本发明涉及口蹄疫疫苗检测技术领域，具体涉及一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒及其检测方法。
背景技术：
市场上现有的口蹄疫疫苗主要分为灭活疫苗和合成肽疫苗，其抗原核心本质为蛋白质，对疫苗内抗原进行检测主要为检测疫苗破乳后水相中的蛋白质含量。但是，口蹄疫疫苗是由抗原与佐剂以一定比例、按特定程序乳化而成的，由于抗原被油佐剂所包裹，无法直接进行检测。虽然业内已有破乳方法，但其效率和效果均不佳，破乳后会有种种问题，例如破乳不完全、水相和油相分界不清晰、水相中检测不到抗原等问题一直困扰着业界。
现有的疫苗质量标准中规定效力检验必须采用本动物进行检验，由于国家实行100％的强化免疫政策，很难选出易感的检验用动物，而且动物攻毒对实验设施要求高(BSL3级实验室)、耗时长(一个月以上)、资金花费大。如果采用血清中和试验选择易感动物，在技术上难以排除具有细胞免疫的非易感动物，在检验实际中经常发生检验数据不规律的问题，影响检验的准确性。因此口蹄疫疫苗尤其是用于牛的疫苗的质量检测一直困扰着兽药监测部门和相关生产企业。因此需要尽快研制体外检验技术，代替现有的本动物试验。
口蹄疫疫苗如何检测，如何评价等问题一直困扰着生产厂家和用户。当前国家对疫苗的检验正逐步过渡到对疫苗内抗原的检测，而当前较为普遍的方法为疫苗破乳后对抗原进行检测，通过将疫苗进行破乳处理，使抗原转移至水相中，继而对其进行后续的检测分析，虽然蛋白检测方法较多，但是由于破乳、佐剂干扰等问题无法解决，因此业内还没有能够对口蹄疫疫苗进行检验的统一且准确的方法，对于疫苗用户而言更缺乏快速定性定量的检测方法。因此，寻找一种能快速简单且经济实用的蛋白质检测试剂已经刻不容缓了。
技术实现要素：
针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒及其检测方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，所述试剂盒包括以下组成部分：破乳剂、注射器、比色卡；所述试剂盒还包括快速检测试纸或96孔板；所述破乳剂为含0.33％体积分数盐酸的乙醇溶液、含0.05％体积分数三氟乙酸的乙腈溶液中的一种。所述三氟乙酸和盐酸类似催化剂，可促进破乳，加速乳化膜的破解。
更优选地，所述破乳剂为含0.05％体积分数三氟乙酸的乙醇溶液。由于乙醇无毒，且性价比高。
优选地，所述快速检测试纸经考马斯亮蓝G-250、乙醇、磷酸的混合液浸渍。
优选地，所述96孔板各孔内均加入考马斯亮蓝G-250、乙醇、磷酸的混合液，然后以封板膜封口。
优选地，所述混合液中，考马斯亮蓝G-250的终浓度为0.1mg/ml，乙醇的体积终浓度为5％，磷酸的体积终浓度为8.5％。
优选地，所述比色卡为根据不同浓度的标准牛血清蛋白溶液使用所述快速检测试纸显色后制成。
优选地，所述比色卡为根据不同浓度的标准牛血清蛋白溶液滴入96孔板内显色后制成。
优选地，所述标准牛血清蛋白溶液的浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
本发明还提供了一种采用油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
A1、用注射器先抽取疫苗样品，再抽取破乳剂后混匀，静置分层；
A2、将注射器内分层后的下层水相滴于快速检测试纸上或者滴入96孔板内混匀，显色；
A3、将经步骤A2得到的显色试纸或孔板与比色卡进行比色，即得疫苗样品内蛋白的浓度范围。
优选地，所述疫苗样品与破乳剂的体积比为9:1-5:5。
更优选地，所述疫苗样品与破乳剂的体积比为7:3。
现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1)本发明的试剂盒可快速定量定性检测油佐剂疫苗中的蛋白含量，且结果与检测机构采用Lowry法进行检测的结果基本一致。
2)该试剂盒制作简单，操作简便，无需进行繁琐的预处理，且检测结果准确，为口蹄疫疫苗行业提供了一种快速有效的检测手段。
3)本发明的试剂盒选择特定的破乳剂，可有效对油佐剂疫苗进行破乳，提高了破乳效率(破乳效率达90％以上)，使检测结果更准确。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，包括如下组成部分：乙醇(含0.33％体积分数盐酸)、注射器、快速检测试纸、比色卡。
快速检测试纸浸渍了G-250、乙醇、磷酸的混合液，其中G-250终浓度为0.1mg/ml，乙醇终浓度为5％，磷酸终浓度为8.5％。
比色卡为不同浓度标准BSA溶液使用上述试纸显色后制成。标准BSA溶液浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
采用以上所述的快速检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
1.以注射器抽取0.7ml疫苗样品1，再抽取0.3ml乙醇(含0.33％体积分数盐酸)混匀，静置分层。
2.取一张试纸，将注射器内下层水相滴于试纸上。
3.比色，得出样品内蛋白浓度。
采用本实施例方法比色得出疫苗样品1中的蛋白浓度为30-40ug/ml之间。
实施例2
本实施例提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，包括如下成分：乙醇(含0.33％体积分数盐酸)、注射器、快速检测试纸、比色卡。
快速检测试纸浸渍了G-250、乙醇、磷酸的混合液，其中G-250终浓度为0.1mg/ml，乙醇终浓度为5％，磷酸终浓度为8.5％。
比色卡为不同浓度标准BSA溶液使用上述试纸显色后制成。标准BSA溶液浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
采用以上所述的快速检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
1.以注射器抽取0.9ml疫苗样品2，再抽取0.1ml乙醇(含0.33％体积分数盐酸)混匀，静置分层。
2.取一张试纸，将注射器内下层水相滴于试纸上。
3.比色，得出样品内蛋白浓度。
采用本实施例方法比色得出疫苗样品2中的蛋白浓度为40-50ug/ml之间。
实施例3
本实施例提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，包括如下成分：乙腈(含0.05％三氟乙酸)、注射器、快速检测试纸、比色卡。
快速检测试纸浸渍了G-250、乙醇、磷酸的混合液，其中G-250终浓度为0.1mg/ml，乙醇终浓度为5％，磷酸终浓度为8.5％。
比色卡为不同浓度标准BSA溶液使用上述试纸显色后制成。标准BSA溶液浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
采用以上所述的快速检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
1.以注射器抽取0.5ml疫苗样品3，再抽取0.5ml乙腈(含0.05％三氟乙酸)混匀，静置分层。
2.取一张试纸，将注射器内下层水相滴于试纸上。
3.比色，得出样品内蛋白浓度。
采用本实施例方法比色得出疫苗样品3中的蛋白浓度为10-20ug/ml之间。
实施例4
本实施例提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，包括如下成分：乙醇(含0.33％体积分数盐酸)、注射器、快速检测试纸、比色卡。
快速检测试纸浸渍了G-250、乙醇、磷酸的混合液，其中G-250终浓度为0.1mg/ml，乙醇终浓度为5％，磷酸终浓度为8.5％。
比色卡为不同浓度标准BSA溶液使用上述试纸显色后制成。标准BSA溶液浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
采用以上所述的快速检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
1.以注射器抽取0.7ml疫苗样品4，再抽取0.3ml乙醇(含0.33％体积分数盐酸)混匀，静置分层。
2.取一张试纸，将注射器内下层水相滴于试纸上。
3.比色，得出样品内蛋白浓度。
采用本实施例方法比色得出疫苗样品4中的蛋白浓度为30-40ug/ml之间
实施例5
本实施例提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，包括如下成分：乙醇(含0.33％体积分数盐酸)、注射器、96孔板、比色卡。
96孔板内每孔加入100ul G-250、乙醇、磷酸的混合液，其中G-250终浓度为0.1mg/ml，乙醇终浓度为5％，磷酸终浓度为8.5％，以封板膜封口。
比色卡为不同浓度标准BSA溶液滴入上述96孔板内显色后制成。标准BSA溶液浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
采用以下所述的快速检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
1.以注射器抽取0.7ml疫苗样品5，再抽取0.3ml乙醇(含0.33％体积分数盐酸)混匀，静置分层。
2.取出96孔板，将注射器内下层水相滴如96孔板内，混匀。
3.比色，得出样品内蛋白浓度。
采用本实施例方法比色得出疫苗样品5中的蛋白浓度为30-40ug/ml之间。
实施例6
本实施例提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，包括如下成分：乙醇(含0.33％体积分数盐酸)、注射器、96孔板、比色卡。
96孔板内每孔加入100ul G-250、乙醇、磷酸的混合液，其中G-250终浓度为0.1mg/ml，乙醇终浓度为5％，磷酸终浓度为8.5％，以封板膜封口。
比色卡为不同浓度标准BSA溶液滴入上述96孔板内显色后制成。标准BSA溶液浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
采用以上所述的快速检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
1.以注射器抽取0.7ml疫苗样品6，再抽取0.3ml乙醇(含0.33％体积分数盐酸)混匀，静置分层。
2.取出96孔板，将注射器内下层水相滴如96孔板内，混匀。
3.比色，得出样品内蛋白浓度。
采用本实施例方法比色得出疫苗样品6中的蛋白浓度为30-40ug/ml之间。
实施例7
本实施例提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，包括如下成分：乙醇(含0.33％体积分数盐酸)、注射器、96孔板、比色卡。
96孔板内每孔加入100ul G-250、乙醇、磷酸的混合液，其中G-250终浓度为0.1mg/ml，乙醇终浓度为5％，磷酸终浓度为8.5％，以封板膜封口。
比色卡为不同浓度标准BSA溶液滴入上述96孔板内显色后制成。标准BSA溶液浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。
采用以上所述的快速检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
1.以注射器抽取0.7ml疫苗样品7，再抽取0.3ml乙醇(含0.33％体积分数盐酸)混匀，静置分层。
2.取出96孔板，将注射器内下层水相滴如96孔板内，混匀。
3.比色，得出样品内蛋白浓度。
采用本实施例方法比色得出疫苗样品7中的蛋白浓度为30-40ug/ml之间。
以上实施例1-7所检测的为随机抽取市场上各类口蹄疫合成肽疫苗(样品1-7)进行检测。另将上述疫苗样品1-7送交正规检测机构进行检测，采用中国药典所提供的Lowry法进行检测，其对比结果见表1。
表1实施例1-7的检测结果与正规检测机构检测结果比较
从表1的结果可看出，本发明的试剂盒可快速定量定性检测口蹄疫合成肽疫苗中的蛋白含量，且结果与检测机构采用Lowry法进行检测的结果基本一致，说明了本发明试剂盒检测结果的准确性。
本发明具体应用途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，以上实施例仅用于说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。