一种测定牛奶中4,4’‑硫代二苯酚含量的方法与流程

本发明属于食品安全领域，具体涉及一种测定牛奶中4,4'-硫代二苯酚含量的方法。

背景技术：

4,4'-硫代二苯酚是一种环境激素，CAS:2664-63-3，英文称：4,4'-Dihydroxydi-phenyl sulfide；4,4'-Thiobisphenol，EINECS:220-197-9，分子式：C₁₂H₁₀O₂S，分子量：218.27，结构式为：。近些年来，当产业化浪潮给人类带来物质文明时，人们发现了4,4'-硫代二苯酚等存在于生物机体之外的激素，由于工业污染等原因通过土壤、水体、食物链等途径进入到居民身体内。该物质对人体会产生极大地危害，比如造成男人的精子减少，雄性退化，乃至男性不育症的高发；育龄妇女如果受到该有害物质的污染，会使受孕胎儿畸形的可能性大大增加，使胎儿的五官、肢体或性器官的局部畸形。

牛奶是当代社会人们普遍饮用的一种高蛋白物质，深受广大消费者的喜爱。环境中的4,4'-硫代二苯酚通过大气循环和水体循环在牧草表面沉积，奶牛食用了含有4,4'-硫代二苯酚的牧草，会直接导致4,4'-硫代二苯酚在牛奶里面造成残留，人如果食用了含有该物质的牛奶之后就会造成严重的后果。另外，在牛奶的外包装材料中也可能含有4,4'-硫代二苯酚，它可能溶解在牛奶中。因此，建立起来一种有效的食品中4,4'-硫代二苯酚含量的检测方法刻不容缓。鉴于牛奶中4,4'-硫代二苯酚残存的可能性更大，因此很有必要在第一时间里面建立起牛奶中4,4'-硫代二苯酚含量的方法。

技术实现要素：

本发明的目的提供了一种测定牛奶中4,4'-硫代二苯酚含量的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种测定牛奶中4,4'-硫代二苯酚含量的方法，包括如下步骤：

（1）牛奶用乙腈-盐-水混合体系震荡萃取，萃取后分离得到乙腈相；

（2）步骤（1）得到的乙腈相用乙腈饱和的正己烷进行脱脂，脱脂后的乙腈相挥干；

（3）将步骤（2）挥干后得到样品用乙腈水溶液溶解，膜过滤，滤液上高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：C₁₈柱，检测波长220-260nm，流动相为乙腈和水。

进一步，步骤（1）中，所述盐为氯化钠。

进一步，步骤（1）所述乙腈-盐-水混合体系中，乙腈与水的体积比为1:1，盐的浓度为0.05g/ml。

进一步，步骤（2）挥干后得到样品用浓度为45v%的乙腈水溶液溶解。

进一步，步骤（3）所述流动相中，乙腈和水的体积比为60:40。

进一步，步骤（3）所述检测波长为248.9nm。

本发明方法使用氯化钠盐析，乙腈萃取，正己烷脱脂，处理好的样品最后使用高效液相色谱仪测定。该方法具有提取效果好，耗时短，灵敏度、精密度和准确度好等优点，适合用于奶中样品中4,4'-硫代二苯酚的快速检测和筛选工作，能够满足牛奶中4,4'-硫代二苯酚质量安全监测工作的需要，保证广大消费者的食品安全和身体健康。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是样品的高效液相色谱图；

图2是4,4'-硫代二苯酚在200-400nm波段的吸收图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一、样品前处理

准确称取牛奶样品2±0.02g，装入具塞离心管中，加入5ml乙腈、5ml纯水和0.5g氯化钠，盖上离心管盖，放置于35℃水浴振荡器中快速震荡30min，以5000r/m的转速离心10min，将上层乙腈层吸取转移到15ml离心管中。加入5ml乙腈饱和的正己烷振荡萃取10min，以5000r/m的转速离心10min，吸出上层正己烷层，下层乙腈氮气吹干，加入1ml乙腈水溶液（v：v=45:55），涡旋混匀30s，吸入1ml注射器，过0.22μm复合滤膜过滤，备用。

二、分析测试仪器条件

将步骤（一）处理好的样品上高效液相色谱仪（Waters 2695 型，配有二级整列管检测器，美国waters 公司）进行测定，所用色谱柱为SunFire^TM C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm，美国waters 公司）。检测波长二级阵列管设定200-400nm，流动相为乙腈和水（v：v=60:40），流速为1 ml/min等度洗脱，进样量20μL，柱温为30℃，样品运行时间15min，色谱图如图1所示。

通过外标法求得牛奶样品的4,4'-硫代二苯酚含量。

三、最大吸收波长的确定

设定检测波长为200-400nm进行扫场实验，优化出最佳的检测波长，如图2所示。实验结果表明，在220-260nm具有较佳的吸收，其中检测波长为248.9nm时，目标检测化合物4,4'-硫代二苯酚有最大吸收，此时检测方法的灵敏度最好。在该方法中，我们选定检测器的波长为248.9nm。

四、方法的准确度、精密度和灵敏度

按照高中低3个浓度，向空白牛奶样品中加入4,4'-硫代二苯酚标准品。使用上述样品前处理方法处理之后，上机测定，测定加标回收率、相对标准偏差、最低检出限和最低定量限等数据。该方法的准确度由加标回收率来体现，加标实验测得回收率为72-83%。准确度由相对标准偏差（RSD）来体现，测得该方法对牛奶样品检测RSD小于15%。灵敏度由最低检出限和最低定量限来体现。最低检出限（LOD）按照3倍性噪比计算，最低定量限（LOQ）按照10倍性噪比计算：该方法的最低检出限为0.03 μg/kg，最低定量限为0.1 μg/kg。

本发明所述的牛奶是指各种原奶以及各种加工奶制品。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。