本发明公开输液用高阻隔外袋中残留溶剂含量的检测方法，属于医药
技术领域：
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背景技术：
：随着对药品与包装材料相容性研究重要性理解的日趋深入，国家相继发布一些相容性研究指导原则。根据不同给药途径的制剂与包装系统发生相互作用的风险分级表，其中注射剂与包装袋相互作用被列入最高风险级别。与此同时，国家对药品注射剂申报做出硬性规定，要求大容量注射剂与塑料包装材料申报时必须做相容性研究。注射剂的市售包装常采用输液用高阻隔外袋是通过聚酯高阻隔层、尼龙阻隔层、聚丙烯层通过在膜片表面涂布黏结材料复合而成。其中的树脂溶质、有机溶剂等化学组分是对环境及人体造成危害的缘由。因此，输液用高阻隔外袋中残留溶剂的检测及安全性评价成为注射剂与塑料包装材料相容性研究的重要内容之一。目前有关输液用高阻隔外袋中残留溶剂的检测方法报道较少，目前未找到一种可以同时而且准确的检测注射液中迁移的甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯和乙酸丁酯七种残留溶剂含量的方法。常见的检测残留溶剂的方法是采用气相色谱法—顶空进样方式，但是该方法在做药液的回收率时乙醇和2-丁酮的回收率偏低，无法准确定量药液中的残留溶剂含量。分析原因是乙醇极性较强，在水中的溶解性较好，采用顶空进行气液分离不能将其与水完全分离，导致加标回收率几乎为零；2-丁酮能与水形成共沸混合物（含水11.3%，丁酮88.7%），共沸点73.4℃，这是导致其加标回收率偏低的主要原因。提供一种快速而准确的检测出输液用高阻隔外袋中甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯和乙酸丁酯七种残留溶剂在注射液中迁移含量的方法，是注射剂与塑料包装材料相容性研究领域一项亟待解决的技术难题。技术实现要素：本发明提供一种同时精确检测7种成分含量的方法。具体地是检测注射液中甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯和乙酸丁酯七种残留溶剂含量的方法。通过不断地实验与优化色谱条件使得每个主峰能达到基线分离，更准确地对输液用高阻隔外袋中残留溶剂各组分进行定量检测。本发明的目的是通过如下技术方案实现的：一种输液用高阻隔外袋中残留溶剂含量的检测方法，其特征在于：（1）色谱条件：毛细管柱：6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷，规格为30m×0.32mm×1.8μm；进样方式：溶液直接进样0.3-0.7μl，分流比5-10:1；载气为氮气，流速1.5ml/min，氢气40ml/min，空气400ml/min，氮气20ml/min；进样口温度160-180℃，火焰检测器温度230-250℃；柱温初始温度30-40℃，保持8-15min，以5-12℃/min速度升至140-180℃，保持0.5-5.0min。（2）检测溶液的配制：对照品溶液：精密称取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯和乙酸丁酯七种对照品适量，用n,n-二甲基甲酰胺溶解，稀释，制成每1ml中含对照品2mg的溶液，作为对照品储备液；再精密量取适量，用n,n-二甲基甲酰胺稀释，作为对照品溶液；供试品溶液：直接取注射液进样0.3-0.7μl进行检测；（3）测定法：将对照品溶液与供试品溶液分别注入气相色谱仪0.3-0.7μl，采用外标法定量。优选的，所述步骤（1）中，所述进样方式：溶液直接进样0.3μl；所述柱温初始温度30℃，保持15min，以5℃/min速度升至140℃，保持5min，总分析时间为42min。优选的，所述步骤（1）中，所述进样方式：溶液直接进样0.5μl；所述柱温初始温度35℃，保持12min，以7℃/min速度升至160℃，保持1min，总分析时间为30.9min。优选的，所述步骤（1）中，所述进样方式：溶液直接进样0.7μl；所述柱温初始温度40℃，保持8min，以12℃/min速度升至180℃，保持0.5min，总分析时间为20.2min。优选的，所述步骤（1）中，所述进样方式：分流比为5:1。优选的，所述步骤（1）中，所述进样方式：溶液直接进样0.4μl；所述柱温初始温度35℃，保持12min，以7℃/min速度升至160℃，保持1min，总分析时间为30.9min。优选的，所述步骤（1）中，所述进样方式：溶液直接进样0.6μl；所述柱温初始温度35℃，保持12min，以7℃/min速度升至160℃，保持1min，总分析时间为30.9min。优选的，所述步骤（1）中，所述进样方式：分流比为5:1或10:1。有益效果此发明所公开的检测方法，通过建立准确适合的溶液直接进样气相色谱法检测各组分含量，能将甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯七种残留溶剂在一个方法中同时检出，简便易行。本发明所公开的直接进样无需前处理，能费少，时间短，同时检测精密度好，回收率高，避免了顶空进样气相色谱法乙醇和2-丁酮的药液回收率偏低问题。本发明的检测方法能更准确地对输液用高阻隔外袋中迁移出的残留溶剂进行定量精确检测；为注射剂研制选择安全有效的包装材料的相容性研究奠定实验基础。具体实施方式：以下通过具体实施方式对本发明的技术方案加以阐述，其中所涉及具体工艺参数和条件不作为本发明技术方案的限定；本领域技术人员在理解本发明技术方案的基础上，所做改进和变化都属于本发明的保护范围。本发明检测方法系统适用性好，各主峰能达到基线分离。经方法学验证，专属性、线性、精密度、准确度、定量限和检出限均能达到检测要求。方法学验证实验具体如下。方法学验证实验色谱条件具体为：采用溶液直接进样气相色谱法，进样量为0.5μl，分流比5:1；载气为氮气，流速1.5ml/min，氢气40ml/min，空气400ml/min，氮气20ml/min；进样口温度170℃，检测器250℃（fid）；柱温初始温度35℃，保持12min，以10℃/min速度升至160℃，保持1min。专属性试验取各溶剂对照品溶液、空白溶液和样品供试液，在上述色谱条件下进行测定。甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯保留时间如表1。表1专属性试验结果残留溶剂甲醇乙醇丙酮异丙醇2-丁酮乙酸乙酯乙酸丁酯保留时间（min）3.1294.3535.1005.50810.40010.73621.687分离度-7.224.442.2421.431.3962.18由表1试验数据可知，各组分的分离度均符合要求，空白无干扰。精密度试验分别制备甲醇对照品13.3816μg/ml、乙醇对照品16.1838μg/ml、丙酮对照品8.4311μg/ml、异丙醇对照品12.6731μg/ml、2-丁酮对照品11.4903μg/ml、乙酸乙酯对照品17.3722μg/ml、乙酸丁酯对照品6.0611μg/ml，取0.5μl液体注入气相色谱仪中，连续进样6次。具体试验结果如表2所示。表2精密度试验结果由表2结果表明，甲醇测定的rsd为0.76%，乙醇测定的rsd为0.45%，，丙酮测定的rsd为1.16%，，异丙醇测定的rsd为0.71%，2-丁酮测定的rsd为0.44%，乙酸乙酯测定的rsd为0.80%，乙酸丁酯测定的rsd为2.06%。由上述实验结果得知本发明检测方法精密度高。线性关系试验分别精密量取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯对照品储备液1.2ml、1.5ml、0.82ml、1.2ml、1.0ml、1.62ml和0.63ml至25ml容量瓶中，dmf定容，摇匀，作为混标储备液；分别精密量取混标储备液0.3ml、0.6ml、1.2ml、2.4ml和5.0ml至10ml容量瓶中，dmf定容，摇匀，作为线性①、②、③、④和⑤。分别取0.5μl液体注入气相色谱仪中，用含量对面积进行线性回归。具体线性关系实验结果如表3所示。表3线性试验结果由表3的实验结果表明：甲醇在3.3454～55.7568μg/ml范围内线性良好、乙醇在4.0460～67.4325μg/ml范围内线性良好、丙酮在2.1078～35.1294μg/ml范围内线性良好、异丙醇在3.1683～52.8047μg/ml范围内线性良好、2-丁酮在2.8726～47.8764μg/ml范围内线性良好、乙酸乙酯在4.3430～72.3818μg/ml范围内线性良好、乙酸丁酯在1.5153～25.2545μg/ml范围内线性良好。定量限试验分别称取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯对照品适量溶于dmf中，逐步稀释，以信噪比10:1为标准，分别测定甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯的定量限。具体实验结果如表4所示。表4定量限试验结果残留溶剂平均信噪比定量限（μg/ml）甲醇10:13.3454乙醇10:14.0460丙酮10:12.1078异丙醇10:13.16832-丁酮10:12.8726乙酸乙酯10:14.3430乙酸丁酯10:11.5153检出限试验分别称取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯对照品适量溶于dmf中，逐步稀释，以信噪比3:1为标准，分别测定甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯的检出限。具体实验结果如表5所示。表5检出限试验结果残留溶剂平均信噪比检出限（μg/ml）甲醇3:11.1151乙醇3:11.3486丙酮3:10.7026异丙醇3:11.05612-丁酮3:10.9575乙酸乙酯3:11.4477乙酸丁酯3:10.5051药液中回收率试验精密量取甲醇对照品33.454、42.375、50.181μg，乙醇对照品40.460、51.249、60.690μg，丙酮对照品21.078、26.698、31.617μg，异丙醇对照品31.683、40.132、47.524μg，2-丁酮对照品28.726、36.386、43.089μg，乙酸乙酯对照品43.430、55.012、65.145μg，乙酸丁酯对照品15.153、19.193、22.730μg至10ml容量瓶中，分别加药液稀释并定容至刻度，作为供试品溶液，同一浓度平行制备3份。实验结果如表6所示。表6残留溶剂在药液中的回收率试验结果由表6实验数据表明甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯和乙酸丁酯在药液中的的平均回收率分别为116.7%、106.9%、104.6%、99.6%、103.1%、99.6%和84.9%，符合检测要求。为了便于与本发明比较，将现有顶空进样气相色谱法回收率对比如下。顶空进样气相色谱法：取3个不同浓度的加标药液1.0ml置于20ml顶空瓶中，加盖压塞，70℃下平衡30min，取1.0ml气体注入气相色谱仪中，同一浓度平行制备3份。仪器条件同直接进样：分流比5:1；载气为氮气，流速1.5ml/min，氢气40ml/min，空气400ml/min，氮气20ml/min；进样口温度170℃，检测器250℃（fid）；柱温初始温度35℃，保持12min，以10℃/min速度升至160℃，保持1min。本发明直接进样色谱条件：进样量为0.5μl，分流比5:1；载气为氮气，流速1.5ml/min，氢气40ml/min，空气400ml/min，氮气20ml/min；进样口温度170℃，检测器250℃（fid）；柱温初始温度35℃，保持12min，以10℃/min速度升至160℃，保持1min。表7本发明直接进样与现有技术的顶空进样气相色谱法回收率对比试验由表7实验数据可以清楚看出，本发明直接进样的回收率高于顶空进样回收率。具有更高的准确度，能更准确的进行定量。由于本方法检测的七种残留溶剂均属于杂质，限度较低，根据中国药典2015年版9101药品质量标准分析方法验证指导原则对于回收率限度的要求为75%～120%，本检测方法的回收率均在此范围内，符合要求。实施例1（1）色谱条件：毛细管柱：6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷，规格为30m×0.32mm×1.8μm。进样方式：溶液直接进样0.3μl，分流比5:1；载气为氮气，流速1.5ml/min，氢气40ml/min，空气400ml/min，氮气20ml/min；进样口温度160℃，火焰检测器230℃。柱温初始温度30℃，保持15min，以5℃/min速度升至140℃，保持5.0min。（2）检测溶液的配制：对照品溶液：精密称取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯对照品适量，用n,n-二甲基甲酰胺溶解，稀释，制成每1ml中含对照品2mg的溶液，作为对照品储备液；再精密量取适量，用n,n-二甲基甲酰胺稀释，作为对照品溶液；供试品溶液：直接取注射液进样0.5μl进行检测；（3）测定法：将对照品溶液与供试品溶液分别注入气相色谱仪0.5μl，采用外标法定量。得到如下实验结果：丙酮与异丙醇分离度2.52-丁酮与乙酸乙酯分离度1.6乙醇对称因子0.66总分析时间42min实施例2（1）色谱条件：毛细管柱：6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷，规格为30m×0.32mm×1.8μm。进样方式：溶液直接进样0.7μl，分流比5:1；载气为氮气，流速1.5ml/min，氢气40ml/min，空气400ml/min，氮气20ml/min；样口温度180℃，火焰检测器240℃。柱温初始温度40℃，保持8min，以12℃/min速度升至180℃，保持0.5min。（2）检测溶液的配制：对照品溶液：精密称取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯对照品适量，用n,n-二甲基甲酰胺溶解，稀释，制成每1ml中含对照品2mg的溶液，作为对照品储备液；再精密量取适量，用n,n-二甲基甲酰胺稀释，作为对照品溶液；供试品溶液：直接取注射液进样0.5μl进行检测；（3）测定法：将对照品溶液与供试品溶液分别注入气相色谱仪0.5μl，采用外标法定量。得到如下实验结果：丙酮与异丙醇分离度1.82-丁酮与乙酸乙酯分离度1.0乙醇对称因子0.83总分析时间20.2min实施例3（1）色谱条件：毛细管柱：6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷，规格为30m×0.32mm×1.8μm。进样方式：溶液直接进样0.5μl，分流比10:1；载气为氮气，流速1.5ml/min，氢气40ml/min，空气400ml/min，氮气20ml/min；进样口温度170℃，火焰检测器250℃。柱温初始温度35℃，保持12min，以7℃/min速度升至160℃，保持1min。（2）检测溶液的配制：对照品溶液：精密称取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、2-丁酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯对照品适量，用n,n-二甲基甲酰胺溶解，稀释，制成每1ml中含对照品2mg的溶液，作为对照品储备液；再精密量取适量，用n,n-二甲基甲酰胺稀释，作为对照品溶液；供试品溶液：直接取注射液进样0.5μl进行检测；（3）测定法：将对照品溶液与供试品溶液分别注入气相色谱仪0.5μl，采用外标法定量。得到如下实验结果：丙酮与异丙醇分离度2.22-丁酮与乙酸乙酯分离度1.4乙醇对称因子0.88总分析时间30.9min分析上述实施例1-3的实验结果，通过比较发现各实验结果中的丙酮与异丙醇分离度、2-丁酮与乙酸乙酯分离度均在1.0以上，均符合检测要求。但是在实施例3的试验条件下，丙酮与异丙醇分离度、2-丁酮与乙酸乙酯分离度和乙醇对称因子均达到最好，总分析时间适中。当前第1页12