专利名称：一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于临床测定血清、血浆中糖化血清蛋白的含量的检测试剂及其应用。
背景技术：
糖化血清蛋白(也称果糖胺)是血清中各种蛋白质在高糖作用下发生的非酶促糖化反应产物，血清蛋白糖化主要发生在蛋白质分子的赖氨酸残基上，其中以白蛋白为主，血清白蛋白的的半衰期为17-19 d，测定GSP可反映测定前2 3周的平均血糖水平，因此在糖尿病(DM)的诊断，在近期监控和疗效评价方面有较大的意义。目前检测GSP的方法很多，但各有利弊，如层析法操作步骤繁琐，且对设备要求高，不适合作为常规实验室的检测方法，而酶法试剂昂贵，不适合基层医院开展，NBT还原法被临床采用已经30多年了，NBT法测试血清中糖化血清蛋白含量的基本原理如下:血清果糖胺是一种大分子酮胺类化合物，在碱性条件下可将四氮唑蓝还原成紫色甲月替，其生成量与血清果糖胺成正比。用比色法在540nm (53(T550nm)处，以糖化血清蛋白为校准品，测定反应中甲月替的生成量，从而得出血清果糖胺的浓度。本法具有价格低廉、结果准确快速、重复性好、可自动化批量分析、反映病情变化比糖化血红蛋白快而且费用低等优点，被临床采用已经30多年了，但是它也存在不少的问题和缺点，致实验结果不很稳定，临床评价欠佳。它主要有以下几个问题:标准的基质效应；容易受血清中还原性物质干扰；体系浑浊等。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂，本发明为双试剂，将NBT储存在试剂Rl的中性pH环境中，试剂R2提供反应所需的碱性环境，从而解决了 NBT在碱性环境中易析出，体系浑浊等问题，本发明采用新的非离子表面活性剂烷基糖苷APG1214，不仅显著改善测定的性能，而且对维护体系的透明，防止出现脂浊，效果明显，相比之前所用的Bri j35、Tritonx-100、聚乙烯醇单烧醚等有更好的效果,并且显著改善了试剂的稳定性；采用生理盐水配制的人血清白蛋白(40g/L)作为基质，加入适量果糖胺纯品(Sigma)并添加防腐剂，制成糖化血清蛋白测试的液体标准品和质控品，最大程度上消除基质效应对测试造成的影响，并且使用方便。本发明的技术方案如下:
一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂，其包括体积比为4:1的试剂R1、试剂R2及其对应的标准和质控血清:
所述试剂Rl的组成为:
Tris-HCl 缓冲液 pH=7.5，25°C0.lmol/L
NBT (氯化硝基氮蓝四唑)0.408g/L
烷基糖苷APG12145g/L胆酸钠lg/L
尿酸酶2.5KU/L
防腐剂 NaN30.5g/L ；
所述试剂R2的组分为:
碳酸钠缓冲液 pH=10.6，25°C0.4mol/L
防腐剂 NaN30.5g/L ；
所述标准和质控血清由下列方法制备而成:
标准血清的制备:向生理盐水配制的浓度为40g/L人血清白蛋白溶液中加入果糖胺纯品并添加防腐剂、稳定剂，使果糖胺浓度为292 μ mol/L，其在标准血清中的浓度为lg/L ;质控血清制备过程同标准血清，其靶值及允许范围为(220-330) ymol/L，优选275ymol/L。优选的，所述防腐剂为NaN3。本发明同时提供了 一种该试剂在检测糖化血清蛋白中的应用。本发明采用液体双试剂NBT法测试血清中的糖化血清蛋白含量。与国内常见试剂盒相比，本试剂采用双试剂，将NBT储存在试剂Rl的中性pH环境中从而解决了 NBT在碱性环境中易析出，体系浑浊等问题。并且采用新的非离子表面活性剂烷基糖苷APG1214，显著改善测定的性能，而且对维护体系的透明有良好效果。试剂的准确度和稳定性良好，完全可以满足临床需要。
图1为九强果糖胺试剂盒与实施例1试剂相关性实验图。
图2为不同表面活性剂对试剂影响图。
图3为试剂的稳定性对比实验图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例1
本实施例所描述的糖化血清蛋白的检测试剂，包括试剂R1、试剂R2及其对应的标准和质控血清:
1)其Rl的组成为:
Tris-HCl 缓冲液(pH=7.5，25°C )0.lmol/L
NBT (氯化硝基氮蓝四唑)0.408g/L
烷基糖苷APG12145 g/L
胆酸钠lg/L
尿酸酶2.5KU/L
防腐剂 NaN30.5g/L
2)试剂R2的组分为:
碳酸钠缓冲液(ρΗ=10.6，25°C )0.4mol/L
防腐剂 NaN30.5g/L。3)标准和质控血清:
向生理盐水配制的人血清白蛋白(40g/L)溶液中加入适量果糖胺纯品(Sigma)并添加lg/L的NaN3，使果糖胺的浓度为292 μ mol/L。质控血清制造过程与标准血清相同，其靶值为 275 μ mol/L。4)糖化血清蛋白检测试剂，在使用时，测定方法如下:
本实施例描述的糖化血清蛋白检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪等，将Rl和R2按照4:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1:
表I糖化血清蛋白检测试剂检测方法
权利要求
1.一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂，其包括体积比为4:1的试剂R1、试剂R2及其对应的标准和质控血清: 所述试剂Rl的组成为: Tris-HCl 缓冲液 pH=7.5，25°C0.lmol/L NBT (氯化硝基氮蓝四唑)0.408g/L 烷基糖苷APG12145g/L胆酸钠lg/L 尿酸酶2.5KU/L 防腐剂 NaN30.5g/L ； 所述试剂R2的组分为: 碳酸钠缓冲液 pH=10.6，25°C0.4mol/L 防腐剂 NaN30.5g/L ； 所述标准和质控血清由下列方法制备而成: 标准血清的制备:向生理盐水配制的浓度为40g/L人血清白蛋白溶液中加入果糖胺纯品并添加防腐剂、稳定剂，使果糖胺浓度为292ymol/L，；质控血清制备过程同标准血清，其靶值及允许范围为(220-330) ymol/L。
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述防腐剂为NaN3，其在标准血清中的浓度为lg/L。
3.根据权利要求1所述的检测试剂,其特征在于,质控血清的靶值为275μ mol/L0
4.权利要求1-3中任一项所述的检测试剂在检测糖化血清蛋白中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种稳定的糖化血清蛋白的检测试剂及其应用，本试剂采用双试剂，将NBT储存在试剂R1的中性pH环境中从而解决了NBT在碱性环境中易析出，体系浑浊等问题。并且采用新的非离子表面活性剂烷基糖苷APG1214，显著改善测定的性能，而且对维护体系的透明有良好效果。试剂的准确度和稳定性良好，完全可以满足临床需要。
文档编号G01N33/96GK103197084SQ201310103139
公开日2013年7月10日 申请日期2013年3月28日 优先权日2013年3月28日
发明者陈锡良, 李志明, 甘宜梧 申请人:山东博科生物产业有限公司