专利名称：乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其可用于奶牛隐性乳房炎的快速检测与诊断、奶牛乳房炎病原菌快速药敏试验、细菌药敏试验、药物抑菌试验及畜禽产品微生物检测。
背景技术：
奶牛隐性乳房炎的发病率在25％-80％，是奶牛场最严重的疾病之一。可引起患病牛奶产量减少20％-30％，因而是引起损失最大，同时也是严重影响牛奶品质和奶牛淘汰的原因之一。其预防和治疗主要依靠抗生素的使用，为此，近年来已造成抗生素的滥用，同时，抗生素残留严重影响了牛奶的品质，给消费者造成损害，也影响了奶牛场的经济效益。
引起乳房炎的病原种类已报道有130种以上，各地的病原菌特征也不同。因此，现场快速检测和药敏试验对于防治该病具有重要意义。
目前国际上主要应用乳汁中体细胞数计数(SCC)和加州乳房炎试验(CMT)，我国主要应用SCC和兰州乳房炎试验(LMT)及北京、河北乳房炎试验(BMT、HMT)等进行检测。SCC法要求专业设备和人员，很难在养殖场推广，各种乳房炎试验则因其简单、快速和可以现场操作而得到广泛应用。但上述方法只能进行定性诊断，不能分析其中微生物的多少，更不能进行药敏试验，目前需要在专业实验室首先进行细菌的分离培养和纯化，再进行药敏试验，才能指导临床准确用药，由于进行细菌分离需要大量采样，因而该法费时、费力，不能现场操作，目前只在极少数大型养殖场定期使用，大多数养殖场仍然依靠兽医凭经验用药。我国市场上至今没有可进行现场快速药敏试验的药盒供应。
发明内容
本发明为了解决上述背景技术中的不足之处，提供一种乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其诊断与检测快速，敏感，操作简单，无需专业技术人员操作，可进行现场测定，并且对于中药提取物或疏水性药物的抑菌试验效果明显优于常规纸片法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其特殊之处在于所述试剂盒内含有试剂色唑蓝(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)。
在进行奶牛乳房炎检测时，同时加入奶样和MTT或TTC试液0.1mL，室温或37℃作用最短4-5分钟，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
在进行奶牛乳房炎药敏试验时，对于乳房炎检测阳性奶样，加入奶样和药液各0.01mL，室温或于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
在进行细菌药敏试验或药物抑菌试验时，对于已经纯化的细菌，加入菌液0.01mL，同时加入药液0.01mL，于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
在进行畜禽产品微生物检测时，将待检畜产品样品用无菌营养肉汤按1∶1混合匀浆，离心后取上清液0.01mL加入检测板孔中，于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下1、本发明诊断与检测快速，敏感，操作简单，无需专业技术人员操作，可进行现场测定，对于中药提取物或疏水性药物的抑菌试验效果明显优于常规纸片法。
2、经对比试验研究，本发明乳房炎检测结果与SCC法和LMT法一致。
3、本发明乳房炎药敏试验及药敏试验检测结果与微生物学常规方法(纸片法和液体试管法)结果一致。
具体实施例方式本发明在全面分析我国乳房炎病源特征和细菌代谢特点的基础上，结合现代酶技术应用的发展，分别以色唑蓝(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)作为微生物代谢过程中所产生酶的底物，制成细菌检测和药敏试验试剂盒，可于5分钟内得出隐性乳房炎检测结果，12-24小时得到药敏试验结果，可用于奶牛场现场操作。
工艺流程1.乳房炎检测同时加入奶样和MTT或TTC试液0.1mL，室温或37℃作用最短4-5分钟，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
2.乳房炎药敏试验对于乳房炎检测阳性奶样，加入奶样和药液各0.01mL，室温或于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
3.细菌药敏试验对于已经纯化的细菌，加入菌液0.01mL，同时加入药液0.01mL，于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
4.药物抑菌试验其操作过程同3；5.畜禽产品微生物检测待检畜产品样品用无菌营养肉汤按1∶1混合匀浆，离心后取上清液0.01mL加入检测板孔中，于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
上述各试验中，均可根据颜色深浅程度分析患病程度、药物敏感程度，及畜禽产品污染程度，并可应用酶标仪进行定量检测。
权利要求
1.一种乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其特征在于所述试剂盒内含有试剂色唑蓝(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)。
2.根据权利要求1所述的乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其特征在于在进行奶牛乳房炎检测时，同时加入奶样和MTT或TTC试液0.1mL，室温或37℃作用最短4-5分钟，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
3.根据权利要求1所述的乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其特征在于在进行奶牛乳房炎药敏试验时，对于乳房炎检测阳性奶样，加入奶样和药液各0.01mL，室温或于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
4.根据权利要求1所述的乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其特征在于在进行细菌药敏试验或药物抑菌试验时，对于已经纯化的细菌，加入菌液0.01mL，同时加入药液0.01mL，于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
5.根据权利要求1所述的乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其特征在于在进行畜禽产品微生物检测时，将待检畜产品样品用无菌营养肉汤按1∶1混合匀浆，离心后取上清液0.01mL加入检测板孔中，于37℃培养8-18小时后，加入MTT，继续培养4小时后，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
全文摘要
本发明涉及一种乳房炎快速诊断与药敏试验试剂盒，其诊断与检测快速，敏感，操作简单，无需专业技术人员操作，可进行现场测定，并且对于中药提取物或疏水性药物的抑菌试验效果明显优于常规纸片法。本发明试剂盒内含有试剂色唑蓝(MTT)和氯化三苯四氮唑(TTC)。在进行奶牛乳房炎检测时，同时加入奶样和MTT或TTC试液0.1ml，室温或37℃作用最短4－5分钟，加入溶解显色液，观察结果，根据是否出现颜色进行判定。
文档编号C12Q1/00GK1529167SQ20031010581
公开日2004年9月15日 申请日期2003年10月10日 优先权日2003年10月10日
发明者靳亚平, 王爱华, 杨明军, 梅玉国, 林炜明, 王赟, 王晶钰 申请人:杨凌瑞特生物技术研究所