用于分析和测定在卫康醇中杂质的改良分析方法
【专利摘要】一种用于卫康醇制备物分析的改良分析方法，提供用于测定卫康醇纯度并侦测卫康醇制备物中杂质的方法，以及辨识任何此等杂质。所述方法采用高效液相色谱法(HPLC)，特别是，具有折射率(RI)侦测的高效液相色谱法，所述高效液相色谱法之后可进行串联质谱法。所述方法还可包括执行存在于卫康醇制备物中的至少一特定物质波峰的制备性高效液相色谱法的收集的步骤。
【专利说明】用于分析和测定在卫康醇中杂质的改良分析方法
[0001] 相关申请案
[0002] 此案主张美国临时专利申请案第61/603, 464号的优先权，命名为"用于分析和 测定在卫康醇中杂质的改良分析方法"，由Xiaoyun Lu提交，于2012年2月27日申請，其 内容通过引用的方式并入本文整体中。
【技术领域】
[0003] 本发明关于多个卫康醇的改良分析方法，特别是涉及高效液相色谱法（HPLC)。
【背景技术】
[0004] 卫康醇（1，2 :5,6dianhydrogalactitol或DAG)是多种己糖醇或己糖醇衍生物之 一，其具有显著药理活性，包括化学治疗（chemotherapy)活性。特别是卫康醇已被建议用 于化学治疗（chemotherapy)，如在美国专利第7, 157, 059号，Nielsen等人所著，并通过引 用并入本文。
[0005] 卫康醇具有抗多种肿瘤的活性。然而，如果卫康醇被成功地用作治疗剂，具有极高 纯度并且去除杂质则是必需的。杂质的存在可能会导致非预期的副作用。一个发生在许多 年前的例子，当时存在于一批色氨酸（tyrosine)氨基酸（其为一种蛋白质的正常组成分） 的杂质引起一种嗜酸粒细胞增多 -肌痛综合征（eosinophilia-myalgia syndrome)的剧烈 爆发，造成了大量的永久性残疾的病例及至少37人死亡。如果治疗剂（例如卫康醇）是用 在免疫系统受损或肝或肾功能障碍的患者、或老年患者，这会是尤其重要。由于这类患者对 污染物的敏感性，他们可能遇到更高的不良副作用发生率。
[0006] -种发现在卫康醇制备物中的杂质是半乳糖醇（dulcitol)。其他存在卫康醇制物 的杂质醇取决于其制备方法。
[0007] 因此，需要一种改良的分析方法以检测卫康醇制剂物中的杂质和降解产物，以提 供更高的纯度，使得当卫康醇被施用于治疗目的时，有较低的机会引发副作用。
【发明内容】
[0008] -种用于测定卫康醇纯度并侦测在卫康醇制备物中杂质和降解产物的改良分析 方法，其符合本文所述的需求。
[0009] -般而言，这种分析方法采用高效液相色谱法（HPLC)，尤指具有折射率指数（RI) 侦测的HPLC。
[0010] 在一取代方案中，一种用于分析在卫康醇制备物中杂质存在和量的分析方法，其 特征在于：所述分析方法包括以下步骤：
[0011] (1)通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用流动相梯度洗提，使卫康 醇与所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的所述制备物；以及
[0012] (2)测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个 波峰的相对浓度。
[0013] 所述非卫康醇本身的化合物是：（1)半乳糖醇；（2)非半乳糖醇的杂质；和（3)卫 康醇的降解产物中的至少一个。
[0014] 在所述方法的一取代方案中，以约2. 5毫摩尔至约0. 1毫摩尔的氢氧化纳的梯度 进行洗提。优选地，以约1. 5毫摩尔至约0. 1毫摩尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。更优选 地，以约1毫摩尔至约0. 1毫摩尔的氢氧化纳的梯度进行洗提。
[0015] 在所述方法的另一取代方案中，以氢氧化铵和一挥发性铵盐的结合物的梯度进行 洗提，所述挥发性胺盐选自于甲酸铵和乙酸铵和氢氧化铵所组成的一群组，并且甲酸铵和 乙酸铵的总浓度为约2. 5毫摩尔至约0. 1毫摩尔。优选地，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙 酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1. 5毫摩尔至约I. 0毫摩尔。更优选 地，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1 毫摩尔至约0. 1毫摩尔。通常而言，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的 所述挥发性胺盐的比例是从洗提开始时的约100 : 1变化至洗提结束时的约1 : 100。
[0016] 通常而言，所述测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物 的一或多个波峰的相对浓度的步骤是通过挥发性光散射侦测而执行。通常而言，所述挥发 性光散射侦测与电喷雾液相色谱/质谱分析法（LC/MS)相容。通常而言，所述挥发性光散 射侦测包括一挥发性溶剂的柱后添加，以提高100%水性流动相的蒸发。通常而言，所述挥 发性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈所组成的群组。
[0017] 在另一取代方案中，一电喷雾串联质谱仪安装并线上连接至一具有挥发性光散射 侦测的高效液相色谱系统。通常而言，收集质谱数据，其提供可能存在于卫康醇的制备物中 的各个杂质和降解产物的化学物质信息。此外通常而言，收集串联质谱数据，其提供可能存 在于卫康醇的制备物中的各个杂质和降解产物的化学物质信息。
[0018] 所述方法还包括以下步骤：执行存在于卫康醇制备物中的至少一特定物质波峰的 制备性高效液相色谱法的收集。存在于卫康醇制备物中的至少一物质波峰为一杂质。
[0019] 在另一取代方案中，一种用于分析在卫康醇制备物中杂质存在和量的分析方法， 其特征在于：所述分析方法包括以下步骤：
[0020] (1)通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用等梯度流动相洗提，使卫 康醇与所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的所述制备物；以及
[0021] (2)测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个 波峰的相对浓度。
[0022] 在一取代方案中，当以等梯度洗提时，所述等梯度流动相为氢氧化钠，且氢氧化钠 的浓度为约5毫摩尔至约0. 1毫摩尔。优选地，氢氧化钠的浓度为约2. 5毫摩尔至约0. 1 毫摩尔。更优选地，氢氧化钠的浓度为约1毫摩尔。
[0023] 在另一取代方案中，当以等梯度洗提时，所述等梯度流动相为氢氧化铵和一挥发 性铵盐的结合物，所述挥发性胺盐选自于甲酸铵和乙酸铵和氢氧化铵所组成的一群组，并 且氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约5 毫摩尔至约〇. 1毫摩尔。优选地，氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所 述挥发性胺盐的总浓度为约2. 5毫摩尔至约I. 0毫摩尔。更优选地，氢氧化铵和选自于甲 酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1毫摩尔。通常而言，氢氧 化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的比例是约50 : 50。
[0024] 通常而言，在一取代方案中，所述测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫 康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度的步骤是通过挥发性光散射侦测（ELSD)而 执行。通常而言，所述挥发性光散射侦测与电喷雾液相色谱/质谱分析法（LC/MS)相容。通 常而言，所述挥发性光散射侦测包括一挥发性溶剂的柱后添加，以提高100%水性流动相的 蒸发。通常而言，所述挥发性溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈所组成的群组。
[0025] 在此取代方案中，一电喷雾串联质谱仪安装并线上连接至一具有挥发性光散射侦 测的高效液相色谱系统。通常而言，收集质谱数据，其提供可能存在于卫康醇的制备物中的 各个杂质和降解产物的化学物质信息。此外通常而言，收集串联质谱数据，其提供可能存在 于卫康醇的制备物中的各个杂质和降解产物的化学物质信息。
[0026] 根据本发明的方法的取代方案还包括以下步骤：执行存在于卫康醇制备物中的至 少一特定物质波峰的制备性高效液相色谱法的收集。存在于卫康醇制备物中的至少一物质 波峰为一杂质。
【专利附图】
【附图说明】
[0027] 参照下面的描述、所附的权利要求书和附图，本发明的这些和其它特征、方面和优 点将变得更好的理解，其中：
[0028] 图1是卫康醇制备物的代表性HPLC/RI的色谱图，显示半乳糖醇在相对滞留时间 (RRT)?0. 6时，原料药和药物产物中半乳糖醇及一未知相关物质的分辨度（resolution)。
[0029] 图2显示代表性HPLC的色谱图，显示在一标准剂（standard)及水空白剂（water blank)中卫康醇及半乳糖醇的分辨度（resolution)，以进行比较。图2中，卫康醇-半乳 糖醇的标准剂显示在上方图块中，与水空白剂显示在下方图块中。
【具体实施方式】
[0030] 本发明涉及一种用于测定卫康醇纯度和测定存在于卫康醇制备物的杂质的存在 及浓度的改进分析方法。
[0031] 卫康醇结构如下式（I)所示。
[0032]
【权利要求】
1. 一种用于分析在卫康醇制备物中杂质存在和量的分析方法，其特征在于：所述分析 方法包括以下步骤： (a) 通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用流动相梯度洗提，使卫康醇与 所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的所述制备物；以及 (b) 测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰 的相对浓度。
2. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述非卫康醇本身的化合物是：（1)半 乳糖醇；（2)非半乳糖醇的杂质；和（3)卫康醇的降解产物中的至少一个。
3. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：以约2. 5毫摩尔至约0. 1毫摩尔的氢 氧化纳的梯度进行洗提。
4. 如权利要求3所述的分析方法，其特征在于：以约1. 5毫摩尔至约0. 1毫摩尔的氢 氧化纳的梯度进行洗提。
5. 如权利要求4所述的分析方法，其特征在于：以约1毫摩尔至约0. 1毫摩尔的氢氧 化纳的梯度进行洗提。
6. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：以氢氧化铵和一挥发性铵盐的结合物 的梯度进行洗提，所述挥发性胺盐选自于甲酸铵和乙酸铵和氢氧化铵所组成的一群组，并 且氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约2. 5 毫摩尔至约0. 1毫摩尔。
7. 如权利要求6所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所 组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1. 5毫摩尔至约1. 0毫摩尔。
8. 如权利要求7所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所 组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1. 〇毫摩尔至约〇. 1毫摩尔。
9. 如权利要求4所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所 组成的一群组的所述挥发性胺盐的比例是从洗提开始时的约100 : 1变化至洗提结束时的 约 1 : 100。
10. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述测定由高效液相色谱法解析而得 的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度的步骤是通过挥发性光散射 侦测而执行。
11. 如权利要求10所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性光散射侦测与电喷雾液 相色谱/质谱分析法相容。
12. 如权利要求10所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性光散射侦测包括一挥发 性溶剂的柱后添加，以提高100 %水性流动相的蒸发。
13. 如权利要求12所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性溶剂选自甲醇、乙醇、异 丙醇和乙腈所组成的群组。
14. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：一电喷雾串联质谱仪安装并线上连接 至一具有挥发性光散射侦测的高效液相色谱系统。
15. 如权利要求14所述的分析方法，其特征在于：收集串联质谱数据，其提供可能存在 于卫康醇的制备物中的各个杂质和降解产物的化学物质信息。
16. 如权利要求15所述的分析方法，其特征在于：与高效液相色谱法串连的质谱分析 提供各个所观察到的杂质和降解产物的分子离子信息以及具有与分子离子信息一致的分 子量的可能化学结构。
17. 如权利要求15所述的分析方法，其特征在于：至少一种杂质或降解产物通过柱色 谱法的分离而鉴定，随后通过至少一纯化步骤，以产出一固态未知样品。
18. 如权利要求17所述的分析方法，其特征在于：所述的固态未知样品通过至少一种 标准的分析方法而辨识，其选自于由核磁共振（NMR)、质谱法（MS)、傅立叶变换红外光谱法 (FT-IR)、元素分析、通过高效液相色谱法测定纯度和卡尔费休滴定法测定水含量所组成的 一群组。
19. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：还包括以下步骤：执行存在于卫康醇 制备物中的至少一特定物质波峰的制备性高效液相色谱法的收集。
20. 如权利要求19所述的分析方法，其特征在于：存在于卫康醇制备物中的至少一物 质波峰为一杂质。
21. 如权利要求19所述的分析方法，其特征在于：存在于卫康醇制备物中的至少一物 质波峰为一降解产物。
22. -种分析方法，其特征在于：所述分析方法包括以下步骤： (a) 通过运用高效液相色谱法于卫康醇的一制备物，利用等梯度流动相洗提，使卫康醇 与所述制备物的半乳糖醇及其他杂质分离，从而分析卫康醇的所述制备物；以及 (b) 测定由高效液相色谱法解析而得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰 的相对浓度。
23. 如权利要求22所述的分析方法，其特征在于：所述非卫康醇本身的化合物是：（1) 半乳糖醇；（2)非半乳糖醇的杂质；和（3)卫康醇的降解产物中的至少一个。
24. 如权利要求22所述的分析方法，其特征在于：所述等梯度流动相为氢氧化钠，且氢 氧化钠的浓度为约5毫摩尔至约0. 1毫摩尔。
25. 如权利要求24所述的分析方法，其特征在于：氢氧化钠的浓度为约2. 5毫摩尔至 约0. 1毫摩尔。
26. 如权利要求25所述的分析方法，其特征在于：氢氧化钠的浓度为约1毫摩尔。
27. 如权利要求22所述的分析方法，其特征在于：所述等梯度流动相为氢氧化铵和一 挥发性铵盐的结合物，所述挥发性胺盐选自于甲酸铵和乙酸铵和氢氧化铵所组成的一群 组，并且氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为 约5毫摩尔至约0. 1毫摩尔。
28. 如权利要求27所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵 所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约2. 5毫摩尔至约0. 1毫摩尔。
29. 如权利要求28所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵 所组成的一群组的所述挥发性胺盐的总浓度为约1. 〇毫摩尔。
30. 如权利要求27所述的分析方法，其特征在于：氢氧化铵和选自于甲酸铵和乙酸铵 所组成的一群组的所述挥发性胺盐的比例为约50 : 50。
31. 如权利要求22所述的分析方法，其特征在于：所述测定由高效液相色谱法解析而 得的且代表非卫康醇本身的化合物的一或多个波峰的相对浓度的步骤是通过挥发性光散 射侦测而执行。
32. 如权利要求31所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性光散射侦测与电喷雾液 相色谱/质谱分析法相容。
33. 如权利要求32所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性光散射侦测包括一挥发 性溶剂的柱后添加，以提高100 %水性流动相的蒸发。
34. 如权利要求33所述的分析方法，其特征在于：所述挥发性溶剂选自甲醇、乙醇、异 丙醇和乙腈所组成的群组。
35. 如权利要求22所述的分析方法，其特征在于：一电喷雾串联质谱仪安装并线上连 接至一具有挥发性光散射侦测的高效液相色谱系统。
36. 如权利要求25所述的分析方法，其特征在于：收集串联质谱数据，其提供可能存在 于卫康醇的制备物中的各个杂质和降解产物的化学物质信息。
37. 如权利要求36所述的分析方法，其特征在于：与高效液相色谱法串连的质谱分析 提供各个所观察到的杂质和降解产物的分子离子信息以及具有与分子离子信息一致的分 子量的可能化学结构。
38. 如权利要求36所述的分析方法，其特征在于：至少一种杂质或降解产物通过柱色 谱法的分离而鉴定，随后通过至少一纯化步骤，以产出一固态未知样品。
39. 如权利要求38所述的分析方法，其特征在于：所述的固态未知样品通过至少一种 标准的分析方法而辨识，其选自于由核磁共振（NMR)、质谱法（MS)、傅立叶变换红外光谱法 (FT-IR)、元素分析、通过高效液相色谱法测定纯度和卡尔费休滴定法测定水含量所组成的 一群组。
40. 如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：还包括以下步骤：执行存在于卫康醇 制备物中的至少一特定物质波峰的制备性高效液相色谱法的收集。
41. 如权利要求40所述的分析方法，其特征在于：存在于卫康醇制备物中的至少一物 质波峰为一杂质。
42. 如权利要求40所述的分析方法，其特征在于：存在于卫康醇制备物中的至少一物 质波峰为一降解产物。
【文档编号】G01N30/28GK104428664SQ201380022154
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年2月26日 优先权日:2012年2月27日
【发明者】盧暁云 申请人:德马医药