一种九节茶提取物及其制剂的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药材提取物及其制剂的检测分析方法，具体涉及一种九节茶提 取物及其制剂的检测方法，属于药物分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 九节茶又名接骨金粟兰、九节花、九节风等，为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb. )Nakai的干燥地上部分，主要分布于我国长江以南的广东、广西、江西、福 建、湖南、浙江等省区，为多年生常绿草本或亚灌木植物。九节茶的药用历史悠久，历代医书 都有记载其广泛的药用价值。它具有清热凉血、消炎止痛、活血消斑、祛风除湿、舒筋活络等 功效，用于流行性感冒、风热感冒、咽喉炎、肺炎、菌痢、急性胃肠炎、阑尾炎、疮疡脓肿、蜂窝 织炎等。
[0003] 九节茶含酚类、鞣质、黄酮苷、香豆素、有机酸、内酯等成分，其中鞣质（tannins) 又称单宁，是广泛存在于植物体内一类结构比较复杂的多元酚类化合物。以前对鞣质的研 宄较少，多认为是无用的杂质将其去除，近年来，随着分析、分离手段的进步，逐步发现鞣质 具有抑制脂质过氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性，使其在临床应用中日益受到 重视，并且对鞣质的含量测定方法提出了更高的要求。目前，关于九节茶相关制剂中异嗪皮 啶、迷迭香酸等成分的含量测定有较多报道，虽也有关于该制剂中鞣质含量测定的文献报 道，但采用的多是《中国药典》2010年版一部收载的鞣质含量测定方法。鞣质的含量测定方 法有干酪素法、皮粉法、高锰酸钾法、络合滴定法等，其中最常用的是干酪素法。干酪素法是 《中国药典》2010年版一部收载的鞣质的含量测定方法，但该测定法中对所使用的试剂"干 酪素"未作明确规定，不同生产厂家生产的干酪素以及同一厂家生产的不同批次的干酪素 均对鞣质的含量测定结果的影响很大，导致测定结果的重复性差、准确度低，从而影响到产 品的质量可控性。此外，该测定方法中供试品溶液制备时需放置过夜，操作用时长，鞣质提 取不完全，也影响到测定结果的准确性。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的不足，本发明的目的旨在提供一种九节茶提取物及其制剂的检测 方法，上述检测方法具有可操作性强、重复性好、准确度高、操作用时短的特点，上述检测方 法能很好地控制九节茶提取物及其制剂的质量，进一步提高了其质量控制标准，保证其质 量的稳定、均一、可控。同时，该方法进一步提高了鞣质的提取效率和结果的准确度，节省了 检验工时。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 一种九节茶提取物及其制剂的检测方法，其特征在于，包括如下步骤（以下步骤 应避光操作）：
[0007] 1)对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水 溶解并稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品 溶液，每lml对照品溶液中含没食子酸0. 05mg;
[0008]2)标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0. 5ml、1.0ml、2. 0ml、3. 0ml、4. 0ml、 5. 0ml，分别置25ml棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液lml，再分别加水11. 5ml、1lml、10ml、 9ml、8ml、7ml，用浓度为29 %的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂为 空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度 为横坐标，绘制标准曲线；
[0009] 3)供试品溶液的制备：取定量的九节茶提取物或以九节茶提取物制成的固体制 剂粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水250ml，称定重量，经过提取，放冷，再称定重量， 用水补足减失的重量，摇匀，静置使固体物沉淀，滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液 20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
[0010] 4)供试品溶液中总酚的测定：精密量取供试品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入 磷钼钨酸试液lml，加水10ml，用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟 以相应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，由步骤 2)的标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得总酚的含量；
[0011] 5)供试品溶液中不被吸附的多酚的测定：精密量取供试品溶液25ml，加至已盛有 〇. 6g干酪素极细粉的100ml具塞锥形瓶中，密塞，置30°C水浴中保温1小时，时时振摇，取 出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入磷钼钨酸 试液lml，加水10ml，用浓度为29 %的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇勾，放置30分钟以相应的 试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法，在760nm的波长处测定吸光度，由步骤2)的标准 曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg)，计算，即得不被吸附的多酚的含量；
[0012] 6)供试品中鞣质含量的计算：根据供试品溶液稀释倍数分别计算出供试品中的 总酚量和不被吸附的多酚量，再按下式计算供试品中鞣质的含量：鞣质含量=总酚量一不 被吸附的多酚量。
[0013] 所述九节茶提取物或以九节茶提取物制成的固体制剂粉末是指以金粟兰科植物 草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb. )Nakai的干燥地上部分为原料，经水提乙醇沉淀、干燥后 得到的提取物，或所得提取物通过加入一些辅料制成颗粒剂、胶囊剂、片剂等固体制剂经粉 碎后得到的粉末。
[0014] 实现本发明的目的还可以通过采取如下技术方案达到：
[0015] 作为优选，在步骤5)中，所述的干酪素极细粉是指能全部通过八号筛，并含能通 过九号筛不少于95%的干酪素粉末。
[0016] 作为优选，在步骤3)中，所述的九节茶提取物及其制剂的检测方法粉末取样量为 0. 25g〇
[0017] 作为优选，在步骤3)中，所述的提取方法为加热回流提取或加热超声处理。
[0018] 作为优选，在步骤3)中，加热回流提取的时间为0. 5-1小时。
[0019]作为优选，在步骤3)中，加热超声处理的时间为1-2小时。
[0020] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0021] 1.本发明首次建立了一种能准确测定九节茶提取物及其制剂中鞣质的含量测定 方法，该方法能很好地控制九节茶提取物及其制剂的质量，进一步提高了其质量控制标准， 保证其质量的稳定、均一、可控。
[0022] 2.《中国药典》2010年版一部收载的鞣质的含量测定方法采用干酪素法，本发明 通过大量创造性的实施例发现该测定法中所使用的试剂"干酪素"对鞣质的含量测定结果 影响很大。采用不同生产厂家生产的干酪素以及同一厂家生产的不同批次的干酪素对多批 九节茶提取物及其制剂分别进行了鞣质的含量测定，结果同一批九节茶提取物及其制剂分 别采用不同生产厂家生产的干酪素以及同一厂家生产的不同批次的干酪素其鞣质的含量 测定结果偏差很大，进而发现是由于"干酪素"的粒度差异造成了测定结果的偏差大，使用 粒度为"极细粉"的干酪素时，测定结果明显高于使用粒度为"中粉"的干酪素。为了进一 步确定干酪素粒度与鞣质的含量测定结果的相关性，将原厂家生产的粒度为中粉的干酪素 粉碎成极细粉后，与粉碎前作了对比研宄，结果也表明当干酪素粒度为"极细粉"时，样品的 鞣质的含量测定结果明显高于"中粉"，且测定结果重复性很好。原因是干酪素在该测定法 中的作用是选择性地吸附鞣质类成分，起到定量反应的作用，其吸附作用强弱直接影响到 供试品中鞣质的含量测定结果的准确性。由于"鞣质含量=总酚量一不被吸附的多酚量"， 而不同生产厂家生产的干酪素其粒度差异较大，干酪素的吸附能力取决于其粒度大小，粒 度小者比表面积大，对供试品中的鞣质吸附完全，供试品鞣质的含量测定结果准确度高。干 酪素粒度大者其比表面积小，吸附作用弱，使不被吸附的多酚含量偏高，从而导致供试品鞣 质的含量测定结果偏低。《中国药典》2010年版一部收载的鞣质的含量测定方法中对所使 用的试剂"干酪素"未作明确规定，针对该方法中的不足之处，本发明中建立的方法将干酪 素粒度明确为"极细粉"，新建立的方法重复性好、准确度高，提高了九节茶提取物及其制剂 质量的可控性。
[0023] 3.《中国药典》2010年版一部收载的鞣质含量测定方法中供试品溶液制备时需放 置过夜，操作用时长，鞣质提取不完全，本发明供试品溶液的制备采用加热回流法或加热超 声法代替供试品的静置过夜，提高了鞣质的提取效率和结果的准确度，节省了检验工时。
[0024] 综上所述，本发明建立的九节茶提取物及其制剂中鞣质的含量测定方法具有可操 作性强、重复性好、准确度高、操作用时短等优点，方法能很好地控制九节茶提取物及其制 剂的质量，进一步提高了其质量控制标准，保证其质量的稳定、均一、可控。为达到本发明的 目的，发明中还对九节茶提取物及其制剂中鞣质的含量测定方法进行了重复性、中间精密 度、加样回收率等方法学验证试验，试验结果表