农药侵害烟叶的还原糖含量的测定方法与流程

本发明涉及化学分析检测领域，特别是指农药侵害烟叶的还原糖含量的测定方法。

背景技术：

二氯喹啉酸是防除稻田稗草的特效选择性除草剂，属激素型喹啉羧酸类除草剂，杂草中毒症状与生长素类作用相似，主要用于防治稗草且适用期很长，1-7叶期均有效。水稻安全性好。

有关研究表明二氯喹啉酸作为激素类除草剂，能够刺激乙烯在植物体内积累。二氯喹啉酸的靶标位点位于细胞壁的生物合成中，在禾本科植物中起到细胞壁合成抑制剂的作用，不同禾本科植物作用位点对二氯喹啉酸的敏感性。乙烯可抑制细胞壁合成酶的活性从而减少细胞壁的合成，乙烯含量的提高引起了ABA的积累，ABA在调节植物生长、叶片衰老、气孔开放起重要的作用。

二氯喹啉酸在土壤中有积累作用，对烟草生产会产生明显的药害。我国部分烟田曾因氯喹啉酸出现大面积烟草畸形生长现象，症状为新叶先出现不正常生长,叶缘下卷，叶片向背皱缩,致使叶片狭长，严重者呈线状，严重影响烟草的产量和质量。

由于烟草这一作物的特殊性，对于其受到氯喹啉酸的影响将直接影响烟农的收成，以及烟叶的质量，因此，对于氯喹啉酸对烟草的影响，需要进行多方面的，准确的，可靠的分析，目前，对于农药侵害植物的分析虽然有报道以及一般性的分析方法，但针对氯喹啉酸对烟草侵害的研究分析还相对较少，尤其是对烟叶的还原糖侵害的变化影响，造成在氯喹啉酸对烟草的侵害的程度，影响等少有深入的了解，并的分析的结果上还存在较大的准确度差异。

技术实现要素：

本发明提出一种农药侵害烟叶的还原糖含量的测定方法，解决了现有技术中烟叶受到氯喹啉酸侵害后还原糖影响与变化测定准确度不够的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：受农药侵害烟叶的还原糖含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)配制试剂，包括配制1mg/mL葡萄糖标准液和3.5－二硝基水杨酸试剂；

(2)制作还原糖标准曲线的；

(3)提取还原糖：剪取烟叶，共三份，加水研磨，定容10mL蒸馏水，50℃温水浴20min，使还原糖浸出，离心过滤，作为还原糖测定液；

(4)还原糖的测定：

取3支25mL刻度试管，编号，分别加入还原糖待测液1mL，3.5－二硝基水杨酸试剂1.5mL，测定各管的消光值；分别在标准曲线上查出相应还原糖毫克数，按下试计算还原糖百分含量：

式中C——标准曲线方程求得的还原糖量；

V——提取液体积；

a——显色时吸取样品液体积；

W——样品重；

(5)在烟草5～6片真叶期移入二氯喹啉酸添加浓度为1.04×10^-3mg/kg、2.08×10^-3mg/kg、4.17×10^-3mg/kg、8.33×10^-3mg/kg、1.67×10^-2mg/kg药土中，分别在7d、14d、21d、28d、35d采用步骤(1)～(4)测量烟叶的还原糖总量。

进一步，步骤(1)中，试剂的配制采用以下配比和参数：

1mg/mL葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖，置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，置冰箱中保存备用；

3.5－二硝基水杨酸试剂：3.5－二硝基水杨酸0.63g，2mol/L的NaOH溶液26.2mL，加到50mL含有18.5g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加0.5g苯酚和0.5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至100mL，现配现用。

进一步，步骤(3)中，剪取第四片展开鲜烟叶0.3g。

本发明的所述农药侵害烟叶的还原糖含量的测量方法，针对烟草的特性，结合对氯喹啉酸的侵害机理研究，对农药侵害过程中还原糖含量的变化，试剂的选配，操作环境、参数等进行了较为严格的调整与控制，使得到的氯喹啉酸侵害烟叶的还原糖的含量的测量更加准确，可靠，为合理使用氯喹啉酸以及消除影响，提供科学的依据。

附图说明

图1为还原糖标准曲线；

图2为二氯喹啉酸对烟草叶片还原糖含量的动态分析。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例

烟草种子采用品种为K326。温室播种，育苗，于五至六片真叶期移栽，进行农药侵害烟叶的还原糖含量的测定

①、试剂配制

1mg/mL葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖(预先在80℃烘至恒重)，置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，置冰箱中保存备用。

3.5－二硝基水杨酸试剂：3.5－二硝基水杨酸0.63g，2mol/L的NaOH溶液26.2mL，加到50mL含有18.5g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加0.5g苯酚和0.5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至100mL，现配现用。

②、标准曲线的制作

取7支具有25mL刻度的血糖管或刻度试管，编号，按表3-3所示的量，精确加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液和3.5－二硝基水杨酸试剂。

表5-3还原糖标准曲线

将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25mL刻度处，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀(如用大试管，则向每管加入21.5mL蒸馏水，混匀)。在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1～6号管的消光值。以消光值为纵坐标，绘制标准曲线，求得直线方程，以葡萄糖含量为横坐标，以540nm处的吸光密度值为纵坐标，得到葡萄糖的标准曲线如图1所示。

③、还原糖的提取

剪取第四片展开鲜烟叶0.3g，共三份，加少量的水研磨，定容10mL蒸馏水，50℃温水浴20min，使还原糖浸出，离心过滤，作为还原糖测定液。

④、还原糖的测定

取3支25mL刻度试管，编号，分别加入还原糖待测液1mL，3.5－二硝基水杨酸试剂1.5mL，其余操作均与制作标准曲线相同，测定各管的消光值。分别在标准曲线上查出相应还原糖毫克数，按下试计算还原糖百分含量：

式中C——标准曲线方程求得的还原糖量(mg)；

V——提取液体积(mL)；

a——显色时吸取样品液体积(mL)；

W——样品重(g)。

(5)在烟草5～6片真叶期移入二氯喹啉酸添加浓度为1.04×10^-3mg/kg、2.08×10^-3mg/kg、4.17×10^-3mg/kg、8.33×10^-3mg/kg、1.67×10^-2mg/kg药土中，分别在7d、14d、21d、28d、35d采用步骤(1)～(4)测量烟叶的还原糖含量。

根据上述方法测定氯喹啉酸对烟草叶片还原糖含量的影响，测定结果如图2所示，可以看出，经二氯喹啉酸处理，烟株叶片内还原糖含量从7d到28d均高于对照。移植后7d，二氯喹啉酸浓度为1.04×10^-3mg/kg、2.08×10^-3mg/kg、4.17×10^-3mg/kg、8.33×10^-3mg/kg、1.67×10^-2mg/kg处理烟草叶片中还原糖含量分别为5.06％、5.06％、5.97％、6.85％、7.99％，处理较对照提高87.72％、87.60％、121.33％、154.11％、196.31％。移植后35d，二氯喹啉酸浓度为4.17×10^-3mg/kg、8.33×10^-3mg/kg、1.67×10^-2mg/kg，烟草叶片中还原糖含量较移植后28d测定降低。可能是烟草已经产生明显的畸形，使单位鲜重还原糖含量降低。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。