专利名称：一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法
技术领域：
本发明属唾液中检测酒精领域，特别是涉及一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法。
背景技术：
酒精检测的社会应用已很广泛，而近年来，酒后引起的刑事案例和酒后驾车引起的交 通事故案例不断上升。许多国家都制定了血液中酒精浓度与交通事故责任认定的关系，建 立了多种能够检测血液中酒精含量的方法。但在实际中，取血样检测酒精含量，总有卫生 安全隐患，因而更青睐于取唾液进行酒精检测。目前，出现了很多便于携带的检测试剂条，如公开号为CN1837821A和CN1904619A，它们都利用了以下，原理CH3CH2OH+02 CH3CHO+ H202H202+还原态TMB (无色)， > 氧化态TMB (蓝色)+H20ALO:酒精氧化酶 HRP:辣根过氧化物酶 TMB: 3,3'5,5，-四甲基联苯月安但对于高酒量人群，在酗酒以后，检测结果会出现反而降低的现象，因此在执行交通 法规的检测时，作为处罚的依据反而难以执行。 发明内容本发明的目的是提供一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，该方法能改善上述 问题，清除测定高酒量人群中的抑制反应，使反应结果更准确。本发明的一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，包括下列步骤(1) 滤纸在第一相浸液中浸泡后，吸去过多的浸液，20-30。C迅速温热干燥，再在第二相 浸液中浸泡，20-3(TC再次千燥，得到测定试纸的原纸；(2) 用双面胶将上述测定试纸的原纸粘贴在塑料片上，切割成小块的测定试纸条。 所述的第一相浸液总体积为10mL的配制过程如下1) 配pH7.2的0.1 mol/L 2 mol/L Tris-丙二酸缓冲液或pH7.8的0.5 mol/L PB(磷酸盐缓冲 液)；2) 溶入乙醇氧化酶，10mL缓冲液中含有10 200iu;3) 溶入辣根过氧化物酶，10mL缓冲液中含有200 5000iu;4) 溶入乙醛脱氢酶，10mL缓冲液中含有2 100iu， NAD+0.01-0.1g;5) 溶入稳定剂和保护剂，浓度0.1%~3% (g/100mL)。所述的稳定剂和保护剂是天然或人工聚合高分子胶体，是明胶、阿拉伯胶、牛血清白 蛋白、聚乙二醇、聚丙烯酸-丙烯酸酯中的一种或几种混合物。所述的第二相浸液是采用3,3'5，5'-四甲基联苯胺显色剂，溶于有机溶剂，浓度为0. 2.~1.5% (g/100mL)。采用甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲垸、二氯乙烷或二甲基甲酰胺作为溶剂。 所述步骤(2)中的切割成小块的测定试纸条是切割成含有0.4X0.4 0.6X0.6cm的小 块的测定试纸条。 本发明的原理1. CH3CH2OH+02 CH3CHO+ H202 H202+还原态TMB (无色)腳 > 氧化态TMB (蓝色)+H20CH3CHO 她一掘> CH3COOH2. CH3CHO+NAD+ 她—，> CH3COOH+NADHNADH+氯化硝基四氮唑兰^^NAD++还原型氯化硝基四氮唑兰(红色)ALO:酒精氧化酶 HRP:辣根过氧化物酶 TMB: 3,3'5,5'-四甲基联苯胺 Aldehyde-DH:乙醛脱氢酶 NAD+:辅酶I NADH:还原辅酶I本发明的有益效果1) 可以加速反应进程；2) 清除反应产物，有利于反应更完全；3) 当被测样品中含有较高浓度乙醇时，可减少反应物和反应产物的干扰；4) 有利于清除测定高酒量人群中的抑制反应，使反应结果更准确。5) 对于高酒量人群大酒量饮酒后产生的乙醛，通过酶催化显色反应进行测定。
图1是本发明的制备流程图。图2是酒精测定试剂条。图3是酒精和酒精在体内代谢产物乙醛二项测定试剂条。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一歩阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术 人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限 定的范围。实施例11. 配制第一相浸液在pH7.2的0.2mol/L Tris-丙二酸缓冲液lOmL中，溶解100iu的乙醇氧化酶，再加入 辣根过氧化物酶2500iu，搅拌均匀，充分溶解后，再加入乙醛脱氢酶100iu、 NAD+20mg、 20mg明胶(预溶)。2. 以3号whatman定量分析试纸浸湿均匀，取出，吸去多余液体，在28。C下孵箱中吹干。3. 配制第二相浸液称取TMB 100mg，用10mL 二甲基甲酰胺溶解。将已干燥的浸取第一相浸液的滤纸再次在第二相浸液中浸润，迅速取出，在2(TC下孵箱 中吹干。4. 将浸取后的干燥滤纸用双面胶粘贴在塑料卡片上，切成条状，每条长度为8cm，顶部带 有0.5X0.5cm的测定试纸块。(图2)实施例21. 在pH7.8的0.5 mol/L PB缓冲液10mL中，溶解200iu的乙醇氧化酶，再加入辣根过 氧化物酶1000iu，搅拌均匀，充分溶解后，再加入乙醛脱氢酶20iu、 NAD+10mg、终浓度 为3% (w/v)的BSA (牛血清白蛋白)。2. 以3号whatman定量分析试纸浸湿均匀，取出，吸去多余液体，在28。C下孵箱中吹干。3. 配制第二相浸液称取TMB 1 OOmg，用1 OmL 二甲基甲酰胺溶解。将已干燥的浸取第一相浸液的滤纸再次在第二相浸液中浸润，迅速取出，在28"C下孵箱 中吹干。将浸取后的干燥滤纸用双面胶粘贴在塑料卡片上，切成条状，每条长度为8cm， 顶部带有0.5X0.5cm的测定试纸块。(图2)实施例31. 配制乙醛测定试剂块浸液在pH7. 2的0.2 mol/LTris-丙二酸缓冲液10mL中，溶解120iu乙酸脱氢酶、NAD+50mg、 黄递酶60iu和氯化硝基四氮唑兰200mg、牛血清白蛋白100mg。2. 以3号Whatman定量分析试纸浸湿均匀，取出，吸去多余液体，在28'C下孵箱中吹干。3. 将浸取后的干燥原纸用双面胶粘贴在塑料卡片上，作为第二测定块，切成条状。(图3)
权利要求
1. 一种检测唾液中酒精含量及其在体内代谢产物的试剂的制备方法，包括下列步骤(1)滤纸在第一相浸液中浸泡后，吸去过多的浸液，20-30℃迅速温热干燥，再在第二相浸液中浸泡，20-30℃再次干燥，得到测定试纸的原纸；(2)将上述测定试纸的原纸粘贴在塑料片上，切割成小块的测定试纸条。
2. 根据权利要求1所述的检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，其特征在于，所述的 第一相浸液总体积为10mL的配制过程如下1) 酉己pH6.5-8.5的0.1mol/L 2mol/LTris-丙二酸缓冲液或pH7.2-8.0的0.5 mol/L磷酸盐缓 冲液；2) 溶入乙醇氧化酶，lOmL缓冲液中含有10 500iu;3) 溶入辣根过氧化物酶，10mL缓冲液中含有500 10000iu;4) 溶入乙醛脱氢酶，10mL缓冲液中含有2 100iu， NAD+0.01-0.1g;5) 溶入稳定剂和保护剂，浓度0.1%~3% (g/100ml)。
3. 根据权利要求2所述的检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，其特征在于，所述的 稳定剂和保护剂是天然或人工聚合高分子胶体，是明胶、阿拉伯胶、牛血清白蛋白、聚乙 二醇、聚丙烯酸-丙烯酸酯中的一种或几种混合物。
4. 根据权利要求1所述的检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，其特征在于，所述的 第二相浸液是3,3'5，5'-四甲基联苯胺(TMB)显色剂溶于有机溶剂，浓度为0.2% 1.5%(g/100ml)。
5. 根据权利要求4所述的检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，其特征在于，TMB被 溶解在甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲垸、二氯乙烷、二甲基甲酰胺中。
6. 根据权利要求1所述的检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，其特征在于，所述步 骤(2)中的切割成小块的测定试纸条是切割成含有0.4X0.4 0.6X0.6cm的小块的测定试 纸条。
7. 根据权利要求1所述的检测唾液中酒精含量及其在体内代谢产物的试剂制备方法，其 特征在于，所述的测定酒精代谢产物乙醛第一相浸液总体积为10mL的配制过程如下1) 配pH6.5-8.5的0.1mol/L~2 mol/L Tris-丙二酸缓冲液或pH7.2-8.0的0.5 mol/L磷酸盐缓 冲液；2) 溶入乙醛脱氢酶，10mL缓冲液中含有20 200iu， NAD+0.01-0.1g;3) 溶入NAD黄递酶10-100iu;4) 溶入氯化硝基四氮唑兰0.01-0.5g;5)溶入稳定剂和保护剂，浓度0.1% 3% (g/100ml)。
8.根据权利要求7所述的检测唾液中含有的酒精代谢产物乙醛测定试剂块，被切割成含 有0.4X0.4-0.6X0.6cm的小块，并列在测定试剂条上。
全文摘要
本发明涉及一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，包括1)滤纸在第一相浸液中浸泡后，吸去过多的浸液，20-30℃迅速温热干燥，再在第二相浸液中浸泡，20-30℃再次干燥，得到测定试纸的原纸；2)将上述测定试纸的原纸粘贴在塑料片上，切割成小块的测定试纸条。该方法可以加速反应进程；清除反应产物，有利于反应更完全；当被测样品中含有较高浓度乙醇时，可减少反应物和反应产物的干扰；有利于清除测定高酒量人群中的抑制反应；本方法还可以在一根测试条上，同时设置二个测试块，使结果判断更准确。
文档编号G01N33/98GK101271120SQ200810036780
公开日2008年9月24日 申请日期2008年4月29日 优先权日2008年4月29日
发明者孙大尼, 王福进, 管利丰 申请人:上海高丰科技有限公司