悬浮酵母浓度的检测方法与流程

本发明涉及啤酒酿造工艺技术领域，特别是涉及一种悬浮酵母浓度的检测方法。

背景技术：

在啤酒酿造过程的各个阶段，需要对溶液中的悬浮酵母浓度进行检测。目前广泛使用的检测方法是血球计数板法。该方法是将待检测酵母溶液经处理后注入由盖玻片和血球计数板构成的具有一定体积的空间内，通过对该体积内的酵母进行计数，计算出样品溶液的酵母浓度。

但在采用血球计数板法检测悬浮酵母浓度时，血球计数板与盖玻片所构成需对酵母进行计数的体积是0.02mm³，体积很小。再加上有些酵母品种具有较强的凝聚性，酵母溶液在机械摇匀操作时难以做到较好的均匀性，在溶液中分布的均匀性不够。这样的话对计数板微小检测体积内的酵母进行计数，就容易导致酵母浓度检测结果偏差较大。

技术实现要素：

本发明的目的，就是克服现有技术的不足，提供一种悬浮酵母浓度的检测方法，该方法能够提高检测悬浮酵母浓度时酵母的分布均匀性，提高酵母浓度检测准确性。

为了达到上述目的，采用如下技术方案：

一种悬浮酵母浓度的检测方法，包括以下步骤：

制样：取预定体积待测样液，加入调整剂，所述调整剂中含有可被酵母分解利用的糖分，混合均匀，调整至预定体积，得待检液；

计数：取上述待检液，注入血球计数板中，显微镜下计数。

上述检测方法，是本发明人在长期实践工作中偶然发现，然后设计相应的实验进行反复摸索和验证，最终采用生物化学作用方法，通过往待测样液(酵母溶液)中添加麦汁、复合糖浆、果葡糖浆等含可被酵母分解利用的糖分，并使得酵母溶液的糖分含量与稀释之前相比，能保持不变或者提高，就能促使酵母在溶液中更加分散开来，具有较好的均匀性，则利于后续的显微镜下计数，确保计数结果的准确性。

在其中一个实施例中，所述调整剂包括：麦汁、复合糖浆、果葡糖浆中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述调整剂为用于酿造啤酒的复合糖浆和/或果葡糖浆，所述调整剂中糖浆质量百分浓度为50-70％。采用该复合糖浆，具有显著的分散效果，且所用的材料方便易得，成本低。

在其中一个实施例中，所述调整剂的添加量为使待检液中可被酵母分解利用的糖分含量不小于处理前的样液中可被酵母分解利用的糖分含量。由于在进行悬浮酵母浓度检测时，需要先对样液进行稀释处理，会使处理后样液中糖分大大下降，因此，所述调整剂的添加量至少不小于处理前的样液，即可达到促进的分散效果。

在其中一个实施例中，所述调整剂的添加量为调整剂加入后待检液糖分质量百分浓度为12％-30％。采用上述添加量范围，能达到较好的分散效果，如添加量较少，无法达到较好的分散效果，其依然倾向于结团，如添加量过多，有可能产生粘度过大，不利于酵母运动而降低其分散能力，并且糖浓度越高，悬浮酵母受到的浮力越大，在计数室内下降的速度越慢，进行下一步计数要等待的时间越长，检测耗时就越长。上述糖分既包括可被酵母分解利用的糖分，也包括小部分不可被酵母利用的糖分。本发明人经实践发现，即控制待检液中可被酵母分解利用的糖分含量不小于处理前的样液中可被酵母分解利用的糖分含量，又将总糖分浓度控制在上述范围，具有较好的分散效果。

在其中一个实施例中，所述调整剂的添加量为添加剂加入后待检液糖分质量百分浓度为20％-30％。采用上述添加量范围，具有最佳效果。

在其中一个实施例中，所述待检液与待测样液的体积比为1.5-5.0:1。优选为2:1或4:1。

在其中一个实施例中，所述制样步骤中，先加入调整剂，再以纯水定容至预定体积；或调整所述调整剂的浓度，以调整剂直接定容至预定体积。

在其中一个实施例中，所述计数步骤中，对血球计数板上四角与中间共五个大格中的酵母细胞进行计数，如计数所得酵母细胞总数超过500，则再稀释后进行计数。

在其中一个实施例中，所述再稀释按照所述制样步骤进行。以确保悬浮酵母依然具有较佳的分散状态。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明的一种悬浮酵母浓度的检测方法，通过往待测样液(酵母溶液)中添加麦汁、复合糖浆、果葡糖浆等含可被酵母分解利用的糖分，使得酵母溶液的可利用糖分含量得以提高，就能促使酵母在溶液中更加分散开来，具有较好的均匀性，则利于后续的显微镜下计数，确保计数结果的准确性。

附图说明

图1是实验例中参照对比例1方法检测显微镜下计数时一个大格的俯视示意图；

图2是实验例中参照实施例1方法检测显微镜下计数时一个大格的俯视示意图。

具体实施方式

下面将结合附图以及具体实施方法来详细说明本发明，在本发明的示意性实施及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。

实施例1

一种悬浮酵母浓度的检测方法，包括以下步骤：

一、制样。

取预定体积待测样液，加入调整剂，所述调整剂中含有可被酵母分解利用的糖分，混合均匀，调整至预定体积，得待检液。具体如下：

1、将样液充分摇匀至肉眼观察为均一的溶液。

2、向干燥的50ml比色管中加入25ml待测样液。

把样液倾注入比色管中，快要达到25ml刻度线时，用胶头滴管滴加，直到液面凹处最低点与25ml刻度线平齐(双眼平视观察)。

3、加入适量糖溶液并用纯水稀释至50ml。

把5-12ml复合糖浆(糖浆浓度为60％，用于酿造啤酒用，其中含可供酵母发酵的葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、麦芽三糖、半乳糖、棉子糖、密二糖等)注入比色管中，再将纯水注入比色管中，快要达到50ml刻度线时，用胶头滴管滴加纯水至刻度，观察方法同步骤2。

4、加盖混合均匀，静置5-10分钟，使酵母由结团状态转为分散状态，再摇匀，避免酵母下沉分布不均匀，即得待检液，其中糖分质量百分浓度为20％。

二、计数。

取上述待检液，注入血球计数板中，显微镜下计数。具体如下：

1、取干燥的血球计数板，放上干燥的盖玻片。

2、用待检液润洗胶头滴管3遍，然后用胶头滴管吸取一定量的待检液。

3、把胶头滴管口轻轻靠在盖玻片边缘，慢慢按压胶头，使待检液渗入并充满血球计数板的计数室而不外溢，盖玻片上不能有液滴。

4、在明视场显微镜下观察计数。

计数规则为：对血球计数板上四角与中间共五个大格中的酵母细胞进行计数，对于压边的酵母细胞只计算相邻两边上的细胞数，对于有出芽的细胞，小于母体1/2的芽体不计数。

5、结果的表述。

实施例2

一种悬浮酵母浓度的检测方法，与实施例1的方法基本相同，区别仅在于：

所选用的调整剂为复合糖浆，待检液糖分质量百分浓度为5％。

实施例3

一种悬浮酵母浓度的检测方法，与实施例1的方法基本相同，区别仅在于：

所选用的调整剂为果葡糖浆，待检液糖分质量百分浓度为20％。

对比例1

一种悬浮酵母浓度的检测方法。

一、制样。

取预定体积待测样液，加入纯水定容到50ml，摇匀，除将调整剂替换为纯水外，其余操作步骤同实施例1，得待检液。

二、计数。

参照实施例1方法进行。

对比例2

一种悬浮酵母浓度的检测方法，与实施例1的方法基本相同，区别仅在于：稀释液既非纯水，亦非糖溶液，而是含2％柠檬酸三钠的次甲基蓝溶液。

实验例

分别按照实施例和对比例的方法制样后进行计数，检测，对比检测结果。

一、直观对比。

注入计数室的悬浮酵母经过数分钟后会全部沉降到计数室的底部，在显微镜下观察时发现：按照对比例方法制备得到得待检液酵母分布有结团的现象，如图1所示，该酵母结团现象的存在会影响酵母计数的精确度。

按照实施例1方法制备得到得待检液酵母没有结团的现象，如图2所示，酵母分布均匀。

二、计数对比。

取不同样品进行悬浮酵母浓度检测，每个样品进行两次检测，以其两次检测结果之差与两次检测结果的平均值之比为均匀度考核指标，即通过如下公式计算：

均匀度＝(第一次检测值-第二次检测值)/﹝(第一次检测值+第二次检测值)/2﹞

结果如下表所示。

表1.每个样品检测结果的均匀度(％)

注：比值越小，表示检测结果的精确度越高，该检测方法越好。

以上对“样液中可利用糖分，处理后待测液可利用糖分”均测量的为样品1，该样品1的初始糖分浓度为16％。

以上糖浓度由手持式糖度计测定得到。

从上述结果中可以看出，本发明的检测方法，通过加入可被酵母分解利用的糖分，能够促使悬浮酵母在溶液中分布更加均匀，从而使得采用血球计数板检测悬浮酵母浓度的结果更加精确。

并且，加入糖分量对分散效果也有影响，当糖分浓度较低时，其分散效果较差。

以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。