一种熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量检测方法，采用高效液相法测定熟地黄中5-羟甲基糠醛，色谱条件，采用C18柱或C8，流动相为5-15∶95-85的醋酸乙酯-0.5％醋酸水溶液或体积比为10-15:90-85乙腈-水溶液，等度洗脱，检测波长为280-284nm。该方法操作简便、灵敏度高，重现性好。
【专利说明】一种熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量检测方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及中药材化学成分的检测，特别涉及熟地黄中的检测方法。
【背景技术】
[0002]熟地黄为玄参科植物地黄的块根，经加工蒸晒而成。具有补血滋润；益精填髓的功能。用血虚萎黄；眩晕心悸；月经不调；崩不止；肝肾阴亏；潮热盗汗；遗精阳痿；不育不孕；腰膝酸软；耳鸣耳聋；头目昏花；须发早白；消渴；便秘；肾虚喘促等症。
[0003]5-羟甲基糠醛(5-HMF)，又称5_羟甲基_2_糠醛，是由葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下产生的一个醛类化合物，是Maillard反应的典型产物之一。文献中表述该化合物对人体横纹肌和内脏有损害，具有神经毒性，能与人体蛋白质结合产生积蓄中毒，2010年版中国药典二部中明确规定了它在含葡萄糖注射液中的限量。此外，近年来也有研究表明，它具有抗氧化、抗心肌缺血、改变血液流变学等对人体有益的作用。目前5-HMF测定主要为UV法和HPLC法，熟地黄应用广泛，在加工干制的过程中会产生5-HMF，但是熟地黄药材中5-HMF的含量测定未见文献报道，因此本实验采用HPLC-UV建立熟地黄药材中5-HMF的含量测定方法，对于研究炮制作用机理，规范炮制工艺，控制饮片炮制质量具有一定意义。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种简便、快速、准确、重复性好的熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量检测方法。
[0005]本发明提供的熟地黄中5-羟甲基糠醛含量的检测方法，包括以下步骤
[0006](A)供试品溶液的制备；
[0007](B)对照品溶液的制备；
[0008](C)高效液相色谱法测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，按照一定的色谱条件测定，外标法定量，计算，即得。
[0009]上述步骤(A)为取过60目筛的熟地黄药材粉末，冰浴超声或冰浴振摇提取，将得到提取离心，过滤，定容，过0.45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0010]进一步的，上述步骤(A)为取过60目筛的熟地黄药材粉末0.5-1.5g，精密称定，置离心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超声或冰浴振摇提取，每次20-30min，共提取3_4次，合并提取液，离心，过滤，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，摇匀，过0.45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0011]更进一步的，上述步骤(A)为取过60目筛的熟地黄药材粉末约l.0Og，精密称定，置离心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超声提取，每次25min，共提取3次，合并提取液，离心，过滤，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，摇匀，过0.45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0012]上述步骤(B)为精密称取5-HMF对照品，加醋酸乙酯溶解，定容，摇匀即得。
[0013]进一步的，取5-HMF对照品5.00-8.0Omg，精密称定，置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，摇匀。从中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀即得，4°C储藏备用。
[0014]更进一步的，精密称取5-HMF对照品6.0Omg置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，摇匀。从中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀即得，4°C储藏备用。
[0015]上述的步骤(C)中的色谱条件可以采用下述的色谱条件:
[0016]色谱柱:选自C18或C8柱；
[0017]流动相:选自体积比为5-15: 95-85的醋酸乙酯-0.5%醋酸水溶液或体积比为10-15:90-85乙腈-水溶液，等度洗脱；
[0018]流速:0.8-1.2mL.mirf1 ；
[0019]检测波长:280_284nm;
[0020]柱温:25-35O ；
[0021]进样量:10-20yL;
[0022]更进一步的，上述的步骤(C)中的色谱条件为
[0023]色谱柱:C18；
[0024]流速:ImL.mirf1 ；
[0025]检测波长:284nm；
[0026]柱温:30°C;
[0027]进样量:1yL;
[0028]本发明采用的方法和实验条件是经过筛选获得的，能够达到精确测定的目的
[0029]本发明所提供的熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量检测方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到的，通过对样品、供试品处理方法的筛选，流动相的选择，建立了熟地黄中5-羟甲基糠醛的含量检测方法HPLC分析方法，尤其是该方法供试品处理方法简单不需要过色谱柱、也不需要用毒有机溶剂反复萃取。该方法操作简便，重复性和稳定性好，结果准确可靠。
[0030]为了进一步说明本发明方法的有益效果，将方法学验证举例如下:
[0031]1.1仪器与试剂AgilentllOO型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，万分之一天平(AL204梅特勒-托利多仪器有限公司)，十万分之一天平(XS105梅特勒-托利多仪器有限公司)，Mill1-Q超纯水机，电热鼓风干燥箱(天津市天宇实验仪器有限公司制造)，超声波清洗器(KQ5200型，昆山市超声波仪器有限公司)，L-550低速自动平衡离心机(长沙湘仪离心仪器有限公司)，WK-200B高速药物粉碎机(青州市精诚机械有限公司)。
[0032]5-HMF对照品(批号111626-201308，中国食品药品检定研究院)，醋酸乙酯(色谱纯)，醋酸(色谱纯)，水为实验室自制超纯水，其他试剂均为分析纯。
【具体实施方式】
[0033]以下通过实施例进一步说明本发明。
[0034]实施例1
[0035]供试品溶液的制备过60目筛的取熟地黄药材粉末约1.00g，精密称定，置离心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超声提取，每次25min，共提取4次，合并提取液，离心，过滤，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，摇匀，过0.45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0036]对照品溶液的制备精密称取5-HMF对照品6.07mg置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，摇匀。从中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀即得，4 °C储藏备用。
[0037]高效液相色谱法测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，以C18色谱柱、醋酸乙酯-0.5%醋酸水(15: 85)溶液的流动相等度洗脱、流速ImL.min'检测波长284nm、柱温30°C的色谱条件测定，外标法定量，计算，即得。
[0038]实施例2
[0039]供试品溶液的制备过60目筛的取熟地黄药材粉末约0.50g，精密称定，置离心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超声提取，每次20min，共提取3次，合并提取液，离心，过滤，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，摇匀，过0.45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0040]对照品溶液的制备取5-HMF对照品5.0Omg，精密称定，置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，摇匀。从中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀即得，4°C储藏备用。
[0041]高效液相色谱法测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，以C18色谱柱；流动相:醋酸乙酯-0.5%醋酸水(15: 85)溶液的流动相等度洗脱；流速0.8mL.mirT1 ;检测波长280nm ;柱温25°C的色谱条件测定,外标法定量,计算，即得。
[0042]实施例3
[0043]供试品溶液的制备过60目筛的取熟地黄药材粉末约1.50g，精密称定，置离心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超声提取，每次35min，共提取4次，合并提取液，离心，过滤，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，摇匀，过0.45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0044]对照品溶液的制备取5-HMF对照品8.0Omg，精密称定，置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，摇匀。从中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀即得，4°C储藏备用。
[0045]高效液相色谱法测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，以C8色谱柱；流动相:醋酸乙酯-0.5%醋酸水(10: 85)溶液的流动相等度洗脱；流速1.2mL.mirT1 ;检测波长282nm ;柱温35°C的色谱条件测定,外标法定量,计算，即得。
【权利要求】
1.一种熟地黄中5-羟甲基糠醛含量的检测方法，包括以下步骤 (A)供试品溶液的制备:取过60目筛的熟地黄药材粉末约1.00g，精密称定，置离心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超声提取，每次25min，共提取4次，合并提取液，离心，过滤，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，摇匀，过0.45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液。； (B)对照品溶液的制备:精密称取5-HMF对照品6.0Omg置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，摇匀。从中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀即得，4 °C储藏备用。； (C)高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，以C18色谱柱、醋酸乙酯-0.5%醋酸水(15: 85)的流动相等度洗脱、流速ImL.min'检测波长284nm、柱温30°C的色谱条件测定，外标法定量，计算，即得。
【文档编号】G01N30/02GK104237400SQ201410438257
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】李晓枫 申请人:李晓枫