一种食品中脂肪酸定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于检测技术领域，具体涉及一种食品中脂肪酸定量检测方法。
【背景技术】
[0002] 脂肪酸在核桃仁中以脂肪酸甘油三酯的形式存在，企业中按照GB/T 5009. 6-2003 《食品中脂肪的测定》中第二法酸水解法即可测定出核桃仁中总脂肪含量。企业一般采用 GB/T22223-2008中的脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化方法进行试样制备，具体是在盛有脂肪 提取物的250mL烧杯中加入2%氢氧化钠溶液8mL，连接回流冷凝器在80摄氏度水浴上回 流，直至油滴消失；从回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液7mL，在80°C水浴中继续 回流2min ;用去离子水冲洗回流冷凝器。停止加热，从水浴上取下烧瓶，迅速冷却至室温， 准确加入IOmL~30mL正庚烷，振摇2min，再加入饱和氯化钠水溶液，静置分层，吸取上层正 庚烧提取溶液大约5mL，转移到30mL小型试管中，加入大约3g~5g无水硫酸钠，振摇lmin， 静置5min，吸取上层溶液至进样瓶中待测定。往往还需要加入内标物十一碳酸甘油三酯和 焦性没食子酸，操作复杂。由于需要分次加入多种试剂，容易产生误差，影响结果测量准确 性。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种测定简便，精密度高，步骤简 单，数据重复性和复现性好的食品中脂肪定量检测方法。
[0004] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
[0005] -种食品中脂肪定量检测方法，其包括如下步骤：
[0006] (1)检测样品中总脂肪含量W ;
[0007] ⑵脂肪酸甲酯标准溶液：购买的有证标准溶液，包含37种脂肪酸甲酯，每种含量 见下表；
[0008]
[0010] 用ImL正己烷将37种脂肪酸甲酯混合标准溶液从安瓿瓶中完全转移I. 5mL进样 瓶中，待用；
[0011] (3)脂肪酸甲酯化及试样的脂肪酸甲酯样液的制备
[0012] a称取混匀的核桃仁样品0. 5g，置于50mL具塞离心管内，加入0.1 mL的I : 1盐 酸，IOmL正己烧，充分振荡3min，小心开塞放出气体，7000转/min，离心10min，用胶头滴管 小心吸取上清液于具塞试管中，得到正己烷-脂肪液，备用；
[0013] b取2. OmL步骤（a)中制得的正己烷-脂肪液，于IOml具塞刻度试管中，加入 0. 8mL的0. 5% KOH-甲醇溶液，在漩涡混合器中充分振荡2min，静置2min，吸取上清液，得 到脂肪酸甲酯样液；
[0014] (4)色谱测定
[0015] 取步骤（2)中的脂肪酸甲酯标准溶液，注入气相色谱仪，在色谱条件下测定标准 溶液的峰面积，得到每种脂肪酸甲酯的相对保留时间，计算出响应因子；
[0016] 取步骤（3)中制备的试样的脂肪酸甲酯样液，分别在色谱条件下测定，得到试样 溶液中各脂肪酸甲酯的峰面积百分比；
[0017] (5)根据总脂肪含量W，每种脂肪酸甲酯的响应因子，试样溶液中各脂肪酸甲酯的 峰面积百分比，计算得出样品中各脂肪酸的含量。
[0018] 作为本发明进一步的改进，所述步骤⑴检测样品中总脂肪含量按照GB/T 5009. 6-2003《食品中脂肪的测定》中第二法酸水解法计算。
[0019] 作为本发明进一步的改进，所述的色谱条件为：
[0020] 进样 口温度：270°C;
[0021] 检测器温度：280 °C ;
[0022] 柱箱程序升温：初始温度：130 °C，持续Imin ; 130 °C~170 °C，升温速率6. 5 °C / min ;170°C~215°C，升温速率 2. 75°C /min ;215°C，保持 12min ;215°C~230°C，升温速率 4°C /min ;230°C保持3min检测结束；
[0023] 载气：氮气
[0024] 分流比：20 : 1
[0025] 进样量：1. 0 μ L。
[0026] 与现有技术相比，本发明所取得的有益效果如下：
[0027] 此方法在脂肪酸的提取和甲酯化步骤上，比GB/T22223-2008更简便，无需国标方 法中要求加入氢氧化钠溶液、三氟化硼甲醇溶液、正庚烷、饱和氯化钠溶液等试剂，操作简 便只需在常温下即可反应，且数据重复性和复现性好，精密度高，步骤简单，减小了提取或 甲酯化不完全、内标物配制等多方面引起的误差，引入误差的因素少。
【附图说明】
[0028] 图1脂肪酸甲酯标准溶液的色谱图；
[0029] 图2脂肪酸甲酯样液的色谱图。
【具体实施方式】
[0030] 以下结合具体实施例对本发明进行进一步详细的叙述。
[0031] 实施例1
[0032] 试剂和溶液
[0033] 盐酸（36% -38% )
[0034] 无水乙醚
[0035] 石油醚：沸程 30°C _60°C
[0036] 乙醇（95% )
[0037] 甲醇
[0038] 正己烷：色谱纯
[0039] 无水硫酸钠
[0040] 1 : 1盐酸（体积比）
[0041] 脂肪酸甲酯标准溶液（37种）：购买的有证标准溶液，包含37种脂肪酸甲酯，每种 含量见下表；
[0042]
[0044] 氢氧化钾-甲醇溶液（0· 5% ):将0· 5g氢氧化钾溶于IOOmL含水不超0· 5% (质 量分数）的甲醇。
[0045] 仪器与设备：
[0046] 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器（FID)
[0047] 色谱柱：HP-INN0WAX (30m*0. 32mm，0· 25 μ m)或同等极性色谱柱
[0048] 分析天平：感量0· Img
[0049] 恒温水浴锅：（40 °C -100 °C ) ± I °C
[0050] 漩涡混合器
[0051] 高速离心机：7000r/min以上
[0052] 具塞量筒：IOOmL
[0053] 具塞刻度试管：IOmL
[0054] 色谱参考条件：
[0055] 进样 口温度：270°C
[0056] 检测器温度：280 °C
[0057] 柱箱程序升温：初始温度：130°C，持续Imin ;
[0058] 130 cC ~170 cC，升温速率 6. 5 cC /min ;
[0059] 170 cC ~215 cC，升温速率 2. 75 cC /min ;
[0060] 215Γ，保持 12min ;
[0061] 215°(：~230°(：，升温速率4°(：/1^11
[0062] 230°C保持3min检测结束。
[0063] 载气：氮气
[0064] 分流比：20 : 1
[0065] 进样量：1. OyL
[0066] 从市场上购得的核桃采用下列方法测量其脂肪酸含量：
[0067] (1)按照GB/T 5009.6-2003《食品中脂肪的测定》中第二法酸水解法测定样品中 总脂肪含量W。
[0068] (2)脂肪酸甲酯标准溶液：用 ImL 正己烷将 C4 :0、C6 :0、C8 :0、C10 :0、C11 :0、C12 : 0、 C13 :0、C14 :0、C14 :1、C15 :0、C15 :1、C16 :0、C16 :1、C17 :0、C17 :1、C18 :0、C18 :1、C18 : 1、 C18 :2、C18 :2T、C18 :3、C18 :3、C20 :0、C20 :1、C21 :0、C20 :2、C22 :0、C22 :1、C20 :3、C20 : 3、C20 :4、C23 :0、C22 :2、C24 :0、C20 :5、C24 :1、C22 :6 这 37 种脂肪酸甲酯混合标准溶液分 别从安瓿瓶中完全转移I. 5mL进样瓶中，在冰箱中冷藏可保存一周。
[0069] (3)脂肪酸甲酯化及试样的脂肪酸甲酯样液的制备
[0070] a称取混匀的核桃仁样品0. 5g，置于50mL具塞离心管内，加入0.1 mL的I : 1盐 酸，IOmL正己烧，充分振荡3min，小心开塞放出气体，7000转/min，离心10min，用胶头滴管 小心吸取上清液于具塞试管中，得到正己烷-脂肪液，备用；
[0071] b取2.0mL步骤（a)中制得的正己烷-脂肪液，于IOml具塞刻度试管中，加入 0. 8mL的0. 5% KOH-甲醇溶液，在漩涡混合器中充分振荡2min，静置2min，吸取上清液，得 到脂肪酸甲酯样液；
[0072] (4)色谱测定
[0073] 取步骤（2)中的脂肪酸甲酯标准溶液，注入气相色谱仪，在色谱条件下测定标准 溶液的响应值（峰面积），得到每种脂肪酸甲酯的相对保留时间，计算出响应因子；图1为 脂肪酸甲酯标准溶液的色谱图，保留时间见表1。
[0074] 表1脂肪酸甲酯标准溶液中各标准物质的保留时间 [0075]
[0076]
[0077] 取步骤(3)中制备的试样的脂肪酸甲酯样液，分别在色谱条件下测定，得到试样 溶液中各脂肪酸甲酯的响应值（峰面积百分比）；图2为脂肪酸甲酯的样液的色谱图。