一种九节茶药材的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种九节茶药材的检测方法，包括如下步骤：1)对照品溶液的制备；2)标准曲线的制备：量取对照品溶液,测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；3)供试品溶液的制备；4)量取供试品溶液，测定吸光度，由标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量，计算，即得总酚的含量；5)量取供试品溶液，测定吸光度，由标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量，计算，即得不被吸附的多酚的含量；6)供试品中鞣质含量的计算。本发明能很好地控制九节茶药材的质量，进一步提高了其质量控制标准，保证其质量的稳定、均一、可控。同时，该方法进一步提高了鞣质的提取效率和结果的准确度，节省了检验工时。
【专利说明】-种九节茶药材的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种中药材的检测分析方法，具体设及一种九节茶药材的检测方法， 属于中药材分析【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 九节茶又名接骨金粟兰、九节花、九节风等，为金粟兰科植物草珊瑚Sarcan化a gl油ra (Thunb.)化kai的干燥地上部分，主要分布于我国长江W南的广东、广西、江西、福 建、湖南、浙江等省区，为多年生常绿草本或亚灌木植物。九节茶的药用历史悠久，历代医书 都有记载其广泛的药用价值。它具有清热凉血、消炎止痛、活血消斑、枯风除湿、舒筋活络等 功效，用于流行性感冒、风热感冒、咽喉炎、肺炎、菌频、急性胃肠炎、阔尾炎、疮瘍脈肿、蜂窝 织炎等。
[0003] 九节茶含酪类、踩质、黄酬巧、香豆素、有机酸、内醋等成分，其中踩质（tannins) 又称单宁，是广泛存在于植物体内一类结构比较复杂的多元酪类化合物。W前对踩质的研 究较少，多认为是无用的杂质将其去除，近年来，随着分析、分离手段的进步，逐步发现踩质 具有抑制脂质过氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性，使其在临床应用中日益受到 重视，并且对踩质的含量测定方法提出了更高的要求。目前，关于九节茶药材中异嗦皮晚、 迷迭香酸等成分的含量测定有较多报道，但是关于该药材中踩质成分的含量测定尚未见文 献报道。踩质含量测定方法有干酪素法、皮粉法、高铺酸钟法、络合滴定法等，其中最常用的 是干酪素法。干酪素法是《中国药典》2010年版一部收载的踩质含量测定方法，但该测定法 中对所使用的试剂"干酪素"未作明确规定，不同生产厂家生产的干酪素W及同一厂家生产 的不同批次的干酪素均对踩质含量测定结果的影响很大，导致测定结果的重复性差、准确 度低，从而影响到九节茶药材的质量可控性。此外，该测定方法中供试品溶液制备时需放置 过夜，操作用时长，踩质提取不完全，也影响到测定结果的准确性。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的不足，本发明的目的旨在提供一种九节茶药材的检测方法，上述 检测方法具有可操作性强、重复性好、准确度高、操作用时短的特点，上述检测方法能很好 地控制九节茶药材的质量，进一步提高了其质量控制标准，保证其质量的稳定、均一、可控。 同时，该方法进一步提高了踩质的提取效率和结果的准确度，节省了检验工时。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 一种九节茶药材的检测方法，其特征在于，包括如下步骤（W下步骤应避光操 作）：
[0007] 1)对照品溶液的制备；精密称取没食子酸对照品50mg，置100ml栋色量瓶中，加水 溶解并稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml栋色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品 溶液，每1ml对照品溶液中含没食子酸0. 05mg ;
[0008] 2)标准曲线的制备；精密量取对照品溶液0. 5ml、1. 0ml、2. 0ml、3. 0ml、4. 0ml、 5. 0ml，分别置25ml栋色量瓶中，各加入磯钢鹤酸试液1ml，再分别加水11. 5ml、11ml、10ml、 9ml、8ml、7ml，用浓度为29 %的碳酸钢溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟W相应的试剂为 空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，W吸光度为纵坐标，浓度 为横坐标，绘制标准曲线；
[0009] 3)供试品溶液的制备；取定量的九节茶药材粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，力口 水250ml，称定重量，经过提取，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，静置使固体 物沉淀，滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液20ml，置100ml栋色量瓶中，用水稀释至刻 度，摇匀，即得供试品溶液。
[0010] 4)供试品溶液中总酪的测定；精密量取供试品溶液2ml，置25ml栋色量瓶中，加入 磯钢鹤酸试液1ml，加水10ml，用浓度为29 %的碳酸钢溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟 W相应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，由步骤 2)的标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得总酪的含量；
[0011] 5)供试品溶液中不被吸附的多酪的测定；精密量取供试品溶液25ml，加至已盛有 0. 6g干酪素极细粉的100ml具塞锥形瓶中，密塞，置30°C水浴中保温1小时，时时振摇，取 出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml栋色量瓶中，加入磯钢鹤酸 试液1ml，加水10ml，用浓度为29 %的碳酸钢溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟W相应的 试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，由步骤2)的标准 曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得不被吸附的多酪的含量；
[0012] 6)供试品中踩质含量的计算；根据供试品溶液稀释倍数分别计算出供试品中的 总酪量和不被吸附的多酪量，再按下式计算供试品中踩质的含量：踩质含量=总酪量一不 被吸附的多酪量。
[0013] 所述九节茶药材是指金粟兰科植物草珊瑚Sarcan化a gl油ra(Thunb.)化kai的干 燥地上部分，除去杂质，洗净，切段，晒干。
[0014] 实现本发明的目的还可W通过采取如下技术方案达到：
[0015] 作为优选，在步骤5)中，所述的干酪素极细粉是指能全部通过八号筛，并含能通 过九号筛不少于95%的干酪素粉末。
[0016] 作为优选，在步骤3)中，所述的九节茶药材粉末取样量为0. 5g。
[0017] 作为优选，在步骤3)中，所述的提取方法为加热回流提取或加热超声处理。
[001引作为优选，在步骤3)中，加热回流提取的时间为0. 5-1小时。
[0019] 作为优选，在步骤3)中，加热超声处理的时间为1-2小时。
[0020] 与现有技术相比，本发明具有W下有益效果：
[0021] 1.本发明首次建立了一种能准确测定九节茶药材中踩质的含量测定方法，该方 法能很好地控制九节茶药材的质量，进一步提高了其质量控制标准，保证其质量的稳定、均 一、可控。
[0022] 2.《中国药典》2010年版一部收载的踩质含量测定方法采用干酪素法，本发明通过 大量创造性的实施例发现该测定法中所使用的试剂"干酪素"对踩质的含量测定结果影响 很大。采用不同生产厂家生产的干酪素W及同一厂家生产的不同批次的干酪素对多批九节 茶药材分别进行了踩质含量测定，结果同一批九节茶药材分别采用不同生产厂家生产的干 酪素W及同一厂家生产的不同批次的干酪素其踩质含量测定结果偏差很大，进而发现是由 于"干酪素"的粒度差异造成了测定结果的偏差大，使用粒度为"极细粉"的干酪素时，测定 结果明显高于使用粒度为"中粉"的干酪素。为了进一步确定干酪素粒度与踩质含量测定结 果的相关性，将原厂家生产的粒度为中粉的干酪素粉碎成极细粉后，与粉碎前作了对比研 究，结果也表明当干酪素粒度为"极细粉"时，样品的踩质含量测定结果明显高于"中粉"，且 测定结果重复性很好。原因是干酪素在该测定法中的作用是选择性地吸附踩质类成分，起 到定量反应的作用，其吸附作用强弱直接影响到供试品中踩质含量测定结果的准确性。由 于"踩质含量=总酪量一不被吸附的多酪量"，而不同生产厂家生产的干酪素其粒度差异较 大，干酪素的吸附能力取决于其粒度大小，粒度小者比表面积大，对供试品中的踩质吸附完 全，供试品踩质的含量测定结果准确度高。干酪素粒度大者其比表面积小，吸附作用弱，使 不被吸附的多酪含量偏高，从而导致供试品踩质的含量测定结果偏低。《中国药典》2010年 版一部收载的踩质含量测定方法中对所使用的试剂"干酪素"未作明确规定，针对该方法中 的不足之处，本发明中建立的方法将干酪素粒度明确为"极细粉"，新建立的方法重复性好、 准确度高，提高了九节茶药材质量的可控性。
[0023] 3.《中国药典》2010年版一部收载的踩质含量测定方法中供试品溶液制备时需放 置过夜，操作用时长，踩质提取不完全，本发明供试品溶液的制备采用加热回流法或加热超 声法代替供试品的静置过夜，提高了踩质的提取效率和结果的准确度，节省了检验工时。
[0024] 综上所述，本发明建立的九节茶药材中踩质的含量测定方法具有可操作性强、重 复性好、准确度高、操作用时短等优点，方法能很好地控制九节茶药材的质量，进一步提高 了其质量控制标准，保证其质量的稳定、均一、可控。为达到本发明的目的，发明中还对九节 茶药材中踩质的含量测定方法进行了重复性、中间精密度、加样回收率等方法学验证试验， 试验结果表明，该方法重复性好、准确度高。此外，本发明中建立的方法对其他药材及其制 剂中踩质的含量测定也提供了很好的借鉴作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0025] 图1是本发明的没食子酸线性关系图。
【具体实施方式】
[0026] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面通过具体实施例对 本发明作进一步的详细说明，该些实施例仅用于阐述本发明，而不是限制本发明的保护范 围。
[0027] 本发明提供的含量测定方法中所用试剂及药材均为市售，干酪素为化学纯，分别 由洛阳市化学试剂厂、灿头市西晚化工厂及广东环凯微生物科技有限公司提供，九节茶药 材由广州采芝林药业有限公司提供，没食子酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批 号110831-200302。水为超纯水，其它试剂为分析纯。主要仪器有日本岛津公司UV-2450 型紫外分光光度计，KQ-600DE型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司），Precisa 404A、92SM-202A型电子分析天平等。
[002引实施例1 ;
[0029] 不同生产厂家的干酪素对九节茶药材中踩质含量测定结果的影响：
[0030] 一种九节茶药材的检测方法，包括如下步骤（W下步骤应避光操作）：
[003U 1)对照品溶液的制备；精密称取没食子酸对照品50. 08mg，置100ml栋色量瓶中， 加水溶解并稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml栋色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得浓 度为0. 05008mg/ml的没食子酸对照品溶液。
[0032] 2)标准曲线的制备；精密量取上述对照品溶液0. 5ml、1. 0ml、2. 0ml、3. 0ml、 4. 0ml、5. 0ml，分别置25ml栋色量瓶中，各加入磯钢鹤酸试液1ml，再分别加水11. 5ml、 11ml、10ml、9ml、8ml、7ml，用29 %碳酸钢溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟W相应的试剂 为空白，照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，W吸光度为纵坐标，浓度 为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y = 0. 1232X+0. 0517, r = 0.9994,结果表明，没食 子酸对照品浓度在1. 0016 y g/na-lO. 016 y g/ml之间与其吸光度呈良好的线性关系。见附 图1。
[0033] 3)供试品溶液的制备；取九节茶药材粉末约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，力口 水250ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，静置 (使固体物沉淀），滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液20ml，置100ml栋色量瓶中，用 水稀释至刻度，摇匀，即得。
[0034] 4)供试品溶液中总酪的测定；精密量取供试品溶液2ml，置25ml栋色量瓶中，加入 磯钢鹤酸试液1ml，加水10ml，用浓度为29 %的碳酸钢溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟 W相应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，从标准 曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得总酪的含量；
[0035] 5)供试品溶液中不被吸附的多酪的测定；精密量取供试品溶液25ml，加至已盛有 0. 6g干酪素极细粉的100ml具塞锥形瓶中，密塞，置30°C水浴中保温1小时，时时振摇，取 出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml栋色量瓶中，加入磯钢鹤酸 试液1ml，加水10ml，用浓度为29 %的碳酸钢溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟W相应的 试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，从标准曲线中读 出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得不被吸附的多酪的含量；
[0036] 6)供试品中踩质含量的计算；根据供试品溶液稀释倍数分别计算出供试品中的 总酪量和不被吸附的多酪量，再按下式计算供试品中踩质的含量：踩质含量=总酪量一不 被吸附的多酪量。
[0037] 试验结果显示，同一批九节茶药材采用不同生产厂家生产的干酪素（不同生产厂 家生产的干酪素粒度差别很大）测得的踩质含量偏差很大，使用粒度为"极细粉"的干酪素 时，测定结果明显高于使用粒度为"中粉"的干酪素，表明该测定法中所使用的试剂"干酪 素"对踩质的含量测定结果影响较大。见表1。
[003引表1不同生产厂家（粒度）的干酪素对九节茶药材中踩质含量测定结果的影响
[0039]
【权利要求】
1. 一种九节茶药材的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水溶 解并稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶 液，每lml对照品溶液中含没食子酸0. 05mg ; 2) 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0. 5ml、l. 0ml、2. 0ml、3. 0ml、4. 0ml、5. 0ml， 分别置25ml棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液lml，再分别加水11. 5ml、11ml、10ml、9ml、 8ml、7ml，用浓度为29 %的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂为空 白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为 横坐标，绘制标准曲线； 3) 供试品溶液的制备：取定量的九节茶药材粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水 250ml，称定重量，经过提取，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，静置使固体物 沉淀，滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀释至刻 度，摇匀，即得供试品溶液。 4) 供试品溶液中总酚的测定：精密量取供试品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入磷钼 钨酸试液lml，加水10ml，用浓度为29 %的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相 应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，由步骤2)的 标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得总酚的含量； 5) 供试品溶液中不被吸附的多酚的测定：精密量取供试品溶液25ml，加至已盛有0.6g 干酪素极细粉的l〇〇ml具塞锥形瓶中，密塞，置30°C水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放 冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入磷钼钨酸试液 lml，加水10ml，用浓度为29 %的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂 为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，由步骤2)的标准曲线 中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得不被吸附的多酚的含量； 6) 供试品中鞣质含量的计算：根据供试品溶液稀释倍数分别计算出供试品中的总酚 量和不被吸附的多酚量，再按下式计算供试品中鞣质的含量：鞣质含量=总酚量一不被吸 附的多酚量。
2. 根据权利要求1所述的九节茶药材的检测方法，其特征在于：在步骤5)中，所述的 干酪素极细粉是指能全部通过八号筛，并含能通过九号筛不少于95%的干酪素粉末。
3. 根据权利要求1所述的九节茶药材的检测方法，其特征在于：在步骤3)中，所述的 九节茶药材粉末取样量为〇. 5g。
4. 根据权利要求1所述的九节茶药材的检测方法，其特征在于：在步骤3)中，所述的 提取方法为加热回流提取或加热超声处理。
5. 根据权利要求4所述的九节茶药材的检测方法，其特征在于：在步骤3)中，加热回 流提取的时间为0.5-1小时。
6. 根据权利要求4所述的九节茶药材的检测方法，其特征在于：在步骤3)中，加热超 声处理的时间为1-2小时。
【文档编号】G01N21/31GK104502290SQ201410799277
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月17日 优先权日:2014年12月17日
【发明者】王文楚, 彭红英, 陆颂规, 江涛, 陈雪华, 刘敏珊, 杨滨宾, 陈晓坚, 程君璐 申请人:广州白云山敬修堂药业股份有限公司