本发明属于医疗检测技术领域，具体涉及一种幽门螺旋杆菌的检测试剂盒及其检测方法。
背景技术：
幽门螺旋杆菌(helicobacterpylori，hp)是一种微需氧的螺杆菌，主要是通过口腔进入消化道对机体产生感染的，幽门螺旋杆菌造成的感染主要造成胃和十二指肠溃疡及胃癌的重要诱因，1994年世界卫生组织就将幽门螺旋杆菌列为第一类高危致恶变因子，同时幽门螺旋杆菌具有极强的传染性，据报道，世界范围内有进一半人口被hp感染，中国也属hp高发区，平均感染率高达40％-80％，所以对幽门螺旋杆菌的检测已成为临床的需要。
现在对hp感染的诊断方法多种多样，涉及到的领域有病理学、细菌学、血清学、同位素示踪等。但诊断中常规的检测方法胃粘膜病理he切片或者进行胃及胃粘膜活检的方法都具有耗时、耗力、耗钱的特点，并不利于临床大批量的检测，为临床的诊断带来了不便。
幽门螺旋杆菌的抗体在人体的血清、血浆或全血中都含有，因此通过抗原与抗体的特异性结合，根据循环外周血中幽门螺旋杆菌的抗体的数量，可以判断是否感染幽门螺旋杆菌，用于幽门螺旋杆菌感染的临床辅助诊断，可以快速、敏感的检测出人体的感染情况。
现有对幽门螺旋杆菌的检测试剂盒存在制备方法复杂、耗时长、价格昂贵等问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种幽门螺旋杆菌的检测试剂盒及其检测方法，以期解决上述现有技术中存在的至少部分技术问题。
为了实现上述目的，本发明提供一种幽门螺旋杆菌的检测试剂盒，其包括氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7所示的7条多肽，分别为：
seqidno.1：alaglualaalavalleuglugluleualaalaalaglygly
glnglyileserthrala；
seqidno.2：glngluleugluserileargglualaglyglyvalthrser
alaargalathrglygly；
seqidno.3：metthrglyalaglyilegluargargalagluthralapro
alathralathrglyala；
seqidno.4：aspleuleualathrileserglualagluglualametala
serthrglyglyalaala；
seqidno.5：glyilevalglygluleuthrleulysalaalaalathrgly
glyseralaileglyglu；
seqidno.6：metthrglugluglythrargproalagluilaglyalaala
argleuglugluleuala；
seqidno.7：thralathrglyleuileaspglualagluglyalametala
serseralailealagly。
本发明中，氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7所示的7条多肽在试剂盒中作为tb刺激物，用于检测反应。
优选地，在所述幽门螺旋杆菌的检测试剂盒中，氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7所示的7条多肽中的每一条的含量为10mg。
优选地，所述幽门螺旋杆菌的检测试剂盒还包括无血清培养基。
优选地，所述幽门螺旋杆菌的检测试剂盒还包括分离液。
优选地，所述幽门螺旋杆菌的检测试剂盒还包括高特异性鼠抗人igg抗体和/或幽门螺旋杆菌感染阳性刺激物。
优选地，所述幽门螺旋杆菌的检测试剂盒还包括用于酶联免疫斑点法的显色试剂，如nbt/bcip显色系统，最终显色蓝紫色斑点，或aec显色系统，最终显色红色斑点。
本发明还提供利用前述幽门螺旋杆菌的检测试剂盒对幽门螺旋杆菌进行检测的方法，包括如下步骤：
(1)用分离液分离待测样本，将分离好的细胞重悬于无血清培养基中；
(2)向重悬后的细胞中加入氨基酸序列如进行共孵育，然后向共孵育的体系中加入高特异性鼠抗人igg抗体进行抗原抗体反应；
(3)对抗原抗体反应后的体系进行洗涤，再加入显色底物进行显色反应，计数反应生成的斑点数。
步骤(1)中，所述将分离好的细胞重悬于无血清培养基中优选保持细胞浓度为1.0×105～3.0×105细胞/ml。
步骤(2)中，所述重悬后的细胞优选加入96孔板中，所述加入氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7所示的7条多肽优选加入96孔板中与重悬后的细胞混合以进行共孵育。所述重悬后的细胞的添加量更优选每个反应孔为100μl，所述氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7所示的7条多肽的添加量优选每个反应孔中的终浓度为5μl。所述共孵育的时间优选16～20小时。
如本领域常规，步骤(2)在操作时，优选设置阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为幽门螺旋杆菌阳性刺激物；所述阴性对照为无血清培养基留白，即反应孔中只添加无血清培养基，不添加任何其他试剂。
必须要指出的是，本发明所述的对幽门螺旋杆菌进行检测的方法属于针对体外分离样本进行鉴定定性的检测方法，仅以获得待测样本中是否被幽门螺旋杆菌刺激而感染的数量为直接结果和目的，并不涉及对人体健康状况的判断，不属于与疾病诊断相关的方法。
本发明中，上述优选条件在符合本领域常识的基础上可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明除特别说明之外，所用的百分比都是体积百分比。
本发明的有益效果为：本发明提供的包括氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7所示的7条多肽的检测试剂盒能够人工全序列合成，生产方便快捷，稳定性和特异性高，且相比传统方法检测的过程大大简化，极大地降低了成本。利用该试剂盒对分离的体外样本进行检测方便快捷，可控性和精确性均非常理想，且试剂盒操作简便。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明作进一步的详细说明。
本发明基于幽门螺旋杆菌的免疫应答机制对传统的检测方法进行了创新，研发出了能够人工全序列合成的7条多肽作为检测物(即序列表中的多肽1～多肽7，氨基酸编码序列对应为seqidno.1～seqidno.7)，经过大量的实验验证，并经和现有的检测方法对比，具有明显优势，本发明的包括氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7所示的7条多肽的试剂盒及利用其对体外幽门螺旋杆菌感染待测样本进行检测的方法具有方便快捷、准确度高、成本低等优势，具有良好的应用前景。
氨基酸序列为seqidno.1～seqidno.7的7条多肽，具体分别为：
seqidno.1：alaglualaalavalleuglugluleualaalaalaglygly
glnglyileserthrala；
seqidno.2：glngluleugluserileargglualaglyglyvalthrser
alaargalathrglygly；
seqidno.3：metthrglyalaglyilegluargargalagluthralapro
alathralathrglyala；
seqidno.4：aspleuleualathrileserglualagluglualametala
serthrglyglyalaala；
seqidno.5：glyilevalglygluleuthrleulysalaalaalathrgly
glyseralaileglyglu；
seqidno.6：metthrglugluglythrargproalagluilaglyalaala
argleuglugluleuala；
seqidno.7：thralathrglyleuileaspglualagluglyalametala
serseralailealagly。
下面是具体的实施例，用于进一步阐述本发明的技术方案及技术效果。
实施例1
人外周血(pbmc)样本来源于幽门螺旋杆菌感染性胃炎病人及非幽门螺旋杆菌感染性胃炎人群，数量为251个待测样本。
每人采样个体身上用肝素钠收集管采集10ml血液，室温条件下6小时内运至实验室。
各待测样本的检测步骤如下：
(1)用分离液将pbmc分离，分离好的细胞重悬于无血清培养基中，细胞浓度为1.5×105细胞/ml；将重悬的细胞加入pvdf96孔板中，每个反应孔加入100μl，每个样品加入10孔中，即做10个重复；
(2)向各反应孔中加入由无血清培养基和终浓度分别达到5μm的7条多肽组成的混合物50μl，混合均匀进行共孵育；设置阳性对照和阴性对照，向共孵育的体系中加入高特异性鼠抗人igg抗体进行抗原抗体反应；
(3)6％二氧化碳培养箱37℃孵育16小时；
(4)对抗原抗体反应后的体系用pbs缓冲液进行洗涤；
(5)再加入显色底物进行显色反应，室温孵育25分钟，孵育过程中观察斑点形成，计数反应生成的斑点数。
使用斑点分析仪计数斑点形成细胞的数量，根据阴性和阳性判定标准的判定，分别统计检测阴性和阳性例数，如下表所示。
阳性符合率：148/(148+4)＝97.37％
阴性符合率：94/(94+5)＝94.95％
实施例2
人外周血(pbmc)样本来源于幽门螺旋杆菌感染性胃炎病人及非幽门螺旋杆菌感染性胃炎人群，数量为251个待测样本。
每人采样个体身上用肝素钠收集管采集10ml血液，室温条件下6小时内运至实验室。
各待测样本的检测步骤如下：
(1)用分离液将pbmc分离，分离好的细胞重悬于无血清培养基中，细胞浓度为3.5×105细胞/ml；将重悬的细胞加入pvdf96孔板中，每个反应孔加入100μl，每个样品加入10孔中，即做10个重复；
(2)向各反应孔中加入由无血清培养基和终浓度分别达到5μm的7条多肽组成的混合物50μl，混合均匀进行共孵育；设置阳性对照和阴性对照，向共孵育的体系中加入高特异性鼠抗人igg抗体进行抗原抗体反应；
(3)5％二氧化碳培养箱37℃孵育20小时；
(4)对抗原抗体反应后的体系用pbs缓冲液进行洗涤；
(5)再加入显色底物进行显色反应，室温孵育30分钟，孵育过程中观察斑点形成，计数反应生成的斑点数。
使用斑点分析仪计数斑点形成细胞的数量，根据阴性和阳性判定标准的判定，分别统计检测阴性和阳性例数，如下表所示。
阳性符合率：146/(146+6)＝96.05％
阴性符合率：92/(92+7)＝92.93％
实验结果表面，与现有使用相同方法的产品相比较，有相类似的灵敏度及特异性，可以作为一种幽门螺旋杆菌检测试剂盒使用，且成本低廉，操作简单。
综上所述，本发明的多肽混合物、检测试剂盒及其相应的检测方法用于检测幽门螺旋杆菌，具有方便快捷、稳定性高、特异性强的特点，且极大地降低了成本。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
序列表
<110>李秀梅
<120>一种幽门螺旋杆菌的检测试剂盒及其检测方法
<160>7
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>20
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>1
alaglualaalavalleuglugluleualaalaalaglyglyglngly
151015
ileserthrala
20
<210>2
<211>20
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>2
glngluleugluserileargglualaglyglyvalthrseralaarg
151015
alathrglygly
20
<210>3
<211>20
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>3
metthrglyalaglyilegluargargalagluthralaproalathr
151015
alathrglyala
20
<210>4
<211>20
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>4
aspleuleualathrileserglualagluglualametalaserthr
151015
glyglyalaala
20
<210>5
<211>20
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>5
glyilevalglygluleuthrleulysalaalaalathrglyglyser
151015
alaileglyglu
20
<210>6
<211>20
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>6
metthrglugluglythrargproalagluileglyalaalaargleu
151015
glugluleuala
20
<210>7
<211>20
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<400>7
thralathrglyleuileaspglualagluglyalametalaserser
151015
alailealagly
20