专利名称：一种固定液的制作方法
一种固定液技术领域
本发明是一种固定液，属于生物体外诊断试剂技术领域。
背景技术：
酶联免疫吸附(ELISA)实验因其灵敏度高，样本容易获得，操作简单已成为国际公 认的蛋白定量金标准。ELISA试剂盒制备的关键技术之一就是抗体固相载体酶标板的制备。 预包被酶标板常规的制备方法是包被液在酶标孔中孵育一定时间后弃掉包被液，置于4°C 可保存I个月，置于_20°C，可保存3个月；再进行加干燥剂，抽真空处理，在4°C可保存I年 左右，但这不能满足ELISA试剂盒长期保存的需要，ELISA预包被酶标板需要更长的蛋白活 性保持时间。
如专利号为200910192897.1，名称为一种链霉亲和素预包被酶标板的制备方法与 应用中公开的方法，传统ELISA预包被酶标板的制备步骤为制备包被液、包被、干燥。近年 来，在包被步骤之后有封闭步骤，封闭之后再干燥；但目前，在封闭和干燥步骤之间没有使 用专门用于固定蛋白活性的固定液，使得保存时间不够长，造成ELISA试剂盒因预包被酶 标板过期而报废，产生不小的经济损失。发明内容
本发明的目的在于提供一种能使ELISA预包被酶标板在4度保存3年以上的固定 液。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是该固定液以PBS缓冲液作为溶剂， 蔗糖和海藻糖作为溶质；所述PBS缓冲液的磷酸根摩尔浓度为O. 01mol/L, pH=7. 2-7. 4，所 述蔗糖的质量分数为5%-30%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。
作为优选,所述PBS缓冲液pH=7. 3,鹿糖的质量分数为30%,海藻糖的质量分数为 30%。
本发明与现有技术相比具有的优点是用固定液对捕获抗体ELISA的蛋白活性进 行固定，最终制得的ELISA预包被酶标板可以在4度条件下长期保存。增加了 ELISA试剂 盒的保存时间和稳定性，减少了 ELISA试剂盒因预包被酶标板活性降低或丧失而报废，减 少经济损失。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而 本发明并不局限于以下实施例。
实施例1 :Human IL_6预包被酶标板的制备步骤1、制备包被液将抗Human IL-6捕获抗体用磷酸根摩尔浓度为O. 01mol/L, pH=7. 2的 PBS缓冲液稀释到2ug/ml，得到包被液。
2、包被在酶标孔中加入IOOul的包被液，4°C包被过夜；3、封闭弃包被液，加入1%BSA-PBST封闭液300ul/孔，室温封闭4小时；4、制备固定液在磷酸根摩尔浓度为O.01mol/L,pH=7. 3的PBS缓冲液中加入蔗糖和海藻糖，使蔗糖的质量分数为30%，海藻糖的质量分数为30%，得到固定液。
5、固定弃封闭液，加入上述固定液每孔300ul，室温固定O. 5小时；6、晾干弃固定液，室温过夜晾干。
7、加入干燥剂,招箔袋抽真空，4°C保存,得到Human IL_6预包被酶标板。
本实施例中所述1%BSA_PBST封闭液的磷酸根摩尔浓度为O. 01mol/L, Tween20体积分数为1%。，BSA质量分数为1%，pH = 7. 3。
上述Human IL_6预包被酶标板经过37度加速试验,可以保存28天。根据阿伦尼乌斯公式结论，37度保存I天相当于4度保存48天，因此得出本实施例Human IL-6预包被酶标板在4度可保存3年以上。
其他实施例以Human IL_6捕获蛋白为例制成Human IL-6预包被酶标板后进行保存时间测试，所述的固定液中蔗糖和海藻糖的质量分数是以下表格中的配比，步骤与实施例I相同，不同配比对应的37度加速试验测得的保存天数如下表
权利要求
1.一种固定液，其特征在于以PBS缓冲液作为溶剂，蔗糖和海藻糖作为溶质；所述PBS缓冲液的磷酸根摩尔浓度为O. Olmol/L, pH=7. 2-7. 4，所述蔗糖的质量分数为5%_30%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。
2.根据权利要求1所述的固定液，其特征在于所述PBS缓冲液pH=7.3。
3.根据权利要求1或2所述的固定液，其特征在于所述蔗糖的质量分数为30%，所述海藻糖的质量分数为30%。
全文摘要
一种固定液，属于生物体外诊断试剂技术领域，该固定液以PBS缓冲液作为溶剂，蔗糖和海藻糖作为溶质；所述PBS缓冲液的磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，pH=7.2-7.4，所述蔗糖的质量分数为5%-30%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。本发明与现有技术相比具有的优点是用固定液对捕获抗体ELISA的蛋白活性进行固定，最终制得的ELISA预包被酶标板可以在4度条件下长期保存。增加了ELISA试剂盒的保存时间和稳定性，减少了ELISA试剂盒因预包被酶标板活性降低或丧失而报废，减少经济损失。
文档编号G01N33/543GK103048448SQ201210561129
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者袁志波 申请人:杭州茂天赛科技有限公司