技术领域本发明涉及药材检测领域，具体涉及一种刺五加的检测方法。
背景技术：
刺五加，见于《神农本草经》，列为上品。上品乃指无毒，久服可以轻身、延年益寿而无害。刺五加自古即被视为具有添精补髓及抗衰老作用的良药，原主产于黑龙江省山区，地方土名习称“老虎潦”，在日本则称为虾夷五加，而在前苏联又称为西伯利亚人参。明朝李时珍《本草纲目》称刺五加，以五叶交加者良，故名五加，又名五花。五加治风湿，壮筋骨，其功良深，宁得一把五加，不用金玉满车，又“文章作酒，能成其味，以金买草，不言其贵”之说，对五加做了很高的赞誉。《名医别录》认为五加有补中，益精，坚筋骨，强意志等功效。刺五加于《实用补养中药》中记载，属于补气药，具有补虚扶弱的功效，可来预防或治疗体质虚弱之症候，滋补强壮，延年益寿。刺五加含刺五加苷A,即β-谷甾醇葡萄糖苷；刺五加苷B，即紫丁香苷；刺五加苷B1，即6,8-二甲氧基香豆素-7-葡萄糖苷；刺五加苷，即乙基半乳糖苷；刺五加苷D和E(为二种不同构型的紫丁香树脂酚的葡萄糖苷)等。其中，刺五加甙B，即紫丁香苷与人参根中的皂苷具有相似的生理活性，其能刺激精神和身体活力。目前，刺五加的检测方法主要为液相色谱法，然而现有的液相色谱法存在液相色谱基线不平，分离度差，检测时间长等诸多缺点。因此，建立一种简单、快速、基线平稳，分离度好的刺五加的检测方法是十分必要的，更有利于刺五加药材的质量控制。
技术实现要素：
为了解决刺五加药材质量控制的问题，本发明提供一种简单、快速、基线平稳，分离度好的刺五加检测方法。本发明一方面提供了一种刺五加的检测方法，其含有以下步骤：取刺五加粗粉的甲醇溶液作为供试品溶液进样，按照液相色谱条件进行检测，其中所述液相色谱测定条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水。所述液相色谱测定条件中流动相中乙腈-水的体积比优选为：6-8:94-92；更优选为：6:94。所述液相色谱测定条件中检测波长优选为265nm。所述液相色谱测定条件中柱温优选为40℃，流速优选为0.5ml/min。所述色谱柱优选为AglientPoroshellSB-C182.7μm2.1×100mm。所述供试品溶液的制备方法优选为：取刺五加粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。本发明还进一步提供了一种刺五加的检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：取刺五加粗粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；2)色谱测定条件：色谱柱为AglientPoroshellSB-C182.7μm2.1×100mm；流动相中乙腈-水的体积比为6:94，检测波长为265nm，柱温为40℃，流速为0.5ml/min；3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪检测。本发明进一步提供刺五加中紫丁香苷的含量检测方法，其包括如下步骤：1)样品制备方法：取刺五加粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；2)标准曲线制作：取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即紫丁香苷对照储备液，取该储备液0.2、0.5、1.0、1.5、2μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积为横坐标，进样量为纵坐标建立标准曲线图；3)色谱条件：色谱柱为AglientPoroshellSB-C182.7μm2.1×100mm；流动相中乙腈-水的体积比为6:94，检测波长为265nm，柱温为40℃，流速为0.5ml/min；4)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测和按照峰面积计算含量。具体计算方式如下：根据标准曲线图，得到标准曲线方程，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测。其中紫丁香苷分离度为2.37，符合分离度要求。根据标准曲线和待测峰面积，计算得到刺五加中紫丁香苷的含量。本发明所提供的刺五加液相色谱检测方法与现有技术相比，存在以下优势：1)本发明提供的刺五加液相色谱检测方法基线平稳，分离度好，能够有效针对刺五加中有效成分紫丁香苷进行检测和定量。2)本发明提供的刺五加液相色谱检测方法检测时间短，检测结果准确。附图说明图1为对比实施例一刺五加的HPLC谱图图2为对比实施例二刺五加的HPLC谱图图3为实施例一刺五加的HPLC谱图图4为实施例三刺五加的HPLC谱图图5为实施例四刺五加的HPLC谱图具体实施方式下面通过实施例对本发明进一步说明，但不能限制本发明的保护范围。本发明中涉及的实验仪器、实验药材及试剂如下：实验仪器：高效液相色谱仪(岛津LC-210c)；色谱柱(VP-ODS4.6mm×250mm,5μm)；色谱柱(AglientPoroshellSB-C182.7μm2.1×100mm)。实验药材及试剂：刺五加(来源：成都康弘制药有限公司批次：140902)，紫丁香苷对照品(来源：中国食品药品检定研究院批次：11574-2000603)，乙腈(来源：honeywell批次：N6QA1H)，甲醇(来源：honeywell批次：N5AG1H)，磷酸(来源：天津市科密欧批次：20120528)。对照品溶液的制备方法为：取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。对比实施例一刺五加的检测方法供试品溶液制备方法：取刺五加粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂(VP-ODS4.6mm×250mm,5μm)，流动相为乙腈-水(20:80)，流速1mL/min，柱温为室温，检测波长为265nm。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测，图1为紫丁香苷的检测结果，其色谱图基线严重不平稳，波动幅度大，峰形差且分离度差，无法对有效成分峰进行有效辨认。对比实施例二刺五加的检测方法样品制备方法：取刺五加粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂(AglientPoroshellSB-C182.7μm2.1×100mm)，流动相为乙腈-水(20:80)，流速0.2mL/min，柱温为室温，检测波长为265nm。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测，图2为紫丁香苷的检测结果，其色谱图分离度差且有效成分峰拖尾严重，无法对有效成分峰进行有效辨认。实施例一刺五加的检测方法样品制备方法：取刺五加粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(AglientPoroshellSB-C182.7μm2.1×100mm)；以乙腈-水(6:94)为流动相，检测波长为265nm，柱温为40℃，流速为0.5ml/min，进样量为2μl。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测，图3为紫丁香苷的检测结果，其色谱图峰形好，基线平稳，分离度好，检测时间短。实施例二刺五加中紫丁香苷含量检测方法样品制备方法：取刺五加粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。标准曲线制作：取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即紫丁香苷对照储备液，取该储备液0.2、0.5、1.0、1.5、2μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积为横坐标，进样量为纵坐标建立标准曲线图，得到标准曲线方程为：y＝0.1916x(R2＝0.9984)。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(AglientPoroshellSB-C182.7μm2.1×100mm)；以乙腈-水(6:94)为流动相，检测波长为265nm，柱温为40℃，流速为0.5ml/min，进样量为2μl。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl注入液相色谱仪，进行液相色谱检测。其中紫丁香苷分离度为2.37，符合分离度要求。根据标准曲线和待测峰面积，根据计算得到刺五加中紫丁香苷的含量为0.066％，该方法能够对紫丁香苷进行准确定量。实施例三刺五加的检测方法对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(250W，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(aglientSB-C182.7μm2.1×100mm)；以乙腈-水(8：92)为流动相；流速0.5ml/min；柱温40℃；检测波长为265nm。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。检测结果见图4；其中紫丁香苷分离度为1.51。紫丁香苷含量检测方法见实施例二，刺五加中紫丁香苷的含量为0.065％。实施例四药典中刺五加的检测方法色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(AglientHC-C185μm4.6×250mm)；以甲醇-水(20：80)为流动相；流速1ml/min；柱温30℃；检测波长为265nm。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(250W，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。检测结果见图5；其中紫丁香苷分离度为1.52，但是紫丁香苷出峰的时间为13分钟左右。紫丁香苷含量检测方法见实施例二，刺五加中紫丁香苷的含量为0.066％。