一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法
【专利摘要】本发明实施例公开了一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法，应用于临床免疫学检测领域。一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒包括卡壳，甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条，所述卡壳包括上卡壳和下卡壳，所述上卡壳上有观察窗和加样孔，所述下卡壳的卡壳槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条，所述上卡壳和所述下卡壳卡接固定。本发明提供的一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒解决了传统的检测方法的步骤繁琐、检测时间长也定性检测准确性低的问题。
【专利说明】一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及临床免疫学检测领域，尤其涉及一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法。
【背景技术】
[0002]甲胎蛋白(AFP)是一组不均质蛋白质组成的糖蛋白，它们在分子结构上大部分相同，但是结构上的碳水化合物链(糖链)有所不同，故称为AFP异质体。AFP的分子类型与其组织器官的来源不同其糖链结构有所不同。组织细胞在合成分泌甲胎蛋白的过程中，根据细胞特性以及所处的生理与病理状态不相同，可将其分为:AFP-L1来自良性肝病，占其主要部分;AFP-L2来自孕妇；而AFP-L3则为肝癌细胞分泌。
[0003]检测AFP异质体对肝癌的早期诊断有重要价值，其优点有:不受AFP ^ 400 μ g/L的诊断标准所限制；不为影像阴性结果所束缚；缩短AFP浓度升高至肝癌确诊的时间；有助于良性与恶性肝病的鉴别。临床研宄发现大约35%的小肝癌(<2cm)患者血清中可检出AFP-L3。肝癌患者AFP-L3阳性常提示肿瘤生长速度很快且可能发生早期转移。与影像学相比较，AFP-L3在早期肝癌的诊断中可提前9-12个月。AFP-L3用于肿瘤诊断的敏感性与肿瘤的临床分期相关，大约在60%左右，特异性大于95%。AFP-L3是HCC OfepatoCellularCarcinoma，肝细胞肝癌)的一个重要的特异性的肿瘤标志物。
[0004]目前AFP-L3的分析方法多采用亲和层析、亲和印迹、微量离心柱法和交叉免疫电泳法等，这些方法大多存在检测过程繁琐，检验周期长，灵敏度低等问题。
[0005]虽然胶体金快速诊断技术已经发展的很成熟了，但是尚未有一种胶体金检测试剂盒检测甲胎蛋白异质体L3，且现有检测甲胎蛋白其他异质体的检测方法也多是定性检测的，即也尚未有一种定量检测甲胎蛋白胶体金检测方法，因此急需一种能够简单快速的检测甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于解决现有技术的缺陷，提供了一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法，解决了传统的检测方法的步骤繁琐、检测时间长也定性检测准确性低的问题。
[0007]有鉴于此，本发明提供一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒，可包括:
[0008]卡壳，甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条，
[0009]所述卡壳包括上卡壳和下卡壳，所述上卡壳上有观察窗和加样孔，所述下卡壳的卡壳槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条，所述上卡壳和所述下卡壳卡接固定，
[0010]所述甲胎蛋白异质体L3试纸条包括样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC板，所述PVC板位于所述卡壳槽底层，所述硝酸纤维膜位于所述PVC板上层的中部，所述金标抗体结合垫位于所述PVC板的上部且与所述硝酸纤维膜上端部分重叠，所述吸水垫位于所述PVC板的下部且与所述硝酸纤维膜硝酸纤维膜的下端部分重叠，所述样品垫位于所述PVC板的上部且与所述金标抗体结合垫非靠近所述硝酸纤维膜一端部分重叠，所述硝酸纤维膜以靠近所述样品垫为起始端，靠近所述吸水垫为终止端，依次包被甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体，所述金标抗体结合垫上喷涂有胶体金标记的甲胎蛋白单克隆抗体，
[0011]所述甲胎蛋白试纸条包括样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC板，所述PVC板位于所述卡壳槽底层，所述硝酸纤维膜位于所述PVC板上层的中部，所述金标抗体结合垫位于所述PVC板的上部且与所述硝酸纤维膜上端部分重叠，所述吸水垫位于所述PVC板的下部且与所述硝酸纤维膜硝酸纤维膜的下端部分重叠，所述样品垫位于所述PVC板的上部且与所述金标抗体结合垫非靠近所述硝酸纤维膜一端部分重叠，所述硝酸纤维膜以靠近所述样品垫为起始端，靠近所述吸水垫为终止端，依次包被甲胎蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体，所述金标抗体结合垫上喷涂有胶体金标记的甲胎蛋白单克隆抗体。
[0012]本发明还提供了一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的使用方法，其中，所述方法包括:
[0013]取待测液体在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的加样孔中加入I?2滴，待完全渗入；
[0014]待所述待测液体与所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒中的甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条上的抗体均发生反应后，在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的观察孔中分别观察所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线和质控线以及所述甲胎蛋白试纸条上的检测线和质控线的显色情况；
[0015]待观察到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均显色后，将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均放入到胶体金定量检测仪内读取所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度与所述甲胎蛋白试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度，得到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值和所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值；
[0016]将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值和所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值分别与标准浓度拟合曲线对比得到所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度；
[0017]根据所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度的比值与预设阈值的比较判断所述待测液体的阴阳性。
[0018]本发明提供的一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法，采用胶体金定量检测试剂盒检测样品中的AFP-L3，样品中AFP-L3的含量与显色区的颜色成正比，通过胶体金定量检测仪读取显色区的强度。与传统胶体金检测条相比，检测的灵敏度更高，特异性更强，且可以定量。解决了传统的AFP-L3定量检测方法操作步骤繁琐，检测时间长的问题，同时解决了 AFP-L3定性检测准确性低的问题。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1为本发明实施例1提供的一种甲胎蛋白胶体金试剂盒的APF-L3试纸条和APF试纸条的结构图；
[0020]图2为本发明实施例2提供的一种甲胎蛋白胶体金试剂盒的使用方法流程图；
[0021]图3为本发明实施例2提供的一种甲胎蛋白胶体金试剂盒的检测AFP-L3结果的浓度拟合曲线图；
[0022]图4为本发明实施例2提供的一种甲胎蛋白胶体金试剂盒的检测AFP结果的浓度拟合曲线图。
【具体实施方式】
[0023]本发明实施例1提供了一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒，能够解决了传统的检测方法的步骤繁琐、检测时间长也定性检测准确性低的问题。
[0024]为了使本【技术领域】的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
[0025]请参阅图1，为本发明提供的一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒，本实施例1具体可以包括:
[0026]卡壳，甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条，
[0027]所述卡壳包括上卡壳和下卡壳，所述上卡壳上有观察窗和加样孔，所述下卡壳的卡壳槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条，所述上卡壳和所述下卡壳卡接固定，
[0028]所述甲胎蛋白异质体L3试纸条包括样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC板，所述PVC板位于所述卡壳槽底层，所述硝酸纤维膜位于所述PVC板上层的中部，所述金标抗体结合垫位于所述PVC板的上部且与所述硝酸纤维膜上端部分重叠，所述吸水垫位于所述PVC板的下部且与所述硝酸纤维膜硝酸纤维膜的下端部分重叠，所述样品垫位于所述PVC板的上部且与所述金标抗体结合垫非靠近所述硝酸纤维膜一端部分重叠，所述硝酸纤维膜以靠近所述样品垫为起始端，靠近所述吸水垫为终止端，依次包被甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体，所述金标抗体结合垫上喷涂有胶体金标记的甲胎蛋白单克隆抗体，
[0029]所述甲胎蛋白试纸条包括样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC板，所述PVC板位于所述卡壳槽底层，所述硝酸纤维膜位于所述PVC板上层的中部，所述金标抗体结合垫位于所述PVC板的上部且与所述硝酸纤维膜上端部分重叠，所述吸水垫位于所述PVC板的下部且与所述硝酸纤维膜硝酸纤维膜的下端部分重叠，所述样品垫位于所述PVC板的上部且与所述金标抗体结合垫非靠近所述硝酸纤维膜一端部分重叠，所述硝酸纤维膜以靠近所述样品垫为起始端，靠近所述吸水垫为终止端，依次包被甲胎蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体，所述金标抗体结合垫上喷涂有胶体金标记的甲胎蛋白单克隆抗体。
[0030]具体的，本发明提供的一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒中所述的甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条包括样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维膜(NC膜)、吸水垫和PVC板，其中的PVC板作为反应支持物位于底层，NC膜位于PVC板的中部，金标抗体结合垫位于NC膜上部的一侧并与之部分重叠；吸水垫位于NC膜上相对于结合垫而言的另一侧并于NC膜部分重叠；样品垫位于NC膜上与吸水垫相反的一侧并于结合垫部分重叠；所述的NC膜以靠近样品垫一端为起始端，靠近吸水垫一端为末端，依次包被AFP-L3 (AFP)单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体，分别为检测线(T线)和质控线(C线)，结合垫上喷涂有胶体金标记的AFP单克隆抗体。
[0031]需要说明的是，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的所述硝酸纤维膜包被羊抗鼠IgG抗体的为质控线，且所述检测线与所述质控线平行；所述甲胎蛋白试纸上的所述硝酸纤维膜包被所述甲胎蛋白单克隆抗体的为检测线，所述甲胎蛋白试纸条上的所述硝酸纤维膜包被羊抗鼠IgG抗体的为质控线，且所述检测线与所述质控线平行；所述观察窗为长方形，所述加样孔为圆形。
[0032]为了更清楚的理解一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒，现将所述甲胎蛋白胶体金试剂盒的制备方法描述如下:
[0033]所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的制备主要是所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条的制备，其中，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的制备包括胶体金标记、金标结合垫的制备和硝酸纤维膜的包被。所述胶体金的制备包括:(I)将10ml 0.01%的AuCl3溶液磁力搅拌下加热至沸腾，准确加入1.5-3ml I %的柠檬酸三钠溶液。待颜色稳定后继续加热15分钟，冷却后加纯水补充至100ml，避光保存。
[0034](2)用 K2CO3调节 pH 至 7-9。
[0035](3)加入K2CO3静置5分钟，每毫升金溶液加入10_30ug AFP单抗，优选为20ug，静置30分钟。
[0036](4)加入10 %的BSA (牛血清蛋白)溶液，一直到最终浓度为0.1%，静置20分钟。
[0037](5)将上述溶液12000rpm离心50分钟，弃上清，用复溶液等体积复溶。此时胶体金标记完成，接下来是金标结合垫的制备，即将上述复溶后的溶液均匀滴加到6mm宽的结合垫上，37°C干燥12小时，最终制得金标结合垫。下面是硝酸纤维膜的包被，包括:
[0038](1)APF-L3单抗和羊抗鼠IgG抗体用pH7.4PBS缓冲液稀释，APF-L3单抗浓度为0.5-2.5mg/ml羊抗鼠IgG抗体浓度为0.8mg/ml。
[0039](2)按照lul/cm的速度包被检测线和控制线。为防止扩散，包被好的PVC板立即放到37°C干燥12小时。
[0040]所述甲胎蛋白试纸条的制备也是包括胶体金标记、金标结合垫的制备和硝酸纤维膜的包被。
[0041]所述胶体金的制备包括:(I)将10ml 0.01%的AuCl3溶液磁力搅拌下加热至沸腾，准确加入1.5-3ml I %的柠檬酸三钠溶液。待颜色稳定后继续加热15分钟，冷却后加纯水补充至100ml，避光保存。
[0042](2)用 K2CO3调节 pH 至 7-9。
[0043](3)加入K2CO3静置5分钟，每毫升金溶液加入10-30ug AFP单抗，优选为20ug，静置30分钟。
[0044](4)加入10 %的BSA (牛血清蛋白)溶液，一直到最终浓度为0.1%，静置20分钟。
[0045](5)将上述溶液12000rpm离心50分钟，弃上清，用复溶液等体积复溶。此时胶体金标记完成，接下来是金标结合垫的制备，即将上述复溶后的溶液均匀滴加到6mm宽的结合垫上，37°C干燥12小时，最终制得金标结合垫。下面是硝酸纤维膜的包被，包括:
[0046](I) APF单抗和羊抗鼠IgG抗体用pH7.4PBS缓冲液稀释，APF单抗浓度为0.5-2.5mg/ml羊抗鼠IgG抗体浓度为0.8mg/ml。
[0047](2)按照lul/cm的速度包被检测线和控制线。为防止扩散，包被好的PVC板立即放到37°C干燥12小时。
[0048]在上述步骤均完成后，分别将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条的样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫分别依次黏贴到PVC板上，切成4_条，装袋封口，室温保存备用。
[0049]本发明提供的一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒，采用胶体金检测试剂盒检测样品中的AFP-L3，样品中AFP-L3的含量与显色区的颜色成正比，通过胶体金定量检测仪读取显色区的强度。与传统胶体金检测条相比，检测的灵敏度更高，特异性更强，且可以定量。解决了传统的AFP-L3定量检测方法操作步骤繁琐，检测时间长的问题，同时解决了 AFP-L3定性检测准确性低的问题。
[0050]本发明还提供了一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的使用方法的实施例2，结合附图2所示，其中，所述方法包括:
[0051]S201、取待测液体在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的加样孔中加入I?2滴，待完全渗入；
[0052]S202、待所述待测液体与所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒中的甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条上的抗体均发生反应后，在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的观察孔中分别观察所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线和质控线以及所述甲胎蛋白试纸条上的检测线和质控线的显色情况；
[0053]S203、待观察到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均显色后，将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均放入到胶体金定量检测仪内读取所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度与所述甲胎蛋白试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度，得到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值和所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值；
[0054]S204、将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值和所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值分别与标准浓度拟合曲线对比得到所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度；
[0055]S205、根据所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度的比值与预设阈值的比较判断所述待测液体的阴阳性。
[0056]优选的，若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值小于等于最小预设阈值，则所述待测液体为阴性；若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值大于等于最大预设阈值，则所述待测液体为阳性；若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值大于所述最小预设阈值且小于所述最大预设阈值，则所述待测液体为可疑。
[0057]优选的，所述甲胎蛋白试纸条上的甲胎蛋白单克隆抗体和胶体金复合后为金标，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线包被甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的质控线包被羊抗鼠IgG抗体。
[0058]具体的，一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的使用方法具体可包括:取待测液体在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的加样孔中加入I?2滴，待完全渗入，优选的，取待测肝癌患者的血清为待测液体适量，滴入到所述甲胎蛋白胶体金检查试剂盒的加样孔中。由于所述甲胎蛋白胶体金检查试剂盒中有甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条两种，所以待所述待测液体与所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒中的甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条上的抗体均发生反应后，在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的观察孔中分别观察所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线和质控线以及所述甲胎蛋白试纸条上的检测线和质控线的显色情况。可以理解的是，所述甲胎蛋白试纸条上的甲胎蛋白单克隆抗体和胶体金复合后为金标，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线包被甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的质控线包被羊抗鼠IgG抗体，则等待所述待测液体(如待测肝癌患者的血清)与所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体发生反应后以及所述待测液体与所述甲胎蛋白试纸条上的甲胎蛋白单克隆抗体发生反应后观察所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线和质控线以及所述甲胎蛋白试纸条上的检测线和质控线的显色情况。待观察到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均显色后，将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均放入到胶体金定量检测仪内读取所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度与所述甲胎蛋白试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度，将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度相除得到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值，将所述甲胎蛋白试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度相除得到所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值。将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值和所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值分别与标准浓度拟合曲线对比得到所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度。可以参照附图3和附图4的浓度拟合曲线。具体的，所述甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)的浓度获取过程包括:
[0059]将空白样品用AFP-L3定量检测试纸重复检测10次，用胶体金定量检测仪读取信号检测线/质控线(T/C)值。10个空白样品T/C值的平均值(M)与3倍标准差⑶之和为临界阈值。将显色后的试纸条放入胶体金定量检测仪读取信号T/C值，将T/C值与图3所示的浓度拟合曲线图比较，将所述T/C值代入到图3所示的公式中，即可得到所述AFP-L3的浓度。
[0060]具体的，所述甲胎蛋白(AFP)浓度获取过程包括:
[0061 ] 将空白样品用AFP定量检测试纸重复检测10次，用胶体金定量检测仪读取信号T/C值。10个空白样品T/C值的平均值(M)与3倍标准差(S)之和为临界阈值。将显色后的试纸条放入胶体金定量检测仪读取信号T/C值，将T/C值与图4所示的浓度拟合曲线图比较，将所述T/C值代入到图4所示的公式中，可得到所述AFP的浓度。
[0062]根据所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度的比值与预设阈值的比较判断所述待测液体的阴阳性。
[0063]具体的，所述待测液体阴阳性的判定包括:
[0064]若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值小于等于最小预设阈值，则所述待测液体为阴性；若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值大于等于最大预设阈值，则所述待测液体为阳性；若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值大于所述最小预设阈值且小于所述最大预设阈值，则所述待测液体为可疑。
[0065]优选的，若检测的为肝癌中的AFP-L3，则具体的可以是:所述AFP-L3的浓度(ng/ml) +AFP 浓度(ng/ml) = AFP-L3 的％。
[0066]AFP-L3 的 ％〈5 % 为阴性；
[0067]AFP-L3的%大于5 %且小于10 %为可疑；
[0068]AFP-L3的％彡10%为阳性(高度怀疑HCC的存在或转移复发的提示)。
[0069]结合附图3和附图4的浓度拟合曲线，附图3为AFP-L3的以浓度为横坐标，T/C值为纵坐标的拟合标准曲线，由附图3所示，检测浓度1.0 - 20ng/ml的AFP-L3标准品，由浓度拟合曲线可见线性关系良好，R2 = 0.9853，线性方程为:y = 0.0086χ-0.007。
[0070]图4为AFP的以浓度为横坐标，T/C值为纵坐标的浓度拟合曲线，由附图4所示，检测浓度为10-100ng/ml的AFP标准品，由浓度拟合曲线可见线性关系良好，R2 = 0.9963，线性方程为:y = 0.0024x-0.0001。
[0071]将新制备的AFP-L3和AFP条于37°C放置12天，检测其灵敏度和特异性，与新制备的试纸条相比没有明显变化，说明本发明提供的一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的稳定性良好。
[0072]本发明提供的一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒及其使用方法，采用胶体金定量检测试剂盒检测样品中的AFP-L3，样品中AFP-L3的含量与显色区的颜色成正比，通过胶体金定量检测仪读取显色区的强度。与传统胶体金检测条相比，检测的灵敏度更高，特异性更强，且可以定量。解决了传统的AFP-L3定量检测方法操作步骤繁琐，检测时间长的问题，同时解决了 AFP-L3定性检测准确性低的问题。
[0073]本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”、“第三?第四”等(如果存在)是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的实施例能够以除了在这里图示或描述的内容以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
[0074]以上所述，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
【权利要求】
1.一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括: 卡壳，甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条， 所述卡壳包括上卡壳和下卡壳，所述上卡壳上有观察窗和加样孔，所述下卡壳的卡壳槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条，所述上卡壳和所述下卡壳卡接固定， 所述甲胎蛋白异质体L3试纸条包括样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC板，所述PVC板位于所述卡壳槽底层，所述硝酸纤维膜位于所述PVC板上层的中部，所述金标抗体结合垫位于所述PVC板的上部且与所述硝酸纤维膜上端部分重叠，所述吸水垫位于所述PVC板的下部且与所述硝酸纤维膜硝酸纤维膜的下端部分重叠，所述样品垫位于所述PVC板的上部且与所述金标抗体结合垫非靠近所述硝酸纤维膜一端部分重叠，所述硝酸纤维膜以靠近所述样品垫为起始端，靠近所述吸水垫为终止端，依次包被甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体，所述金标抗体结合垫上喷涂有胶体金标记的甲胎蛋白单克隆抗体， 所述甲胎蛋白试纸条包括样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维膜、吸水垫和PVC板，所述PVC板位于所述卡壳槽底层，所述硝酸纤维膜位于所述PVC板上层的中部，所述金标抗体结合垫位于所述PVC板的上部且与所述硝酸纤维膜上端部分重叠，所述吸水垫位于所述PVC板的下部且与所述硝酸纤维膜硝酸纤维膜的下端部分重叠，所述样品垫位于所述PVC板的上部且与所述金标抗体结合垫非靠近所述硝酸纤维膜一端部分重叠，所述硝酸纤维膜以靠近所述样品垫为起始端，靠近所述吸水垫为终止端，依次包被甲胎蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体，所述金标抗体结合垫上喷涂有胶体金标记的甲胎蛋白单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的所述硝酸纤维膜包被所述甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体的为检测线，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的所述硝酸纤维膜包被羊抗鼠IgG抗体的为质控线，且所述检测线与所述质控线平行。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述甲胎蛋白试纸上的所述硝酸纤维膜包被所述甲胎蛋白单克隆抗体的为检测线，所述甲胎蛋白试纸条上的所述硝酸纤维膜包被羊抗鼠IgG抗体的为质控线，且所述检测线与所述质控线平行。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述观察窗为长方形，所述加样孔为圆形。
5.一种甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述方法包括: 取待测液体在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的加样孔中加入I?2滴，待完全渗入； 待所述待测液体与所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒中的甲胎蛋白异质体L3试纸条和甲胎蛋白试纸条上的抗体均发生反应后，在所述甲胎蛋白胶体金检测试剂盒的观察孔中分别观察所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线和质控线以及所述甲胎蛋白试纸条上的检测线和质控线的显色情况； 待观察到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均显色后，将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条和所述甲胎蛋白试纸条均放入到胶体金定量检测仪内读取所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度与所述甲胎蛋白试纸条上检测线的强度和所述控制线的强度，得到所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值和所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值； 将所述甲胎蛋白异质体L3试纸条的检测线/控制线比值和所述甲胎蛋白试纸条的检测线/控制线比值分别与标准浓度拟合曲线对比得到所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度； 根据所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度的比值与预设阈值的比较判断所述待测液体的阴阳性。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值小于等于最小预设阈值，则所述待测液体为阴性；若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值大于等于最大预设阈值，则所述待测液体为阳性；若所述甲胎蛋白异质体L3的浓度和所述甲胎蛋白的浓度比值大于所述最小预设阈值且小于所述最大预设阈值，则所述待测液体为可疑。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述甲胎蛋白试纸条上的甲胎蛋白单克隆抗体和胶体金复合后为金标，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的检测线包被甲胎蛋白异质体L3单克隆抗体，所述甲胎蛋白异质体L3试纸条上的质控线包被羊抗鼠IgG抗体。
【文档编号】G01N33/68GK104459161SQ201410843180
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月30日 优先权日:2014年12月30日
【发明者】李峰, 刘晓雷, 周宇璠, 赵柏松, 孙扬 申请人:霍普金斯医药研究院（北京）有限责任公司