一种离子色谱检测阿卡波糖的方法与流程

本发明涉及一种离子色谱检测阿卡波糖的方法，属于分析检测领域。

背景技术：

阿卡波糖(Acarbose)是一种生物合成的假性四糖(结构式如图1)，是近年来发展起来的α-葡萄糖苷酶抑制剂。其对小肠壁细胞刷状缘的α-葡萄糖苷酶的活性具有抑制作用，从而具有抑制多糖及低聚糖等的水解，延缓和减少葡萄糖的生成，控制餐后血糖浓度的升高等功效。作为临床治疗Ⅱ型糖尿病类药物，阿卡波糖具有作用机制新颖、临床疗效好、毒副作用小等特点，市场前景广阔。

目前关于阿卡波糖的检测主要采用高效液相色谱法(HPLC)，使用的检测器有紫外检测检测器，示差折光检测器或蒸发光散射检测器。由于阿卡波糖只有紫外末端吸收，在使用紫外检测器检测时只能选用210nm以下的低波长测定，存在溶剂或杂质干扰较大、出峰时间长等缺点。而示差折光检测器存在灵敏度低、基线稳定性受温度影响大以及不能进行梯度洗脱等缺点。采用蒸发光散射检测器时，由于它是非线性检测器，在定量方面存在缺陷。

因此建立一种快速、准确的阿卡波糖制剂中阿卡波糖含量的检测方法，是目前亟待解决的问题。

技术实现要素：

为了解决上述问题，本发明提供了一种离子色谱检测阿卡波糖的方法。本发明的方法是采用高效阴离子交换色谱柱分离，脉冲安培检测器检测，以氢氧化钠溶液作为流动相，外标法定量检测阿卡波糖的含量。

本发明的检测阿卡波糖的方法，是采用离子色谱检测待测样品；其中色谱柱为PA20或PA10高效阴离子交换色谱柱，柱温为25-35℃，流动相为200-300mmol/L氢氧化钠溶液，流动相流速为0.5-1.0mL/min，以脉冲安培检测器检测，检测器电位波形采用糖标准四电位波形。

在一种实施方式中，所述离子色谱使用的是Thermo Fisher公司ISC 5000离子色谱仪。

在一种实施方式中，所述色谱柱为Thermo CarboPac PA20阴离子交换柱或者Thermo CarboPac PA10阴离子交换柱，包括分析柱(250mm×4mm id)和保护柱(50mm×4mm id)。

在一种实施方式中，所述方法中待测样品的进样体积为20μL。

在一种实施方式中，所述方法是采用200-300mmol/L氢氧化钠溶液进行等度洗脱。

在一种实施方式中，所述色谱柱为Thermo CarboPac PA20阴离子交换柱，柱温为30℃，流动相为300mmol/L氢氧化钠溶液，流动相流速为0.5mL/min。

在一种实施方式中，所述方法，还包括配置不同浓度的阿卡波糖标准溶液，采用离子色谱检测，得到不同阿卡波糖标准溶液下的峰面积，绘制峰面积与阿卡波糖浓度之间的标准曲线；将待测样品检测得到的峰面积代入标准曲线，即可获知待测样品中的阿卡波糖浓度。

在一种实施方式中，阿卡波糖标准溶液的配置：阿卡波糖标准品配成1.000g/L储备液，于冰箱中保存，使用时将储备液稀释至系列混合标准溶液。

本发明的有益效果：

(1)本发明方法检测阿卡波糖的最低检出限为0.15μg/L，回收率为96.8％-102.2％，重现性范围为0.59％-0.84％(RSD，n＝5)。

(2)本发明方法与液相色谱法相比具有操作简便，灵敏度高，分析时间短等优点。

(3)本发明方法无需衍生和复杂样品前处理即可检测不同阿卡波糖制剂中阿卡波糖含量。

(4)本发明方法具有较好的选择性，在阿卡波糖保留时间区域内没有其他的色谱峰干扰。

附图说明：

图1：实施例1条件下阿卡波糖离子色谱图；

图2：实施例2条件下阿卡波糖离子色谱图；

图3：实施例3条件下阿卡波糖离子色谱图。

具体实施方式

以下给出实施例，对本发明作进一步说明。

实施例1

实验使用的仪器为Thermo Fisher公司ISC 5000离子色谱仪，色谱条件为：色谱柱：Thermo CarboPac PA20阴离子交换柱，包括分析柱(250mm×4mm id)和保护柱(50mm×4mm id)；柱温：30℃；进样体积：20μL。以300mmol/L氢氧化钠溶液为淋洗液进行等度洗脱，流速0.5mL/min，脉冲安培检测器采用糖标准四电位波形，阿卡波糖离子色谱图见图1。

将混合标准溶液母液稀释不同倍数，在本实施例的色谱条件下进行检测分析.以阿卡波糖浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，并通过回归计算，得到标准曲线为Y＝1.1264X+0.0021，相关系数在0.9994之间。根据3倍信噪比(S/N＝3)计算出阿卡波糖的检出限分别为0.15μg/L。阿卡波糖片剂样品平行5次经前处理后测定，平行样品间的相对标准偏差在0.59％-0.84％之间。对阿卡波糖片剂样品进行了加标回收实验，回收率在96.8％-102.2％之间。

实施例2

实验使用的仪器为Thermo Fisher公司ISC 5000离子色谱仪，色谱条件为：色谱柱：Thermo CarboPac PA10阴离子交换柱，包括分析柱(250mm×4mm id)和保护柱(50mm×4mm id)；柱温：35℃；进样体积：20μL。以200mmol/L氢氧化钠溶液为淋洗液进行等度洗脱，流速1.0mL/min，脉冲安培检测器采用糖标准四电位波形，阿卡波糖离子色谱图见图2。

实施例3

实验使用的仪器为Thermo Fisher公司ISC 5000离子色谱仪，色谱条件为：色谱柱：Thermo CarboPac PA20阴离子交换柱，包括分析柱(250mm×4mm id)和保护柱(50mm×4mm id)；柱温：30℃；进样体积：20μL。以200mmol/L氢氧化钠溶液为淋洗液进行等度洗脱，流速0.5mL/min，脉冲安培检测器采用糖标准四电位波形，阿卡波糖离子色谱图见图3。

此外，发明人分别考察50、100、200、300和500mmol/LNaOH淋洗液对阿卡波糖的分离洗脱效果。当NaOH浓度为50和100mmol/L时，阿卡波糖的出峰较晚，峰型较扁；而NaOH浓度提高到500mmol/L时，阿卡波糖出峰较早，与样品的单糖和二糖等其他糖类不能进行分离。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。