专利名称：一种κ-卡拉胶降解酶及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种酶，特别是涉及一种可用于制备卡拉胶低聚糖的κ-卡拉胶降解酶。
背景技术：
目前有采用化学方法制备卡拉胶低聚糖的报道，但该方法存在反应条件剧烈、活性基团易受破坏、产物质量不稳定等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种κ-卡拉胶降解酶，它可用于卡拉胶低聚糖的制备，能克服现在技术的上述缺点。
一种酶，其特征是它能使κ-卡拉胶降解，用于制备卡拉胶低聚糖，能够降解κ-卡拉胶的β-1，4-糖苷键，故亦称为κ-卡拉胶降解酶，该酶的分子量为30,000Da。
一种κ-卡拉胶降解酶的制备方法，其特征是将海洋噬纤维菌用2216E培养基28-35℃摇瓶培养后，将培养液离心获得发酵酶液，将酶液超滤浓缩后，以40-80％的(NH4)2SO4盐析收集沉淀蛋白，冷冻干燥。
κ-卡拉胶降解酶用于卡拉胶低聚糖的制备。
本发明的κ-卡拉胶降解酶能够高效地降解κ-卡拉胶，可用于卡拉胶低聚糖的制备，同化学方法相比，其制备过程简单、产物得率高、质量稳定、在制备过程中活性基团不受破坏，为低聚糖的活性研究和开发提供保证。
具体实施例方式
本发明的κ-卡拉胶降解酶可由海洋噬纤维菌液体发酵制得。制备时，将该菌种用2216E培养基活化后，以5％的接种量接入装有100ml培养基的250ml三角瓶中，28-35℃摇瓶培养32-40h后，将培养液以4000rpm冷冻离心10分钟去除菌体，获得发酵酶液。将酶液超滤浓缩后，于4℃条件下以40％的(NH4)2SO4去除杂蛋白，冷冻离心后，向上清液继续加入(NH4)2SO4至80％的饱和度，冷冻离心收集沉淀，装入透析袋中透析48h，冷冻干燥后制得本发明的κ-卡拉胶降解酶。该酶可用于制备卡拉胶低聚糖。κ-卡拉胶降解酶能够降解κ-卡拉胶的β-1，4-糖苷键，故亦称为κ-卡拉胶降解酶。该酶的分子量为30,000Da，最适反应温度32-38℃，最适pH范围6-8，反应体系中的最适NaCl含量为0.1mol/L，K+和Ca2+对酶活有促进作用，而Al3+、Hg2+和Pb2+能够强烈抑制酶活。该酶在50℃以下表现出较高的反应活性，经55℃处理30min或60℃处理10min后酶活将完全丧失，在pH5-8的中性环境中酶活较为稳定。降解卡拉胶时，取2gκ-卡拉胶溶于100ml蒸馏水中，加入5单位的κ-卡拉胶降解酶，1个酶活力单位定义为在32℃条件下，每min产生1μmol还原糖(以半乳糖计)所需要的酶量。于32℃、150r/min振荡反应12h，用沸水浴加热使酶失活，冷却后3000r/min离心分离7min，以去除未酶解的不溶性片段，向上清液加入1倍体积的乙醇去除分子量大的组分，其余可溶性组分于60℃旋转蒸发浓缩至20ml，然后加入3倍体积的乙醇使低聚糖得到沉淀，离心收集沉淀物，经70℃烘干后得到卡拉胶低聚糖，即新卡拉四糖和κ-新卡拉六糖为主的反应终产物。
权利要求
1.一种酶，其特征是它能使κ-卡拉胶降解，用于制备卡拉胶低聚糖，能够降解κ-卡拉胶的β-1，4-糖苷键，故亦称为κ-卡拉胶降解酶，该酶的分子量为30,000Da。
2.一种κ-卡拉胶降解酶的制备方法，其特征是将海洋噬纤维菌用2216E培养基28-35℃摇瓶培养后，将培养液离心获得发酵酶液，将酶液超滤浓缩后，以40-80％的(NH4)2SO4盐析收集沉淀蛋白，冷冻干燥。
3.κ-卡拉胶降解酶用于卡拉胶低聚糖的制备。
全文摘要
一种酶，其特征是它能使κ－卡拉胶降解，用于制备卡拉胶低聚糖，能够降解κ－卡拉胶的β－1，4－糖苷键，故亦称为κ－卡拉胶降解酶，该酶的分子量为30,000Da。制备该酶时，将海洋噬纤维菌用2216E培养基28－35℃摇瓶培养后，将培养液离心获得发酵酶液，将酶液超滤浓缩后，以40－80％的(NH
文档编号C12N9/42GK1544623SQ20031010571
公开日2004年11月10日 申请日期2003年11月25日 优先权日2003年11月25日
发明者牟海津, 江晓路, 管华诗 申请人:中国海洋大学