专利名称：微粒吸附沉降免疫法的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种免疫学检测法,特别是用致敏胶乳(或其他免疫微粒)与待 测物结合或与待测物竞争形成微粒免疫复合物，用致敏血球(或其他更易使其沉降的 免疫微粒)与微粒免疫复合物结合并沉降，再检测上层液中的浊度、微粒计数或其他 显示值的免疫检测法。
背景技术：
免疫微粒技术特指用适宜材料制成一定粒度大小的微粒作为载体,包被上 免疫活性物,使其成为致敏免疫微粒(包括致敏的血球、胶乳微粒、金黄色葡萄球菌 和其他微粒等)，用于免疫学检测。己知的凝集试验(比如血球凝集和胶乳凝集)主 要通过观察致敏免疫微粒与待測物反应或竞争反应发生的凝集现象，做定性或半定量 检测胶乳凝集试验中的浊度法和计数法可以定量，但需较昂贵的仪器。这些凝集试 验均未将凝集颗粒和未凝集颗粒分开，也未引入标记物来显示或放大结果，故只能用 计数法或浊度法来定量。现有的微粒固相免疫法的原理是以微粒为载体，在液相中捕 获待测物。比如用特异性抗IgE抗体包被的免疫微粒吸附待测标本中的可溶性抗原 IgE，再加入荧光素(标记物)标记抗IgE抗体与微粒上免疫复合物中的抗原IgE结 合。除去多余的荧光抗休后，通过荧光仪测定，測得的荧光强度显示值与标本中待测 物浓度成正相关；但该法需离心洗涤以除去游离的荧光抗体。本发明的目的是用免疫微粒(标记或未标记)与待測物结合或与待测物竞争形成 微粒免疫复合物，另用免疫微粒使微粒免疫复合物沉降，再检测上层液(或沉淀)中 未被结合(或己被结合)的免疫微粒(可用多种常用仪器测定显示值、浊度或计数微 粒)；建立一种适用范围更大、可定量，可不用离心洗涤的简便免疫检测法。本发明的目的是这样实现的，综合现有的凝集试验(血球、胶乳、金葡萄球菌等)、 微粒固相吸附等方法，主要改进之点l.用包被物致敏的免疫微粒(胶乳等)与待测 物结合或与待测物竞争形成微粒免疫复合物；包被物或免疫微粒可用标记物(酶、荧 光素、化学发光物或同位素等)标记2.用包被物致敏的更易使其沉降的免疫微粒(血 球、磁性微粒等)与胶乳微粒免疫复合物结合，加速后者沉降；再检测上层液中反映 剩余胶乳微粒(可带标记物)的浊度、显示值或计数。本法主要过程如下(l)用致
敏胶乳微粒与待测物结合或与待测物竞争形成胶乳微粒免疫复合物；(2)加入致敏血 球(或其他更易使其沉降的微粒)使其与胶乳微粒免疫复合物上的抗原或抗体结合，加 速微粒沉降；以上两步也可合为一步；(3)待反应液中血球自行沉降(或经磁场、离 心沉降)，使结合的胶乳微粒免疫复合物也沉降，检测上层液中剩余的胶乳微粒(可 带标记物)的浊度或其他显示值或计数，再从反应标准曲线查出标本中待测物浓度。 本法的原理是致敏血球等微粒的沉降速率大于胶乳微粒，故血球等与胶乳微粒结合可 加速后者沉降，使结合的胶乳微粒免疫复合物与未结合的胶乳微粒得以分离。也可测 沉淀中标记物显示值。或用包被物自身作微粒载休(使载休和免疫活性物成同一物)， 这样有利于保持某些物质(比如双链DNA)的自然构象。本发明的特点是胶乳微粒(或其他微粒)数量多，表面吸附面积大，在液相中抗 原抗体易碰撞，反应快速，敏感性高；另用血球(或其他更易使其沉降的微粒)加速 胶乳微粒沉降可縮短反应时间，提高敏感性检测上层液中剩余的胶乳微粒(可带标 记物)浊度、计数或其他显示值，无需洗涤，简化了操作，并进一步提高了敏感性。下面结合实施例对本发明进一步说明，以下所说致敏胶乳、致敏血球和磁性微粒 均用通常材料和方法制成。实施例(一)用微粒吸附沉降免疫法测血淸中抗双链DNA抗休 ()将双链DNA制成DNA微粒(粒径约5 n ml 20 n ra); (2)加入酶标记金葡萄 球菌菌体试剂和待测标本，混匀反应，使标本中的IgG、抗双链DNA抗体(属于IgG) 和金葡萄球菌上的SPA蛋白结合形成复合物I ， (3)加入DNA微粒；使DNA微粒和复 合物I上的抗双链DNA抗体UgG)结合形成复合物II; (2) (3)可合为一步；(4) 待复合物II自行沉降，吸取适量上层液于另一微孔板中，检测浊度、计数，或加入显 色液、终止液，测定吸光度，测得的吸光度与标本中复合物I或抗双链DNA抗体浓度 成反相关；(5)再从反应标准曲线查出标本中抗双链DNA抗体含量。实施例(二)用竞争微粒吸附沉降免疫法检测抗双链DNA抗休 (])加入双链DNA、待测标本和已包被酶标抗双链DNA抗休的胶乳(粒径约O. 1 Ura 2tim),混匀反应(2)加入已包被抗双链DNA抗体的血球，待血球自行沉降； (1) (2)可合为一步(3)检测上层液的浊度、计数或其他显示值，再从反应标准 曲线査出标本中抗双链DNA抗体含量。实施例(三)用竞争微粒吸附沉降免疫法检测甲胎蛋白
(1)加入待测标本、己包被甲胎蛋白的胶乳(用辣根过氧化酶标记，粒径约O. 1 Pm 2pm)和抗甲胎蛋白抗体(兔抗人)，混匀反应-，(2)加入已包被羊抗兔IgG的 血球，待血球自行沉降；(1) (2)可合为一步；(3)检测上层液的浊度、计数，或加 入显色液、终止液，测定吸光度；(4)再从反应标准曲线査出标本中甲胎蛋白含量。 实施例(四)用微粒吸附沉降免疫法检测IgE (])加入已包被酶标抗:!gE抗体的胶乳(粒径约0, 1 u m 2 P m)和待测标本， 混匀反应(2)再加入过量的己包被抗IgE抗体的血球，待血球自行沉降；(3)吸取 适量上层液于另一微孔板中，加入显色液、终止液，测定吸光度，测得的吸光度与标 本中IgE浓度成反相关；再从反应标准曲线査出标本中IgE含量。实施例(五)用竞争微粒吸附沉降法检测尿微量白蛋白 (l)加入待测尿液、胶乳(粒径约O. 1 um 2um，用荧光素标记的人白蛋白致敏) 和兔抗人白蛋白抗体,混匀反应；(2)加入血球(用羊抗兔IgG致敏)，待血球自行沉 降；吸取适量上层液于微孔板中，通过荧光仪测定，测得的荧光强度与尿中白蛋白浓 度成反相关；再从反应标准曲线査出标本中白蛋白含量。实施例(六)用竞争微粒吸附沉降免疫法检测促甲状腺素(1)加入待测标本、已包被促甲状腺素的胶乳(用辣根过氧化酶标记，粒径约 0. l!im 2um)和抗促甲状腺素抗休(兔抗人)，混匀反应(2)加入已包被羊抗兔 IgG的磁性微粒，反应后置磁场中使磁性微粒胶乳微粒复合物沉降；(1) (2)可合 为一步(3)检测上层液的浊度、计数，或加入显色液、终止液，测定吸光度；(4) 再从反应标准曲线查出标本中含量。
权利要求
1一种免疫学检测法和相应试剂盒，其特点是用免疫微粒与待测物结合或与待测物竞争形成微粒免疫复合物；另用免疫微粒使微粒免疫复合物沉降；检测上层液中剩余的免疫微粒的数量或显示值变化，查出待测物含量。
全文摘要
一种免疫学检测法和相应试剂盒，综合现有的凝集试验、微粒固相吸附等方法，其主要过程如下(1)用致敏胶乳微粒(可带标记物)与待测物结合或与待测物竞争形成胶乳微粒免疫复合物；(2)加入致敏血球(或其他更易使其沉降的微粒)使其与胶乳微粒免疫复合物结合，以使胶乳微粒免疫复合物沉降，使结合的胶乳微粒免疫复合物与未结合的胶乳微粒得以分离；(3)待反应液中血球或磁性微粒等沉降，再吸取适量上层液于微孔板中，检测上层液剩余胶乳微粒的浊度或其他显示值变化，从而定量检测。
文档编号G01N33/546GK101153873SQ20061014175
公开日2008年4月2日 申请日期2006年9月30日 优先权日2006年9月30日
发明者徐伊犁 申请人:徐伊犁