专利名称：联合型支原体检测试剂及制备方法
技术领域：
本发明属于医药领域，特别涉及一种因支原体引起的泌尿生殖道疾病的检测试剂及其制备方法。
支原体是性传播性泌尿生殖道疾病的常见病原体。检出率占性病人群的40～70％，支原体感染可导致尿生殖道炎、前列腺炎、盆腔炎、男性不育、女性不孕、绒毛膜炎和低出生体重儿等疾病。目前，国内外对支原体实验诊断技术的研究较多，如特异性抗体检测技术、代谢抑制试验、Southern Blot、PCR法、培养法等(Taylor-Robinson D.Clin Lab Sci，1989；9(30)501-523.和Jensen JS et al.J ClinMicrobiol，1991；29(1)46-50)。抗体检测技术易出现交叉反应。代谢抑制试验，需加特异性抗体抑制支原体的生长，临床应用不多。SouthernBlot实验技术要求较高，不易普遍开展。PCR法容易出现假阳性和假阴性，已被国家卫生部下令禁止应用于临床检验。而培养法是根据支原体的生活习性而采用的特异性选择性培养基检测支原体的方法，目前各医院常用的培养基多为单一支原体培养基，如单一的解脲性支原体培养基、单一的人型支原体培养基。单一的支原体培养基国内已有人申报了专利(申请号96117201.0发明人王荷英)。解脲型支原体国内有一家单位申请到了批号(上海金桥公司)。但是联合型支原体培养基未见有人申报专利，国内外迄今也未见有批号问世。
本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提出了能在一种试剂中同时检出几种支原体的试剂及制备方法，达到了降低成本、防止漏检、节约患者开支和减少检测工作量等目的，为支原体病的及时有效治疗提供了保证。
联合型支原体检测试剂是一种液体培养基，其制备方法如下1、培养基新鲜牛肉浸出液及猪胃或肺消化液的提取(1)、牛肉浸出液的提取新鲜牛肉1～2斤绞碎后，加500～1000ml蒸馏水浸泡10～25小时，煮沸过滤取其滤液。
(2)、猪胃或肺消化液的提取取新鲜猪胃或肺1～2斤，绞碎，加500～1000ml蒸馏水、0.3～2克蛋白酶，消化10～25小时，煮沸过滤，取其滤液。
2、基础培养基的配制按下列比例将下列物质混合牛肉浸出液 300～600ml猪胃或肺消化液 100～400ml氯化钠 3～5克磷酸二氢钾 1～3克蛋白胨 5～20克待固体化学物质完全溶解后，煮沸后过滤备用。
3、完全培养基的配制按下列比例将下列物质混合基础培养基 500～900ml新鲜小牛血清 100～500ml新鲜酵母液 50～150ml(5～15％)
脲素 0.5～2克精氨酸3～15克酚红 50～150毫克青霉素50～150万单位完全培养基配制完成后，即为联合型支原体检测试剂。该试剂既有利于解脲型支原体生长，又有利于人型支原体生长。并含有为解脲型支原体分解利用为能源的尿素和为人型支原体分解为能量的精氨酸，尿素和精氨酸被分解后释放出NH4+，使试剂pH值升高，最终使培养基中的酚红指示剂从黄色变成红色。
本发明能高效地同时检出人型支原体和解脲型支原体，与单一支原体检测试剂比较，其特点是性能稳定，判断标准直观，特异性强，检出率高，不需特殊设备，24小时即可报结果。本试剂已在6家综合性医院试用，观察了5000多例病例，效果很好。为支原体感染病的及时有效治疗提供了保证。
权利要求
1.联合型支原体检测试剂，其特征在于，由下述物质按比例混合而成基础培养基 500～900ml新鲜小牛血清 100～500ml新鲜酵母液 50～150ml(5～15％)脲素 0.5～2克精氨酸 3～15克酚红 50～150毫克青霉素 50～150万单位
2.根据权利要求1所述的联合型支原体检测试剂，其特征在于，所说的基础培养基由下述物质按比例混合而成牛肉浸出液 300～600ml猪胃或肺消化液 100～400ml氯化钠 3～5克磷酸二氢钾 1～3克蛋白胨 5～20克
3.联合型支原体检测试剂的制备方法，其特征在于，将500～900ml基础培养基、100～500ml新鲜小牛血清、50～150ml(5～15％)新鲜酵母液、0.5～2克尿素、3～15克精氨酸50～150毫克酚红与50～150万单位青霉素按比例混合而成。
4.根据权利要求3所述的联合型支原体检测试剂的制备方法，其特征在于，所说的基础培养基由300～600ml牛肉浸出液、100～400ml猪胃或肺消化液、3～5克氯化钠、1～3克磷酸二氢钾与5～20克蛋白胨按比例混合而成。
5.根据权利要求4所述的联合型支原体检测试剂的制备方法，其特征在于，所说的牛肉浸出液的制备方法是将新鲜牛肉绞碎后，按1～2斤牛肉比500～1000ml蒸馏水浸泡10～25小时，煮沸过滤取其滤液。
6.根据权利要求4所述的联合型支原体检测试剂的制备方法，其特征在于，所说的猪胃或肺消化液的制备方法是将新鲜猪胃或肺绞碎后，按1～2斤猪胃或肺加500～1000ml蒸馏水和0.3～2克蛋白酶的比例，消化10～25小时，煮沸过滤，取其滤液。
全文摘要
一种联合型支原体检测试剂及制备方法,由基础培养基、新鲜小牛血清、新鲜酵母液、脲素、精氨酸、酚红与青霉素按一定比例混合而成,该试剂既有利于解脲型支原体生长,又有利于人型支原体生长,并含有为解脲型支原体分解利用为能源的尿素和为人型支原体分解为能量的精氨酸,本发明性能稳定,判断标准直观,特异性强,检出率高,不需特殊设备,24小时即可报结果。为支原体感染病的及时有效治疗提供了保证。
文档编号C12N1/20GK1270227SQ00113758
公开日2000年10月18日 申请日期2000年3月15日 优先权日2000年3月15日
发明者黄威权, 姚兵 申请人:黄威权, 姚兵