激光捕获纤维切割技术中未染色脑组织切片的处理方法与流程

本发明属于生物技术中组织切片处理技术领域，尤其是一种激光捕获纤维切割技术中未染色脑组织切片的处理方法。

背景技术：

激光捕获纤维切割技术(Laser Capture Microdissection，LCM)是一种自动样品制备技术，允许在显微镜下从混合样品中分离出特定的细胞。LCM技术可根据应用需要，从脑组织样本中分离出各个脑区(或核)。但是首先要将脑组织样品切成5-7μm的切片，然后再设定激光捕获的区域，由于切片很薄很难清晰的辨认脑区(或核)的边界。所以清晰的辨认脑区(或核)边界是测定特定蛋白和RNA含量精确程度的关键。如果采用HE(中文名)染色可以清晰地辨认不同的脑区(或核)，但是HE染色却将脑组织中的蛋白破坏，RNA降解，不能获得具有活性的组织样品。如果将组织切片的厚度增加，例如20-40μm，尽管能清楚辨认各个脑区(或核)，但是却不能用LCM的方法捕获样品。

目前，激光捕获纤维切割技术对脑组织切片的处理方法基本为Zeiss公司提供的实验方法，该方法包括的实验步骤包括：(1)将5-7μm的脑组织切片贴在无RNA酶处理过的贴膜载玻片上，(2)浸入到无RNA酶的水中5-6次，以移除OCT包埋剂，(3)按顺序快速地浸入4℃，浓度分别为70％、95％、100％的乙醇中各2次，每次1分钟，(4)空气中干燥10分钟，样品在-20℃储存。如图1所示，经该方法处理后的脑组织切片虽然具有活性，但不能够清晰地辨认不同的脑区或核的边界，因此不能完整的将脑区或核取出，不能准确测定脑区或核蛋白和mRNA的表达。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术的不足，能清晰的辨认脑区或核的边界，以精确的获得该脑区或核，具体的是一种激光捕获纤维切割技术中未染色脑组织切片的处理方法。

本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：

一种激光捕获纤维切割技术中未染色脑组织切片的处理方法，该方法包括步骤如下：

(1)将5-7μm的脑组织切片贴在无RNA酶处理过的贴膜的载玻片上；

(2)将贴有脑组织切片的载玻片立即浸入到70％，温度在4℃的乙醇中，5分钟；

(3)将上述处理后的脑组织切片浸入到无RNA酶的水中5-6次，以移除OCT包埋剂；

(4)将上述移除OCT包埋剂后的脑组织切片按顺序快速地浸入4℃，浓度分别为70％、95％、100％的乙醇中各2次，每次1分钟；

(5)将上述处理后的脑组织切片在常温下浸入二甲苯，10分钟，以增强组织切片的折光系数；

(6)将上述处理后的脑组织切片在空气中干燥10分钟，样品在-20℃储存。

而且，所述步骤(2)中的浸入是在切片机中处理。

本发明的优点和积极效果是：

1、通过本发明方法的处理，使脑区纤维的密度明显比周围组织暗，脑组织切片经过处理后能清晰的看见脑区或核，清晰的辨认脑区或核的边界，从而准确的取出完整的脑区或核。

2、本发明方法实验结果稳定，重复性强，过程易于实现。

3、本发明方法在清晰辨认脑区的同时并没有降低样品的生物活性。

附图说明

图1是Zebra Finch脑的切片用目前Zeiss实验方法处理后的图片；

图2是Zebra Finch脑的切片用本发明方法处理后的图片。

具体实施方式

以下对本发明实施做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。

一种激光捕获纤维切割技术中未染色脑组织切片的处理方法，该方法包括步骤如下：

(1)将5-7μm的脑组织切片贴在无RNA酶处理过的贴膜的载玻片上；

(2)将贴有脑组织切片的载玻片立即浸入到70％，温度在4℃的乙醇中，5分钟；

其中，浸入是在切片机中处理，该步骤具有固定组织切片的作用；

(3)将上述处理后的脑组织切片浸入到无RNA酶的水中5-6次，以移除OCT包埋剂；

(4)将上述移除OCT包埋剂后的脑组织切片按顺序快速地浸入4℃，浓度分别为70％、95％、100％的乙醇中各2次，每次1分钟；

(5)将上述处理后的脑组织切片在常温下浸入二甲苯，10分钟，该步骤具有透明作用，以增强组织切片的折光系数。

6)将上述处理后的脑组织切片在空气中干燥10分钟，样品在-20℃储存。

实验结果请参见附图2，两种方法处理后Zebra Finch脑的Area X区D1mRNA的含量没有差异。

实验结论：本发明的实验方法脑组织切片经过处理后脑区(核)，能清晰的看见脑区(核)。而且样品的生物活性没有受到影响。