专利名称：一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种中药注射剂的检测方法，具体涉及一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法。
背景技术：
5-羟甲基糠醛(又名5-羟甲基-2-糠醛、羟甲基糠醛、5-羟甲基呋喃甲醛或5-羟甲基卩夫[!南甲酸)，英文名 5-hydroxymethyl-2-furfural、5-hydroxymethyl-furfural 或 5-HMF，是一种化学物质。注射剂中特别是含糖的注射剂往往含有杂质5-羟甲基糠醛。一些中药注射剂中因含有糖类物质也可能存在杂质5-羟甲基糠醛，其原因在于中药提取物中含量大量的糖类物质，高温下果糖、葡萄糖及其它糖类物质均易脱水，进一步生成5-羟甲基糠醛及聚合物，可能给机体带来过敏、刺激性。其形成过程中受多种因素的影响，在酸性条件下，加热的时间和温度是首要因素。不论是中药的炮制过程还是注射液的高温灭菌过程均能使5-HMF 的含量呈规律性变化，有时其含量的增加与灭菌温度、时间成正比。另外，高温状态下，存在溶液的电解质价数越高，分解产生的5-HMF量越多ω。目前5-HMF研究主要集中在检测牛乳、果汁、蜂蜜、酒类和药物中5-HMF的含量，其含量的多少是反映这些物品内在质量的重要指标。有研究利用结肠致癌剂造模的45F344雄性大鼠进行实验，结果发现，对糖进行加热后如能产生含量为的5-HMF，就有可能引发并促进结肠小囊异常生长(ACF)m。另有研究显示5-HMF还可产生一定程度的基因毒性，推测其机制可能为5-HMF在体内经过硫化和氯化的过程而产生的致突变作用[5]。此外，5-HMF对人体横纹肌和内脏有毒副作用。5-HMF 由静脉入血后会产生副作用[6]。故在中国药典[7]、中国医院制剂规范[8]中分别限定了葡萄糖、果糖注射液中5-HMF的含量。有关5-HMF的药理作用一直以来存有争议，有报道5-HMF 有一定程度的毒副作用，但近年来研究表明其还具有抗氧化、改善血液流变学等对人体有利的作用。5-HMF的检测方法和含量测定方法的研究也较多，其在处有最大吸收。 UV-可见分光光度法[9]是较为普遍的测定方法。近年来HPLC的应用克服了 5-HMF和其他成分在同一波长处084nm)有吸收的问题，从而能够更准确的测定其含量和控制注射液的质量。由于中药注射液和含糖的注射剂是临床常用的制剂，其质量的优劣直接关系到人民的身体健康，因此药典中对其相关杂质含量作出了明确规定。如5-羟甲基糠醛(5HMF) 的含量，一直以来，生产中对5-HMF的控制或工艺上掌握不好，严重超标。因此控制注射剂中杂质5-羟甲基糠醛的含量是一项重要课题。
发明内容
本发明提供了一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法，该方法简捷、快速、准确，可以适用于任何可能含有5-羟甲基糠醛的注射剂，包括注射液，注射乳剂和粉末注射剂等，例如生脉注射液、葡萄糖大输液、注射用益气复脉冻干制剂等，特别适合于注射用益气复脉冻干制剂。本发明的注射剂中5-羟甲基糠醛含量测定方法，经过以下步骤(1)注射剂预处理配成样品溶液；(2)5-羟甲基糠醛对照品溶液的配制；(3)采用高效液相色谱法对样品和对照品进行测定；(4)计算样品中5-羟甲基糠醛的含量。其中所述预处理包括注射剂配成溶液过大孔吸附树脂，用醇洗脱，得到洗脱溶液，所述的大孔吸附树脂优选聚苯乙烯类树脂，更优选ftOElu^SPE、Cleanert SPE, Strata -X或AB_8树脂。所述醇选自乙醇和甲醇，优选40%甲醇。优选的预处理方法如下；取注射剂(若为粉末剂则用水溶解，若为液体制剂则直接上样)，上预先处理好的大孔吸附树脂，用少量水冲洗，弃取流出液；再以甲醇洗脱，洗脱液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用0. 45um滤膜过滤，取滤液供分析用。本发明所述的方法，用高效液相色谱检测时，对照品上样时优选用甲醇作溶剂。本发明所述的方法，优选用两瓶注射用益气复脉冻干制剂作为样品。本发明所述的方法，大孔吸附树脂柱的参数优选为内径6 8mm，柱高5cm，速度为 lml/mlο本发明所述的方法，其中步骤(3)对样品和对照品进行测定时采用symmetryR，色谱柱，规格为250mm*4. 5mm ；5 μ ；检测波长为观4歷；柱温为30°C ；以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱，
权利要求
1.一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法，经过以下步骤1)注射剂预处理配成样品溶液；2)5-羟甲基糠醛对照品溶液的配制；3)采用高效液相色谱法对样品和对照品进行测定；4)计算样品中5-羟甲基糠醛的含量；其中所述预处理包括过大孔吸附树脂。
2 如权利要求1的方法，其特征在于其中所述预处理包括注射剂配成溶液过大孔吸附树脂，用醇洗脱，得到洗脱溶液。
3.如权利要求1的方法，其特征在于所述预处理包括取注射剂配成溶液过大孔吸附树月旨，用水冲洗，弃取流出液；再以甲醇洗脱，洗脱液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用 0. 45um滤膜过滤，取滤液供分析用。
4.如权利要求3的方法，其特征在于所述甲醇为40%甲醇。
5.如权利要求1的方法，其特征在于所述的大孔吸附树脂是聚苯乙烯类树脂，选自 ProElut SPE、Cleanert SPE、Strata -X 或 AB-8 树脂。
6.如权利要求1的方法，其特征在于步骤(2)对照品溶液的配制采用甲醇作溶剂。
7.如权利要求1的方法，其特征在于所述的注射剂是任何含有5-羟甲基糠醛的注射齐 ，包括注射液，注射乳剂和粉末注射剂。
8.如权利要求7的方法，其中所述的注射剂选自生脉注射液、葡萄糖大输液或注射用益气复脉冻干制剂，其预处理方法如下取注射剂，用水溶解，过大孔吸附树脂，用少量水冲洗，弃取流出液；再以40%甲醇洗脱，洗脱液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用0. 45um 滤膜过滤，取滤液供测定用。
9.如权利要求8的方法，其特征在于其中所述的大孔吸附树脂是AB-8树脂，树脂柱内径6 8mm，柱高5cm，速度为lml/ml，测定时采用symmetryR，色谱柱，规格为250mm*4. 5mm ； 5μ ；检测波长为284nm;柱温为30°C ；以甲醇-水为流动相进行以下梯度洗脱，时间，分钟流量水甲醇
10.如权利要求1的方法，其特征在于，测定注射用益气复脉冻干制剂中5-羟甲基糠醛的含量采用以下步骤，(1)仪器WatersAlliance高效液相色谱仪，包括洸95 Separations Module四元泵、 在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱，Waters四96 二极管阵列检测器，Empower 2色谱工作站；(2)色谱条件色谱柱为Water's sysmmetryE(4. 5mmX250mm, 5um)柱，柱温30°C；流动相为甲醇-水， 流速1. Oml/min，检测波长284nm，进样量为10 μ 1 ；
全文摘要
本发明涉及一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法，该方法经过以下步骤1)注射剂预处理配成样品溶液；2)5-羟甲基糠醛对照品溶液的配制；3)采用高效液相色谱法对样品和对照品进行测定；4)计算样品中5-羟甲基糠醛的含量；其中所述预处理包括过大孔吸附树脂。
文档编号G01N30/02GK102466658SQ201010541638
公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月12日 优先权日2010年11月12日
发明者兰淑玲, 叶正良, 周大铮, 周学谦, 杨悦武 申请人:天津天士力之骄药业有限公司