一种分离盐酸雷莫司琼和其S型对映异构体的高效液相色谱方法与流程

本发明属于医药检测领域，涉及盐酸雷莫司琼和其s型对映异构体的分离检测。

背景技术：

盐酸雷莫司琼(ramosetronhydrochloride，1盐酸盐)是日本山之内公司研发的强效5-羟色胺(5-ht3)受体拮抗剂，主要用于预防和治疗抗恶性肿瘤药物治疗所引起的恶心、呕吐等消化道症状，以及术后的恶心、呕吐症状。1在吲哚结构和羰基连接处有一个手性中心。据报道，在小鼠母神经细胞中，(r)-型的1对5-ht3受体的亲和性是其对映异构体2[(s)-型]的112倍。临床使用的1为(r)-型，由于对映体在药理学、药动学和毒理学方面可能存在差异，越来越多的药物临床以单一对映体给药。因此，在药物处方工艺研究和贮藏条件选择中，应充分考察异构体杂质产生的影响因素及其质量控制方法。

现有技术主要采用hplc手性柱分离法和毛细管电泳法分离1和2，但是：毛细管电泳法重复性较差；hplc手性柱分离法需要依赖于昂贵的手性柱。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种分离盐酸雷莫司琼和其s型对映异构体的高效液相色谱方法。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种分离盐酸雷莫司琼和其s型对映异构体的高效液相色谱方法，色谱条件如下：

色谱柱为zorbaxsb-苯基柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相为含有10mm(r)-4-苯基-2-恶唑烷酮的乙腈∶0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调至ph3.0)(35∶65)；0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液的配制方法为：称取磷酸二氢钾，加水溶解混匀至所需浓度，用磷酸调至ph3.0，0.45μm滤膜抽滤。

优选地，流速为1.0ml/min。

优选地，检测波长为306nm。

优选地，柱温为30℃。

优选地，进样量为20μl。

有益效果：

本发明提供的方法为常规的hplc色谱分离法，仅需要使用普通的苯基色谱柱即可有效分离盐酸雷莫司琼和其s型对映异构体，重复性好且色谱耗材成本低。

附图说明

图1为实施例1混合对照品溶液hplc分离效果图；

图2为实施例2混合对照品溶液hplc分离效果图；

图3为实施例3混合对照品溶液hplc分离效果图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

实施例1：

一、仪器与试药

lc-20a型高效液相色谱仪(日本shimadzu公司，配有四元泵、在线脱气装置、自动进样器、dad检测器、lcsolution化学工作站)。

盐酸雷莫司琼对照品购自中国食品药品检定研究院，纯度不低于99％；s型对映异构体对照品购自tlcpharmachem.,inc.，纯度不低于99％。

乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾为优级纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为zorbaxsb-苯基柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相为含有10mm(r)-4-苯基-2-恶唑烷酮的乙腈∶0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调至ph3.0)(35∶65)；0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液的配制方法为：称取配方量的磷酸二氢钾，加水至配方体积，溶解混匀，用磷酸调至ph3.0，0.45μm滤膜抽滤；

流速为1.0ml/min；检测波长为306nm；柱温为30℃；进样量为20μl。

2.2溶液配制

盐酸雷莫司琼对照品溶液：精密称取盐酸雷莫司琼对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至100μg/ml；s型对映异构体对照品溶液：精密称取s型对映异构体对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至100μg/ml；

混合对照品溶液：分别精密称取盐酸雷莫司琼对照品、s型对映异构体对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至各自浓度为100μg/ml；

2.3分离效果

取盐酸雷莫司琼对照品溶液、s型对映异构体对照品溶液、混合对照品溶液与空白溶剂，按上述色谱条件分别进样测定，记录色谱图(见图1)。结果显示，在该色谱条件下，盐酸雷莫司琼与s型对映异构体分离度大于2.0，理论板数大于10000。

实施例2：

一、仪器与试药

lc-20a型高效液相色谱仪(日本shimadzu公司，配有四元泵、在线脱气装置、自动进样器、dad检测器、lcsolution化学工作站)。

盐酸雷莫司琼对照品购自中国食品药品检定研究院，纯度不低于99％；s型对映异构体对照品购自tlcpharmachem.,inc.，纯度不低于99％。

乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾为优级纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为zorbaxsb-苯基柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相为含有10mm(2s,3r)-3-氨基-2-羟基-4-苯丁酸的乙腈∶0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调至ph3.0)(35∶65)；0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液的配制方法为：称取配方量的磷酸二氢钾，加水至配方体积，溶解混匀，用磷酸调至ph3.0，0.45μm滤膜抽滤；

流速为1.0ml/min；检测波长为306nm；柱温为30℃；进样量为20μl。

2.2溶液配制

盐酸雷莫司琼对照品溶液：精密称取盐酸雷莫司琼对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至100μg/ml；s型对映异构体对照品溶液：精密称取s型对映异构体对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至100μg/ml；

混合对照品溶液：分别精密称取盐酸雷莫司琼对照品、s型对映异构体对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至各自浓度为100μg/ml；

2.3分离效果

取盐酸雷莫司琼对照品溶液、s型对映异构体对照品溶液、混合对照品溶液与空白溶剂，按上述色谱条件分别进样测定，记录色谱图(见图2)。结果显示，在该色谱条件下，盐酸雷莫司琼与s型对映异构体分离度大于2.0，理论板数大于10000。

实施例3：对比实施例

一、仪器与试药

lc-20a型高效液相色谱仪(日本shimadzu公司，配有四元泵、在线脱气装置、自动进样器、dad检测器、lcsolution化学工作站)。

盐酸雷莫司琼对照品购自中国食品药品检定研究院，纯度不低于99％；s型对映异构体对照品购自tlcpharmachem.,inc.，纯度不低于99％。

乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾为优级纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为zorbaxsb-苯基柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相为乙腈∶0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调至ph3.0)(35∶65)；0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液的配制方法为：称取配方量的磷酸二氢钾，加水至配方体积，溶解混匀，用磷酸调至ph3.0，0.45μm滤膜抽滤；

流速为1.0ml/min；检测波长为306nm；柱温为30℃；进样量为20μl。

2.2溶液配制

盐酸雷莫司琼对照品溶液：精密称取盐酸雷莫司琼对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至100μg/ml；s型对映异构体对照品溶液：精密称取s型对映异构体对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至100μg/ml；

混合对照品溶液：分别精密称取盐酸雷莫司琼对照品、s型对映异构体对照品用35％乙腈水溶液溶解定容至各自浓度为100μg/ml；

2.3分离效果

取盐酸雷莫司琼对照品溶液、s型对映异构体对照品溶液、混合对照品溶液与空白溶剂，按上述色谱条件分别进样测定，记录色谱图(见图3)。结果显示，在该色谱条件下，盐酸雷莫司琼与s型对映异构体无法分离，二者共洗脱。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。