专利名称：：一种培养鉴别致病支原体的试剂盒及其制备方法
技术领域：
：本发明属医学检验领域，涉及支原体培养、鉴别及临床检验，更具体地，涉及一种培养鉴别致病支原体的试剂盒及其制备方法，更具体地，涉及一种解脲脲原体(U.u)、人型支原体(M.h)及肺炎支原体(M.p)培养鉴别的方法。
背景技术：
：支原体是一类缺乏细胞壁的原核微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体的种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大。对人致病的支原体中，肺炎支原体(M.p)、解脲脲原体(U.u)和人型支原体(M.h)占绝大部分，前者是引起儿童肺炎的常见病原体，后两者引起人非淋球菌性尿道炎。现有技术的支原体感染的诊断方法有核酸诊断、免疫胶体金诊断、ELISA诊断等方法，但最准确可靠的还是培养法。目前，市场上鉴别试剂盒都是单独培养某一类支原体，给临床使用带来不便。
发明内容本发明的目的是提供一种能一次培养鉴别解脲脲原体(U.u)、人型支原体(M.h)及肺炎支原体(M.p)诊断试剂盒。本发明的进一步目的是提供上述诊断试剂盒的制备方法。本发明的目的通过下述技术方案实现在本发明的第一方面，提供了一种试剂盒配置的方法，其特征在于包括下述步骤(1)配制适合U.U生长的基本培养基；(2)配制M.h鉴别试剂；(3)配制M.p鉴别试剂(4)在步骤(1)中的基本培养基中加入病原性支原体临床标本；(5)将步骤(2)中的鉴别试剂加入步骤(1)中的基本培养基，再加入病原性支原体临床标本；(6)将步骤(3)中的鉴别试剂加入步骤(1)中的基本培养基，再加入病原性支原体临床标本；(7)将步骤(4)(5)(6)中的培养基在37X:下培养后观察结果。所述的制适合U.u生长的基本培养基，该培养基含有PPLO培养基、酵母粉、L-半胱氨酸、尿素、葡萄糖、甲氧苄啶、磺胺甲恶唑、氨苄青霉素、酚红和血清；所述的M.h鉴别试剂，含有大环内脂类抗生素和精氨酸；所述的M.p鉴别试剂一种碱性溶液。在本发明的第二方面，提供了上述试剂盒的应用方法，其特征在于病原性支原体临床标本加入基本培养基中，37X:下培养24小时，观察结果；病原性支原体临床标本加入基本培养基中，加入M.h鉴别试剂，37C下培养24小时，观察结果；病原性支原体临床标本加入基本培养基中，加入M.p鉴别试剂，37X:下培养24小时，观察结果。结果表明，本发明根据临床上常见的三种致病支原体的共同特点，配制一种基本培养基，这种培养基适合解脲脲原体的直接培养。本发明又根据人型支原体和肺炎支原体的不同培养特点，配制人型支原体和肺炎支原体的鉴别试剂，当在基本培养基中加入人型支原体或肺炎支原体的鉴别试剂后，该培养基只适合人型支原体或肺炎支原体的生长，从而起到培养鉴别各类人体主要病原性支原体的作用。本发明试剂盒，仅用一个试剂盒能一次培养鉴别三种常见支原体，大大方便了临床检测。具体实施例方式实施例1提供一种能培养鉴别U.u、M.h及M.p的诊断试剂盒。主要分为试剂盒制备和试验操作两个过程一、试剂盒的制备(一)基本培养基配置1、配置磺胺甲恶唑(SMZ)溶液，浓度为50100mg/ml;配置甲氧苄啶(TMP)溶液，浓度为1050mg/ml，将两者混匀为复方新诺明溶液(SXT),低温保存;2、配置酚红溶液，浓度为15%,低温保存；3、配置添加剂溶液，其中L-半胱氨酸浓度为110mg/ml，尿素浓度为10.0~100.0rag/ml,葡萄糖浓度为2001000mg/ml，无菌过滤，低温保存；4、配置培养基肉汤，其中PPL()培养基浓度为10100g/L,酵母粉浓度为10~100g/L,灭菌后保存；5、将l2mlSMZ、TMP溶液，45ml酚红溶液，300800ml培养基肉汤及50100ml添加剂混匀，加入血清100200ml及氨苄青每素O.55g，调pH值至6.2~7.2。(二)配制Mh鉴别试剂1、称取大环内脂类抗生素，959b的乙醇溶解，配制成浓度为10.0~50mg/ml的母液；2、称取MgC:U、MgS04、精氨酸，用去离子水溶解，配制成稀释液，调pH至6.27.2;3、取15ml上述母液，加入100200ml稀释液，配制抗生素的终浓度为100500ug/ml。(三)配制M.P鉴别试剂配制0.11.0N的NaOH溶液。将瓶装基本培养基、M.h鉴别试剂和M.p鉴别试剂包装为一个试剂盒。二、试验操作1、取怀疑为泌尿道支原体感染的临床标本，接种于2瓶基本培养基，其中一瓶滴加M.h鉴别试剂，两者均37'C培养48hr,培养基颜色变化者为阳性。2、取怀疑为泌尿道支原体感染的临床标本，接种于1瓶基本培养基，滴加M.p鉴别试剂，37'C培养710天，培养基颜色变化者为阳性。实施例2:解脲脲原体、人型支原体及肺炎支原体培养鉴别试剂盒本试剂盒有基本培养基、M.h鉴别试剂、M.p鉴别试剂组称。1、按表l的基本培养基配方，通过下述步骤制备基本培养基，1)称磺胺甲恶唑(SMZ)550画mg,甲氧苄啶(TMP)110500mg,加1020mlDMSO，充分溶解，分装，低温保存；2)以lN的NaOH溶解船红，加35倍体积的无菌去离子水，低温保存；3)称取1050gPPLO培养基、520g酵母粉，加入去离子水300800ml，加热混匀，调pH至6.27.2，121tl5min灭菌处理。4)称取0.21.0gL-半胱氨酸，3.010.0g尿素，20100g葡萄糖，溶于50~200ml去离子水中，调pH至6.27.2，加入氨苄青苒素0.55g及SMZ、TMP溶液lml,混匀，无菌过滤，加100200ml无菌去离子水；5)将步骤1.2.3、1.2.4中的溶液混合，无菌加入0.55ml酚红溶液及100200ml马血清，混匀，调pH值至6.27.2;6)清洗容量为520ml的玻璃瓶，高压灭菌，将步骤1.2,5中的培养基无菌分装，15ml/瓶，低温保存。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>Ph:6.27.22.按表2的配方，通过下述步骤制备M.h鉴别试剂1)称取100500mg罗红霉素+10.Oml95%的乙醇，配制成浓度为10.050mg/ml的母液2)称取l5mgMgC12、l~5mgMgSO4+1050g精氨酸+100mlH20，配制成稀释液，调pH至6.27.2;3)取lml母液+100ml稀释液，配制终浓度20200ug/ml;4)灭菌处理容量为520ml的塑料滴瓶，将上述溶液无菌分装，520ml/瓶，低温保存。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>Ph:6.2~7.23、通过下述步骤制备M.p试剂1)称取0.42gNaOH，加入100ml无菌去离子水，配置成0.10.5N的NaOH溶液；2)灭菌处理容量为520ml的塑料滴瓶，将上述溶液无菌分装，520ml/瓶，低温保存。4、组装试剂盒将2040瓶基本培养基、12瓶M.h鉴别试剂、12瓶M.p鉴别试剂包装为一个试剂盒。权利要求1、一种培养鉴别致病支原体的试剂盒，其特征在于，包括解脲脲原体基本培养基、人型支原体鉴别试剂和肺炎支原体鉴别试剂，2、权利要求1的培养鉴别致病支原体的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括下述步骤(1)配制适合解脲脲原体生长的基本培养基；(2)配制人型支原体鉴别试剂；(3)配制肺炎支原体鉴别试剂；(4)将上述瓶装基本培养基和鉴别试剂包装成试剂盒。3、如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤1的基本培养基含有PPLO培养基、酵母粉、L-半胱氨酸、尿素、葡萄糖、甲氧苄啶、磺胺甲恶唑、氨苄青霉素、多年菌素、酚红和血清。4、如权利要求2所述的方法，其特征在于人型支原体鉴别试剂含有大环内脂类抗生素和精氨酸。5、如权利要求2所述的方法，其特征在于肺炎支原体鉴别试剂为碱性溶液。6、如权利要求1所述的培养鉴别致病支原体的试剂盒，其特征在于所述试剂盒培养鉴别致病支原体通过下述步骤(1)在步骤(1)的基本培养基中加入病原性支原体临床标本；(2)将步骤(2)的鉴别试剂中加入歩骤(1)的基本培养基，再加入病原性支原体临床标本；(3)将歩骤(3)的鉴别试剂加入步骤(1)的基本培养基，再加入病原性支原体临床标本；(4)将上述步骤的培养基在37X:下培养后观察结果。7、如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述步骤1的病原性支原体是解脲脲原体。8、如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述步骤2的病原性支原体是人型支原体。9、如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述歩骤2的病原性支原体是肺炎支原体。全文摘要本发明属医学检验领域，涉及一种培养鉴别致病支原体的试剂盒及其制备方法，更具体地，涉及一种解脲脲原体、人型支原体及肺炎支原体培养鉴别的方法。本发明根据临床常见的致病支原体的共同特点，配制基本培养基，这种培养基适合解脲脲原体直接培养；根据人型支原体和肺炎支原体的不同培养特点，配制人型支原体和肺炎支原体的鉴别试剂，当在基本培养基中加入人型支原体或肺炎支原体的鉴别试剂后，该培养基只适合人型支原体或肺炎支原体的生长，起到培养鉴别各类人体主要病原性支原体的作用。本发明进一步制成试剂盒，明显方便了临床检测。文档编号C12Q1/04GK101109746SQ20061002902公开日2008年1月23日申请日期2006年7月17日优先权日2006年7月17日发明者严正龙,华王,醇邵申请人:上海中正慧东医疗技术有限公司