一种检测鸡蛋花药材或鸡蛋花提取物质量的方法
【专利摘要】本发明提供了一种检测鸡蛋花药材或鸡蛋花提取物质量的方法，它是采用HPLC方法检测夹竹桃科鸡蛋花属植物鸡蛋花Plumeriarubra L.的干燥花朵、其提取物的质量，采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：以十八烷基键合相硅胶为填充剂，以乙腈-0.5％磷酸水(8:92)为流动相，检测波长为210nm。发明人研究发现，15-去甲基鸡蛋花苷是鸡蛋花中含有的环烯醚萜苷类成分之一，且其含量比较高，可用于鸡蛋花花朵的质量检测和控制。本发明首次采用HPLC法测定鸡蛋花中15-去甲基鸡蛋花苷的含量，为鸡蛋花的质量标准提供了科学依据。
【专利说明】一种检测鸡蛋花药材或鸡蛋花提取物质量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测鸡蛋花药材或鸡蛋花提取物质量的方法。
【背景技术】
[0002] 鸡蛋花，又名缅桅子，蛋黄花，擂捶花，是夹竹桃科鸡蛋花属植物鸡蛋花 PlumeriarubraL.的干燥花朵。它原产于热带美洲，现广泛栽种于全球热带地区，在我国 则主产于广东、福建、广西、海南等地。其味甘、淡，性凉，具有清热利湿止痢，润肺止咳解毒 之功效，临床上可用于湿热下痢，里急后重，肺热咳嗽等症，疗效确切。它是岭南地区习用草 药，也是广东凉茶的主要原料药材之一，如市场销售的著名品牌凉茶"王老吉凉茶" "五花 茶"等都是以鸡蛋花为主要组成原料。随着凉茶产业的发展，对鸡蛋花的需求量也越来越 大，同时其质量问题也日益突出。鸡蛋花中的环烯醚萜类物质具有很强的抗真菌、抑制HIV 病毒和肿瘤活性作用，但从已报道的文献中看，主要是对其挥发油进行研究，尚不见有对其 环烯醚萜类物质的含量进行测定。
[0003] 15-去甲基鸡蛋花苷在鸡蛋花的根皮中有相关文献报道（洪挺，等，鸡蛋花中化学 成分及生物活性研究进展，天然产物研究与开发，2011，23 :565-570)，但在花朵中没有报道 是否含有15-去甲基鸡蛋花苷。
【发明内容】
[0004] 本发明的技术方案是提供了一种检测鸡蛋花药材或鸡蛋花提取物质量的方法。
[0005] -种检测鸡蛋花药材或鸡蛋花提取物质量的方法，其特征在于：它是采用HPLC 方法检测夹竹桃科鸡蛋花属植物鸡蛋花PlumeriarubraL.的干燥花朵、其提取物的质 量，采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：以十八烷基键合相硅胶为填充剂，以乙 腈-0.5%磷酸水（8:92)为流动相，检测波长为210nm。
[0006] 进一步优选地，所述的色谱条件为：Agilentl200高效液相色谱仪，KromasilC18 色谱柱（250X4. 6mm，5iim);流动相为乙腈-0. 5 %磷酸水（8:92)，流速：1.OmL/min，等度洗 脱15min;柱温：30°C，检测波长：210nm，进样量：10iiL。具体地，它包括如下步骤：
[0007]a、对照品溶液的制备：
[0008] 取15-去甲基鸡蛋花苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lmL含0.103mg 的溶液，即得；
[0009]b、供试品溶液的制备
[0010] 取药材粗粉约〇. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，称定重 量，超声提取（l〇〇W，40kHz) 30分钟，冷却，再称定重量，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀， 滤过，滤液再以〇. 45ym微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
[0011] C、按上述的色谱条件检测。
[0012] 发明人研究发现，15-去甲基鸡蛋花苷是鸡蛋花中含有的环烯醚萜苷类成分之一， 且其含量比较高，可用于鸡蛋花花朵的质量检测和控制。本发明首次采用HPLC法测定鸡蛋 花中15-去甲基鸡蛋花苷的含量，为鸡蛋花的质量标准提供了科学依据。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1对照品（A)及样品⑶色谱图
[0014] 115-去甲基鸡蛋花苷
[0015] 图2样品含量均值图
【具体实施方式】
[0016] 实施例1本发明鸡蛋花药材的质量检测方法
[0017] 1仪器与材料
[0018] 安捷伦1200型高效液相色谱仪（四元泵、柱温箱、VWD检测器，美国安捷伦科技）； TU-1810型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器）；SartoriusBP124S型电子天平 (感量：〇?lmg，德国）；SartoriusBP211D型电子天平（感量：0?Olmg，德国）；KQ250B型超 声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；LSF-80型高速粉碎机（常德市中药机械厂）。
[0019] 购买市售鸡蛋花药材（产于广东、广西、云南、湖北共11批），经广州中医药大学 中药学院赵斌博士后鉴定为夹竹桃科鸡蛋花属植物鸡蛋花PlumeriarubraL.的干燥花朵。 15-去甲基鸡蛋花苷（上海远慕生物科技有限公司，CAS: 132586-69-7)。乙腈为色谱纯 (ProductofTedia,UnitedStatesofAmerica)，憐酸为分析纯（广东光华化学厂有限公 司），水为重蒸馏水，其余所用试剂均为分析纯。
[0020] 2色谱条件及系统适应性
[0021] Agilentl200 高效液相色谱仪（VWD检测器），KromasilC18 色谱柱（250X4. 6mm， 5iim);流动相为乙腈-0. 5 %磷酸水（8:92)，流速：1.OmL/min，等度洗脱15min;柱温： 30°C，检测波长：210nm，进样量：10iiL。
[0022] 在该色谱条件下，精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10UL注入液相色谱仪，记 录色谱图。结果见图1 :15_去甲基鸡蛋花苷在11.lmin出峰，峰形对称；供试品色谱中，在 与之相应的位置上有相应的峰出现，分离度大于1. 5,理论塔板数（n)按15-去甲基鸡蛋花 苷峰计算应不低于6000。
[0023] 3方法学考察
[0024] 3. 1线性关系考察
[0025] 精密称取15-去甲基鸡蛋花苷对照品5.Omg，置于10.OmL棕色容量瓶中，用甲 醇溶解并定容至刻度，摇匀备用。准确吸取此储备液分别配置成浓度为〇. 〇257mg?mL' 0? 0515mg?mL\0. 103mg?mL\0. 1545mg?mL^O. 206mg?mL\0. 2575mg?mL1 的对照品溶 液。精密吸取各浓度对照品溶液10uL注入液相色谱仪，按拟定的色谱条件进行测定，记录 峰面积。以进样量X(iig)为横坐标，峰面积Y为纵坐标作图，绘制标准曲线，得回归方程 为：Y= 933. 01X+11. 352(r= 0. 9997)。结果表明，15-去甲基鸡蛋花苷进样量在0. 257? 2. 575yg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。
[0026] 3. 2精密度试验
[0027] 精密吸取同一对照品液10UL注入液相色谱仪，连续进样6次，测定15-去甲基鸡 蛋花苷峰面积，RSD为1. 43%，表明仪器精密度好。
[0028] 3. 3重复性试验
[0029] 称取同一批次药材粗粉6份，每份0.2g，按供试品制备方法平行制备6份供试品溶 液，分别精密吸取10UL注入液相色谱仪，记录峰面积，计算15-去甲基鸡蛋花苷含量，RSD 为0.62%，表明采用该方法提取和检测的重复性良好。
[0030] 3. 4稳定性试验
[0031] 精密吸取同一供试品溶液10UL，分别于0，2，4,6，8，12，24h进样测定，记录峰面 积，计算15-去甲基鸡蛋花苷含量，RSD为1. 26%，表明样品供试液在24h内稳定。
[0032] 3. 5回收率试验
[0033] 称取已知含量（7. 399mg/g)的药材粗粉9份，每份约0.lg，精密称定，分成3组， 每组分别精密加入浓度为1. 〇3mg/mL对照品溶液0. 35mL，0. 70mL，1. 05mL，再加50%甲醇 至25mL，称重，超声提取30分钟，冷却，再称定重量，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，滤液再以〇. 45ym微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。精密吸取10yL进样，测定峰面积， 计算回收率，结果见表1。高、中、低浓度组的平均加样回收率分别为104. 02%，103. 93%， 102. 01 %，RSD分别为0.72% ,0.56% ,1.71%(n= 9)，表明该方法准确度高。
[0034] 表1加样回收率试验
[0035]
【权利要求】
1. 一种检测鸡蛋花药材或鸡蛋花提取物质量的方法，其特征在于：它是采用HPLC方法 检测夹竹桃科鸡蛋花属植物鸡蛋花Plumeriarubra L.的干燥花朵、其提取物的质量，采用 高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：以十八烷基键合相硅胶为填充剂，以乙腈_〇. 5 % 磷酸水（8:92)为流动相，检测波长为210nm。
2. 根据权利要求2所述的质量检测方法，其特征在于：所述的色谱条件为： Agilentl200高效液相色谱仪，Kromasil C18色谱柱（250X4.6mm，5iim);流动相为乙 腈-0? 5%磷酸水（8:92)，流速：1. OmL/min，等度洗脱15min ;柱温：30°C，检测波长：210nm, 进样量：10iiL。
3. 根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于：它包括如下步骤： a、 对照品溶液的制备： 取15-去甲基鸡蛋花苷对照品适量，精密称定，加50 %甲醇制成每lmL含0. 103mg的溶 液，即得； b、 供试品溶液的制备 取药材粗粉〇. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50 %甲醇25mL，称定重量，超 声提取（l〇〇W，40kHz) 30分钟，冷却，再称定重量，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 滤液再以〇. 45 y m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； c、 按权利要求1或2所述的色谱条件检测。
【文档编号】G01N30/02GK104458933SQ201410573186
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】赵斌, 邓仙梅, 李蓉, 刘敬, 王琼, 柳锐娜 申请人:中山火炬职业技术学院, 赵斌