微生物油的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种微生物油的制备方法。
【背景技术】
[0002] 多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid,PUFA)是指含有两个或两个W上 双键的脂肪酸，一般含18~22个碳原子。工业化的PUFA大多由真菌、藻类等单细胞微生物产 生，故也称为微生物油。
[0003] 多不饱和脂肪酸因其结构特点主要分为CO-3及CO-6两个系列。CO-3系列包括十八 碳S締酸(俗称a-亚麻酸，ALA)、二十碳五締酸(EPA)、二十二碳六締酸(DHA)。CO-6系列包括 十八碳二締酸(俗称亚油酸，LA)、十八碳S締酸(俗称丫-亚麻酸，GLA)、二十碳四締酸(俗称 花生四締酸）。多不饱和脂肪酸是人体细胞膜憐脂的主要成分，对细胞膜功能有决定性影 响。一些特定的多不饱和脂肪酸如花生四締酸和DHA是脑和视网膜中两种主要的多不饱和 脂肪酸，特别对于胎儿和婴幼儿影响显著，摄入不足可能导致脑功能和视神经发育障碍。
[0004] 工业化生产得到的微生物油主要是W甘油醋的形式存在。甘油醋是甘油与脂肪酸 醋化而成的化合物，根据反应程度的不同，分为甘油一醋(单甘醋、MG)、甘油二醋(双甘醋、 DG)、甘油S醋(甘S醋、T口。其中，甘油S醋(TG)由3分子脂肪酸和1分子甘油醋化而成，是 体内能量的主要来源，也是自然界各类生物体内油脂储存的主要形式。甘油二醋(DG)是由2 分子脂肪酸与1分子甘油醋化得到的产物，是油脂的天然成分，也是油脂在人体内代谢的中 间产物。同时，甘油二醋还是细胞内肌醇憐脂信号传递途径的中间物质。
[0005] 工业化生产得到的微生物油很多都是功能性或针对性很强的油脂，一般用于大众 消费品如乳制品的添加剂或营养强化剂，很少直接食用。由于其富含多不饱和脂肪酸，很容 易被氧化而导致风味恶化，因此其在用作食品添加剂或营养强化剂时，通常需要先进行微 胶囊包埋处理。微胶囊包埋主要是将微生物油忍材与适当材料及水混合、剪切、均质、乳化 后，在喷雾干燥的同时加入壁材(例如麦芽糊精等)进行包埋，使油脂被紧密包裹于壁材中。 运样的微胶囊产品既可W防止油脂被氧化，又能改善产品的风味和口感。通常情况下，油脂 的乳化性能越强，则包埋效果越好，所生产出来的微胶囊风味和稳定性也越好。
[0006][0007] 因此，提供一种改进的微生物油实为必要。
【发明内容】
[000引本发明的主要目的是提供一种制备上述微生物油的方法。
[0009]本发明的次要目的是提供一种具有良好包埋效果、表面油含量低的微胶囊。
[0010] 为达到上述主要目的，本发明提供一种微生物油的制备方法，所述微生物油中，多 不饱和脂肪酸的含量大于30wt%，甘油S醋含量小于90wt%，甘油二醋含量不低于5wt%且不 高于20 Wt %，所述制备方法包括W下步骤：（1)利用产油微生物发酵得到富含多不饱和脂 肪酸的生物油的发酵液；（2)收集富含多不饱和脂肪酸微生物油的菌体，萃取过滤后得到 混合油；（3)在混合油中加入脂肪酶和水进行酶解，纯化后得到微生物油。
[0011] 上述方案中，步骤(2)收集菌体之前，将发酵液通过离屯、或者压滤方式实现固液分 离。
[0012] 上述方案中，在步骤(3)之后对微生物油进行精制。
[0013] 上述方案中，步骤(3)中，酶解参数包括:在脂肪酶最适溫度下揽拌反应0.5~2小 时，脂肪酶用量为混合油质量的0.25wt%~2wt%，水用量为混合油质量的15wt%-30 wt%。
[0014] 上述方案中，步骤(3)中，的纯化工艺包括分离水相和油相;过滤除去脂肪酶，蒸发 除去溶剂;分子蒸馈设备除去游离脂肪酶。
[0015] 本发明的微生物油的制备方法具有如下有益效果： 使用该方法制备的微生物油中含有适量的甘油二醋，由于甘油二脂具有较好的乳化性 能，其有利于微生物油形成稳定的乳化液。在制备微胶囊的过程中，能使微生物油更好地被 包埋，进而可降低微胶囊的表面油含量，提高微胶囊的抗氧化能力，并可适度延长微胶囊的 货架期，有利于后续进一步的生产及利用。
【具体实施方式】
[0016] W下实施例更详细的说明本发明的微生物油生产及应用方法。
[0017]实施例一 W高山被抱霉为出发菌种，详细描述本发明含有花生四締酸的微生物油的生产及应 用。
[001引1.发酵 配制葡萄糖含量为0.03g/mL、酵母粉含量为0.02g/mL的培养基溶液于500ml摇瓶中，可 配制多瓶，灭菌后接入适量高山被抱霉菌丝及抱子，置于28 °C恒溫摇床，150巧m，2天后合并 摇瓶，移入已灭菌的、盛放有葡萄糖含量为0.03g/mL、酵母粉含量为0.02g/mL的培养基溶液 的Im 3发酵罐(一级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28±2°C。一级种子罐培养 2天后，将全部培养液移入已灭菌的、盛放有葡萄糖含量为0.03g/mL、酵母粉含量为0.02g/ mL的培养基溶液的IOm3发酵罐(二级种子罐）中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28±2 °C。二级种子罐培养1天后，将全部培养液移入已灭菌的、盛放有葡萄糖含量为0.05g/mL、酵 母粉含量为0.02g/mL的培养基溶液的45m 3发酵罐中，持续通入无菌空气，保持培养溫度28 ±2°C，根据葡萄糖消耗速度分批补加总量约0.02~0.05g/mL培养基溶液的灭菌葡萄糖溶 液，再培养7天后可获得发酵产物，其中生物质含量32g/L、菌体干基中总油含量51.9wt%、总 油中花生四締酸含量50.4wt%。
[0019] 2.制备富含花生四締酸的微生物油 可采用W下不同的工艺手段制备本发明的微生物油。
[0020] 手段一 将发酵产物通过离屯、或压滤方式实现固液分离，收集湿菌体，利用粉碎机破碎，再通过 沸腾干燥塔烘干，得到干菌体。将干菌体与有机溶剂如下烧或己烧混合浸泡萃取，过滤后得 到混合油。
[0021] 向混合油中加入市售脂肪酶和水进行酶解处理，该市售脂肪酶具有将甘油醋水解 的功能，下述实施例均与此相同。所述的酶解处理参数包括:脂肪酶用量为微生物混合油重 量的0.25wt%;水用量为微生物混合油重量的15wt%，反应溫度约37°C，揽拌反应时间0.化。 酶解反应结束后对混合油进行纯化，纯化的具体步骤包括:将混合油静置，待油相与水相分 层后，除去水层，过滤除去酶，蒸发脱除溶剂，通过分子蒸馈设备除去游离脂肪酸，得到微生 物粗油。测得该粗油具有如下指标:多不饱和脂肪酸含量61.5wt%，TG含量88.7wt%，DG含量 5.5wt%〇
[0022] 更进一步的，对上述微生物粗油进行精制，精制的步骤包括：将该微生物粗油经 2.5wt%巧樣酸和5wt%热水脱胶、过量氨氧化钢溶液脱酸，沉降分离，过滤后再用5wt%二氧化 娃及3wt%活性炭脱色，再次过滤后，在200°C的条件下直接蒸汽脱臭，添加 Vc栋桐酸醋和Ve 作为抗氧化剂，得到含有花生四締酸的微生物精制油。经测定，该精制油中多不饱和脂肪酸 总含量62.0 Wt %，TG含量为89.8 Wt %，DG含量为6.3 Wt 〇/〇。
[0023] 进一步测定该微生物精制油的部分理化指标:不皂化物1.1 wt%，水分0.01 wt%， 不溶性杂质0.01 Wt%，溶剂残留<1.0 mg/kg，酸价0.1 m排OH/g，过氧化值0.03 meq/kg，反 式脂肪酸0.06 wt%，黄曲霉毒素 BK5.0]ig/kg，总神（WAs计)<0.1 mg/kg，铅<0.1 mg/kg。
[0024] 手段二 该工艺手段与手段一基本相同，不同之处在于酶解处理工艺参数:脂肪酶用量为微生 物混合油重量的0.5wt%，水量为微生物混合油重量的20wt%，反应时间为化。得到的微生物 粗油中，多不饱和脂肪酸含量61.7wt%，TG含量87.0wt%，DG含量7.2wt%。
[0025] 使用与手段一中相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微生物精制油 中，多不饱和脂肪酸总含量61.5wt%，TG含量88.4wt %，DG含量8. Swt %，其他理化指标与手 段一获得的理化指标接近。
[002引手段立 该工艺手段与手段一基本相同，不同之处在于酶解处理工艺参数:脂肪酶用量为微生 物混合油重的Iwt%，水量为微生物混合油重的20wt%，反应时间为1.化。得到的微生物粗油 中，多不饱和脂肪酸含量60.0wt%，TG含量84.0wt%，DG含量10.5wt%。
[0027]使用与手段一中相同的精制工艺对本微生物粗油进行精制，得到的微生物精制油 中，多不饱和脂肪酸总含量61wt%，TG含量为85.3wt %，DG含量为11.4wt %，其他理化指标与 手段一获得的理化指标接近。<