一种广谱农药残留快速检测盘的制作方法

本实用新型用于农药残留检测装置技术领域，特别是涉及一种广谱农药残留快速检测盘。

背景技术：

随着科学的发展，农药的使用已经成为农业生产中必不可少的手段，但是，由于过量使用农药而产生农药残留问题，对于我们的健康也造成了严重的威胁。

为了有效控制农药残留的危害，我国颁布了《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测GB/T 5009.199-2003》国家标准方法，该标准运用的是胆碱酯酶抑制法。该标准方法1是速测卡法，将胆碱酯酶和靛酚乙酸酯分别包被再纸片两端固定的滤纸片上，通过加样品后，先预先抑制反应10min，之后再折叠使之接触反应3min。正常情况下，胆碱酯酶催化靛酚乙酸酯分解，产生蓝色的靛酚，如果有农药抑制了胆碱酯酶活性，则没有蓝色产物。虽然该方法快速简便，但也存在折叠不好引起接触反应不完全、反应需要恒温以及容易干扰等缺点。

在国标速测卡法的基础上，为了进一步简化检测过程，郑州大学翁海波等发明了农药残留快速检测点卡（公告号CN 205607868 U），自下而上依次叠放有底物膜和酶膜，滴加样品，从上往下渗透反应，减少折叠引起的误差。但其整个过程耗时长，底物使用吲哚乙酸酯，反应后显绿色，容易与蔬菜中样品中的叶绿素的绿色混淆，容易出现假阴性结果；另外酶片与底物片直接接触，很容易发生反应造成产品失效，不易保存。

技术实现要素：

为解决上述问题，本实用新型提供一种广谱农药残留快速检测盘，其可不用人工手捏，减少检测时间，节省成本，减少干扰和操作误差。

本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：一种广谱农药残留快速检测盘，包括检测板，所述检测板上设有检测孔和对照孔，所述检测孔和对照孔的顶部敞口，检测孔和对照孔内均自上而下依次设有酶片、显色片和底物片。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述检测板上设有多个检测孔，各检测孔均匀分布在以对照孔为圆心的圆周上。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述检测孔和对照孔为开设在检测板顶部的圆形盲孔。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述检测孔的孔径为4-6mm。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述对照孔的孔径为4-6mm。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述酶片材料为直径4-6mm的圆形洁净纸，所述酶片包被有对有机磷和氨基甲酸酯类农药高度敏感的胆碱酯酶。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述显色片材料为直径4-6mm的层析滤纸，所述显色片包被有二硫代二硝基苯甲酸显色剂。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述底物片材料为直径4-6mm的层析滤纸，所述底物片包被有底物硫代乙酰胆碱或者硫代丁酰胆碱。

进一步作为本实用新型技术方案的改进，所述检测板为白色塑料板。

本实用新型的有益效果：本实用新型摒弃现有技术中采用手捏的检测方式，在酶片和底物片之间有显色片隔开，避免酶和底物直接重叠在一起造成保存困难；滴加样品直接检测，时间快，8min左右就可以完成检测，无需再人工或仪器折叠，减少了人为操作误差，同时成本更加低，更加合适基层操作。

同时，增加了对照孔，这样每一个检测孔都可以直接和对照孔进行颜色比对，大大提高了检测的准确性和检测的效率，同时还降低了成本。

附图说明

下面结合附图对本实用新型作进一步说明：

图1是本实用新型俯视图；

图2是图1中A-A处截面图。

具体实施方式

参照图1、图2，其显示出了本实用新型之较佳实施例的具体结构。以下将详细说明本实用新型各部件的结构特点，而如果有描述到方向( 上、下、左、右、前及后) 时，是以图2所示的结构为参考描述，但本实用新型的实际使用方向并不局限于此。

本实用新型提供了一种广谱农药残留快速检测盘，包括检测板1，为了便于观察反应后的颜色变化，所述检测板1为白色塑料板。所述检测板1上设有检测孔2和对照孔3，所述检测孔2和对照孔3的顶部敞口，检测孔2和对照孔3内均自上而下依次设有酶片4、显色片5和底物片6。本检测盘通过待测农药残留样品液首先接触酶片4，其农药成分与酶接触反应，未反应的酶在渗透作用下，分解底物，反应产物与显色剂反应，八分钟后根据显黄色的深浅判断是否有农药残留。本实用新型摒弃现有技术中采用手捏的检测方式，在酶片4和底物片6之间有显色片5隔开，避免酶和底物直接重叠在一起造成保存困难，以及直接接触反应造成失效。该农药残留检测盘灵敏度高，抗干扰强，稳定性强，检测方便，成本低。

所述检测板1上设有多个（4-12个）检测孔2，各检测孔2均匀分布在以对照孔3为圆心的圆周上。这样每一个检测孔2都可以直接和对照孔3进行颜色比对，大大提高了检测的准确性和检测的效率，同时还降低了成本。

作为本实用新型优选的实施方式，所述检测孔2和对照孔3为开设在检测板1顶部的圆形盲孔。所述检测孔2的孔径为4-6mm。所述对照孔3的孔径为4-6mm。所述酶片4材料为直径4-6mm的圆形洁净纸，所述酶片4包被有对有机磷和氨基甲酸酯类农药高度敏感的胆碱酯酶。酶片4中包被有高灵敏的改良胆碱酯酶，稳定性好，抗干扰强，对温度依赖低，常温检测即可，无需额外仪器加热。

所述显色片5材料为直径4-6mm的层析滤纸，所述显色片5包被有二硫代二硝基苯甲酸显色剂或者其他具有同等功能的显色剂。二硫代二硝基苯甲酸更加稳定，反应结果显黄色，干扰少。

所述底物片6材料为直径4-6mm的层析滤纸，所述底物片6包被有底物硫代乙酰胆碱或者硫代丁酰胆碱。在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，有农药抑制时，显浅黄或直接为白色，通过黄色的深浅变化判断样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药是否超出限量标准，颜色变化明显后期可以做成仪器判断会生成更加准确的数据。

广谱农药残留快速检测盘可采用以下方法制备

1）取2mL刚配制好的稳定剂与2mL的乙酰胆碱酯酶溶液混合。将裁成边长100mm的正方形的洁净纸，浸入混合液中，完全浸透后取出，在室温下晾干10分钟。再转入干燥器干燥120分钟。再用打孔机打成直径6mm的圆片。

2）将显色剂二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）的配制成乙醇溶液，裁成边长100mm的正方形的滤纸，浸入混合液中，完全浸透后取出，在室温下晾干10分钟。再转入干燥器干燥30分钟。再用打孔机打成直径6mm的圆片。

3）将硫代乙酰胆碱配制成乙醇溶液，裁成边长100mm的正方形的滤纸，浸入混合液中，完全浸透后取出，在室温下晾干10分钟。再转入干燥器干燥30分钟。再用打孔机打成直径6mm的圆片。

4）取出下盖，往检测孔为中，自下而上放进底物片、显色片、酶片。用铝箔封装。

广谱农药残留快速检测盘的检测步骤

1）pH7.5缓冲液：分别取15g磷酸氢二钠（Na₂HPO₄•12H₂O）与1.59g无水磷酸二氢钾（KH₂PO₄）；

2）选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL缓冲液，震摇50次，静置2分钟以上；

3）取一片检测盘，平放在桌面上，往中中间检测孔滴加50μl缓冲液作为对照，旁边孔滴加50μl样品液，放置8-10分钟，观察颜色；

4）判断依据：与空白对照相同程度的黄颜色，为阴性结果；不变黄色为阳性结果。与对照比，样品结果显黄色越浅说明样品的农药残留就越多，浅黄为弱阳性，说明农药残留量较低。

当然，本发明创造并不局限于上述实施方式，熟悉本领域的技术人员在不违背本实用新型精神的前提下还可作出等同变形或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。