一种肿瘤细胞药敏动态测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种肿瘤细胞药敏动态测定方法，属于检测【技术领域】，其关键在于包括以下步骤：取对数生长期的细胞以1×105个/孔接种到96孔板，加入抗肿瘤药物后培养48h，再加入终浓度为75--g/mL刃天青溶液持续培养72h后，经酶标仪动态测定荧光强度值计算比较，求得药敏数值，判断最适浓度和最佳时间。本发明简单、快捷、灵敏度高、特异性好，并能同时测定抗肿瘤药物作用的最适浓度和最佳时间，为临床科学合理地用药提供指导，为抗肿瘤药物的筛选研发提供有效途径。
【专利说明】一种肿瘤细胞药敏动态测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗肿瘤药物敏感性检测【技术领域】，尤其是一种肿瘤细胞药敏动态测定 方法。
【背景技术】
[0002] 癌症严重威胁着人类的健康和生命，每年约新增800万癌症患者，600多万人死于 癌症，几乎每6秒钟就有一名癌症患者死亡。在恶性肿瘤的疗法中，药物治疗占有重要地 位。由于现有的化疗药物副作用大，易产生耐药现象，因此，寻找更为有效、低毒的抗肿瘤药 物仍是当前及今后一段时期内肿瘤治疗的热点。
[0003] 随着抗肿瘤药物体外敏感性试验深入的研究，目前已发展了不少新的测试方法， 如MTT法、[3H] TdR法、51Cr释放法、LDH法、XTT法、MTS法、CCK-8试剂盒等，但这些方法在 评价抗肿瘤药物作用细胞的最佳作用时间时方面受到限制，如：[3H] TdR法、51Cr释放法具 有放射性，操作繁琐。后三种方法是类似MTT法原理的一种终点检测法，只适于检测药物的 终点作用效果，而不能动态测试抗肿瘤药物的作用最适浓度和最佳时间。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种肿瘤细胞药敏动态测定方法，它能同时快 速、灵敏的测试抗肿瘤药物作用最适浓度和最佳时间，以克服现有技术的不足。
[0005] 本发明是这样实现的：肿瘤细胞药敏动态测定方法，包括以下步骤：（1)取对数生 长期的肿瘤细胞计数，并制备细胞悬液，接种至细胞培养板；（2)向细胞培养板的对应孔中 加入抗肿瘤药物，每种抗肿瘤药物设置四个浓度梯度，五个重复；（3)将细胞培养板置于C0 2 培养箱中培养48h后，每孔加入刃天青溶液，继续培养，并在培养过程的不同时间段内测量 荧光强度值；（4)将测量的荧光强度值带入公式（1)计算药物对细胞增殖抑制率；计算比 较，求得药敏数值，判断最适浓度和最佳时间；
【权利要求】
1. 一种肿瘤细胞药敏动态测定方法，其特征在于：包括以下步骤：（1)取对数生长期的 肿瘤细胞计数，并制备细胞悬液，接种至细胞培养板；（2)向细胞培养板的对应孔中加入抗 肿瘤药物，每种抗肿瘤药物设置四个浓度梯度，五个重复；（3)将细胞培养板置于C0 2培养 箱中培养48h后，每孔加入刃天青溶液，继续培养，并在培养过程的不同时间段内测量荧光 强度值；（4)将测量的荧光强度值带入公式（1)计算药物对细胞增殖抑制率；
公式（1)中，FLU表示荧光强度值。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，细胞接种量为1 X 105个/孔。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3)中，加入的刃天青溶液的浓度为 75--g/mL ;加入刃天青溶液后的反应作用时间为72h。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细胞培养板为96孔板。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4)中，荧光强度值测定激发波长为 571. 02nm，发射波长为 583. 97nm。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肿瘤细胞为人慢性髓系白血病细胞 K562。
【文档编号】G01N21/76GK104122254SQ201410031797
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年1月23日 优先权日:2014年1月23日
【发明者】周英, 俸婷婷, 李宙阳, 甄茹, 刘雄利, 王慧娟 申请人:贵州大学