专利名称：组织蜡块中目标组织碳芯多维定位的方法及产品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种对照苏木素伊红染色切片，在组织蜡块中精确定 位目标组织细胞和钻取组织芯的方法，更具体地，涉及一种组织蜡块 中目标组织碳芯定位技术精确获得肿瘤组织的方法。二、 背景技术随着组织学、病理学的发展，人们对人体或其他动植物的认识， 从解剖学上的器官水平向组织、细胞水平发展。但由于完整的器官很 难用显微镜观察，因此需要把器官切成很薄的切片进行染色观察，为 了解决这个问题，出现了组织学技术。该方法的原理是通过把器官切 成小块组织，用福尔马林固定后，利用酒精脱去该组织中的水分，再 浸入二甲苯或苯溶液脱去酒精，最后组织块浸入熔化石蜡溶液中脱去 二甲苯，放入模具内用石蜡溶液进行包埋，冷却后形成石蜡块。该石 蜡块利用切片机进行切片，把蜡片裱于玻璃片上再进行烤片、脱蜡， 染色、封片后就可以用显微镜进行观察研究。目前，组织学技术不仅 是单纯染色显微镜观察，还出现了各种特殊染色、免疫组织化学技术、原位杂交技术、原位PCR技术。近年来随着基因组学、蛋白组学研究发展，人们研究的生理和疾病已逐歩从分子水平向细胞水平及组织水平发展，因此，如何利用组 织开展研究，是目前研究中所要解决问题之一。采用传统组织技术的 研究方法，由于组织标本需要量大，实验工作量大，难以适应研究的 学要。近年来，出现了组织微阵列芯片技术，解决了上述问题。该技 术将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上 (通常是载玻片)而制作成微縮组织切片，其基本操作程序(如图1 所示)包括设计并拟定组织芯片的分类系列、核对组织或有关疾病 的病理诊断、组织定位、阵列蜡块的制作、再从源蜡块上钻取组织 并转移到空白石蜡块的相应位置、组织芯片切片。组织芯片的特点有: 体积小、信息含量大、高通量;减少或避免了对原始组织蜡块的破坏；组织样本的定位准确，减少无效组织;批量制作及可能的结果分析自动化；不同来源的病例的处理、染色和分析条件相同。组织芯片技术的发明给组织学、病理学的发展带来了极大促进。 该技术的难点就是组织定位和从源病理蜡块上钻取组织芯，这步操作 失误就会出现"无效组织"问题。"无效组织"问题是指对最终的组 织芯片进行苏木苏伊红染色病理复诊确认每一点是否与阵列设计所 需的组织类型一致，如果该点为间质纤维血管组织而不是计划设计的 肿瘤组织，则该点组织就为"无效组织"不能被试验分析，如果"无 效组织"占组织芯片中的点数较多，就会极大降低组织芯片的应用价 值。造成"无效组织"的其主要原因为，组织蜡块在制作染色切片时，石蜡块先在-2(TC冰箱预冷，然后进行石蜡组织切片，其厚度只有4 6微米受到刀片的挤压会产生不同程度的收縮，再置于39。C 44。C较高的水温中展片切片又会不同程度的放大，这样最后制作好的染色切 片与石蜡中组织形态大小有差异，病理专家在染色切片上诊断和标记 肿瘤组织的范围，参照染色切片上圈定的范围与病理蜡块中的组织进 行比较确定肿瘤组织的位置，这时就很容易发生失误将原本排除在外 的非肿瘤组织选入。三、发明内容本发明的目的是提供一种高效、简便、低成本，利用碳芯组织定 位技术精确获得目标组织的方法，以克服上述中的不足之处。本发明 的主要构思是，组织在蜡块中只占一部分而周围都是空白石蜡，在空白石蜡固定的位置上放置3 5个不同直径的碳芯，这些碳芯不影响组 织切片，在进行切片时如果组织受到挤压变形那么固定位置的碳芯也 会产生相同的变形，在制作成HE染色切片后，病理复诊在其上用标 记笔将目标肿瘤组织圈出，根据圈出部位到定位碳芯的距离及碳芯的 位置变量，通过人工估算或计算机图像扫描采集软件对HE染色片和 石蜡块进行比对很容易在石蜡块上确定目标肿瘤组织的位置，这样就 能精确的取到目标肿瘤组织，极大提高组织芯片的产品合格率。炭芯的制备方法首先选择优质木炭，将其切割成15X15X15 毫米大小的块状，然后放入组织脱水框中按照常规组织脱水、透明、 浸蜡包埋程序处理，即按以下试剂流程处理①无水酒精1缸1小 时，②无水酒精2缸2小时，(D二甲苯l缸l小时，④二甲苯2缸2 小时，⑤62度石蜡1缸中2小时，⑥62度石蜡2缸中2小时，最后在石蜡包埋机上制作成木炭蜡块，用不同直径的空心针制作不同直径的炭芯，常用炭芯的直径为0.6毫米，l.O毫米，1.5毫米，2.0毫 米，2.5毫米或3.0毫米。这些作好的炭芯可以用于组织块中目标肿 瘤组织的定位，在组织蜡块上放置碳芯的方法可以有以下2种1、 模具种植包埋碳芯法普通组织包埋使用的不锈钢模具其内表面是平整的，可以对该不 锈钢模具进行处理，在其内部底面的四个角上可分别制作3-5个的凹 槽， 一般为四个凹槽。前述四个凹槽，每个凹槽距离两边边框的距离 分别为3毫米，该凹槽的深度可以为0.5毫米到2毫米之间的一个数 值，凹槽的直径可以为0.6毫米，1.0毫米，1.5毫米，2.0毫米，2.5 毫米或3.0亳米。如图2所示该不锈钢模具(1)上有直径1.0毫米 凹槽(2) 2个，1.5毫米凹槽(3) l个，2.0毫米凹槽(4) l个，共 4个凹槽，而且每个凹槽距离边框3毫米，深度为1.0毫米，在包埋 时，先将长度(一般为5毫米)直径适宜的碳芯放入对应的凹槽中， 然后放入脱水处理好的肿瘤组织块，放上脱水塑料框，灌注石蜡，冷 却，将蜡块从不锈钢模具中取出，如图3所示制作成一个有固定位置 碳芯的组织蜡块了。2、 组织蜡块定位取芯置换法肿瘤组织蜡块可使用普通方法制作，制作好后可以用组织阵列仪 进行二次加工，在组织周围的空白蜡处准确的植入碳芯，如图3所在在一个病理组织蜡块中分别置入了直径1.0毫米碳芯2个，1.5毫米 碳芯1个，2.0毫米碳芯1个，共4个碳芯，也可使用长度固定的塑 料框确定碳芯位置，打孔植入碳芯。放入碳芯后的组织蜡块还要置于 51度的烘箱中烘烤4个小时，使碳芯和组织阵列紧密融合。采用上述两种方法制作了放入炭芯的肿，组织蜡块后就可以按 照普通病理操作进行石蜡切片，苏木素伊红染色，病理诊断和目标肿 瘤组织的标记，在染色切片上计算目标肿瘤组织到四个炭芯的距离， 就可以轻松精确地计算出组织蜡块中目标肿瘤组织的位置，从而确保 组织芯片制作取芯的准确性。
图1组织芯片制作基本流程 图2带凹槽的不锈钢模具 图3标记好炭芯的组织蜡块
权利要求
1. 一种组织蜡块中目标组织碳芯多维定位的方法，其特征在于包括以下步骤A)制备炭块蜡块；B)在炭块蜡块中钻取炭芯；C)炭芯包埋入组织石蜡块，制备炭芯定位组织蜡块；D)炭芯定位组织蜡块切片染色，以炭芯为坐标定位目标组织。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的制备碳块石 蜡块包括以下步骤A) 选取15X15X15毫米的炭块；B) 碳块经脱水、透明、浸蜡、包埋后制备碳块蜡块。
3、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述及的炭芯直径 可以是0.6毫米、1.0毫米、1.5毫米、2.0毫米、2.5毫米或 3.0毫米，长度为3至15毫米。
4、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述炭芯包埋入组 织石蜡块包括以下步骤A )将炭芯植入设有凹槽的包埋模具的凹槽中； B)在炭芯旁放入待包埋的组织，灌注石蜡。
5、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述炭芯包埋入组 织石蜡块包括以下歩骤A) 在组织石蜡块组织周围的空白蜡处打孔；B) 上述空中植入炭芯；C ) 植入碳芯后的组织蜡块进行烘烤。
6、 根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述烘烤的条件为 51度，4个小时。
7、 根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述及的设有凹槽 的包埋模具底面设有深度为0.5毫米到2毫米之间的任意一 个数值的4个凹槽。
8、 根据权利要求7所述的包埋模具，其特征在于所述及的凹槽 直径可为0.6毫米、1.0毫米、1.5毫米、2.0毫米、2.5毫米 或3.0毫米。
9、 根据权利要求8所述的包埋模具，其特征在于所述及的4 个凹槽位于包埋框底面的四个角，每个凹槽距离边框3毫 米。
10、 一种炭芯多维定位组织蜡块，包括石蜡及包埋中的组织，其 特征在于所述蜡块中，包埋有3至5根炭芯，炭芯直径可以 是0.6毫米、1.0毫米、1.5毫米、2.0毫米、2.5毫米或3.0毫米，长度为5毫米。
全文摘要
本发明公开了一种组织蜡块中目标组织碳芯多维定位的方法及产品，利用该方法可准确的寻找出组织蜡块中的目标组织，该方法可提高制备组织芯片的效率。
文档编号G01N1/30GK101275889SQ200710038478
公开日2008年10月1日 申请日期2007年3月26日 优先权日2007年3月26日
发明者张宝峰, 郜恒骏 申请人:上海芯超生物科技有限公司