL/min ; 柱温为30°C ;进样量为2 μ L，定量方法为外标法（峰面积）； (3. 2)质谱检测：ESI源正模式电离；多反应监测（MRM);鞘气温度为350°C ;鞘气流量 为12L/min ;雾化气压力为40psi ;毛细管电压：3000V(ESI+)，3500V(ESI_);干燥气温度为 300°C ;干燥气流量为7L/min-l ; (4) 按下式计算试样液中氟吡菌胺含量：式中：Ci-试样中氟吡菌胺的浓度； Ai-试样色谱峰面积； As-氟吡菌胺混合标准工作液色谱峰面积； Cs-氟吡菌胺混合标准工作液浓度。2. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述提取，其具体步骤为：准确称取 2〇g精确至0.1 g的样品至250mL三角瓶中，加40mL乙腈，在高速匀浆机中匀浆lmin，收集 滤液至装有5-7gNaCl的200mL具塞量筒中，盖上盖子后，剧烈振荡lmin，室温下静置lh，取 上清液10mL，蒸发溶剂至近干，残渣用2mL二氯甲烷-甲醇溶解。3. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述萃取是采用弗罗里硅土固相萃取 柱，具体步骤为：将样品转移至固相萃取柱中，再用二氯甲烷-甲醇洗涤样品瓶，每次4mL， 洗涤2次，并将洗涤液全部转入固相萃取柱中，收集全部流出液，蒸发溶剂至近干后，用5mL 甲醇复溶，并过〇. 22 μ m有机相滤膜，得待检测试样溶液。4. 如权利要求2-3任一项所述的方法，其特征在于：所述二氯甲烷-甲醇体积比为 95 : 5〇5. 如权利要求2-3任一项所述的方法，其特征在于：所述蒸发溶剂至近干，可为自然挥 发、加热挥发、水浴下用高纯氮吹仪温和吹至近干中任一种。6. 如权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述水浴，温度为40-55Γ。
【专利摘要】本发明涉及一种氟吡菌胺的检测方法，包括样品的提取及净化、试样溶液及标准工作液的配制，然后顺次进行液相色谱仪分离和质谱检测。通过这些处理手段和合适工艺参数的使用，所述方法能够简便、快速、准确地测定蔬菜、水果中氟吡菌胺的含量，具有检测灵敏度高、稳定性好、结果准确等优点，为蔬菜、水果中氟吡菌胺残留的定性、定量和食品安全监管提供了一种可靠、快捷的检测方法。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105158382
【申请号】CN201510299660
【发明人】马琳, 赵莉, 赵全立, 陈建波, 占绣萍, 黄兰淇, 陈秀
【申请人】上海市农业技术推广服务中心
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年6月4日