一种依匹哌唑中IMP17含量的测定分析方法与流程

本发明涉及用高效液相色谱-质谱联用仪直接测定出依匹哌唑中7-(4-溴丁氧基)喹啉-2(1h)-酮(以下简称imp17)的含量。此方法能较好的控制原料药及制剂中痕量imp17含量，为患者的健康安全用药提供保障，属于医药
技术领域：
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背景技术：
：依匹哌唑，化学名brexpiprazole。是丹麦灵北与日本大冢研发的首个多巴胺、部分5-ht1a受体激动剂以及5-ht2a受体拮抗剂化合物，被认为是继该公司研发的畅销药物——阿立哌唑之后的又一重磅品种，有更好的疗效和耐受性，可减少患者静坐不能、不安和/或失眠等不良反应。同时，依匹哌唑治疗“与阿尔茨海默型痴呆相关的激越”、在抗抑郁药基础上作为追加疗法治疗“创伤后应激障碍(ptsd)”以及治疗“与躁郁症相关的躁狂发作”的iii期临床研究也正在进行当中。依匹哌唑结构如下：依匹哌唑中含有反应残留的imp17，结构如下：准确定量地测定依匹哌唑中痕量的imp17含量极具挑战性。很难采用气相、液相色谱等对其进行痕量直接测定。目前，只有测定依匹哌唑中常量7-(4-溴丁氧基)喹啉-2(1h)-酮含量的方法采用经典的色谱法,其专一性、灵敏度、方法精密度和重复性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析结果。为了克服原方法的缺陷，本发明采用高效液相色谱-质谱联用仪直接测定依匹哌唑中imp17的含量。该分析方法具有操作简单、专一性好、灵敏极高、重现性好等特点。技术实现要素：如上所述，直接准确定量测定痕量imp17存在各种缺陷。然而,利用imp17具有稳定性强和非常适合反相液相色谱分离的特征，以及在质谱检测器中很容易离子化并具有稳定的适合定量分析的分子结构的特点，可以采用高效液相色谱-质谱联用仪直接测定。除此之外,imp17在质谱检测器有灵敏的吸收这一特征使本方法的灵敏度和专一性大大提高。通过试验发现依匹哌唑在甲醇中有非常好的溶解性。本发明将用甲醇作为稀释剂。本发明涉及一种依匹哌唑中imp17含量的测定分析方法，该方法为直接用高效液相色谱-质谱联用仪测定依匹哌唑中imp17的含量。上述样品配制中用甲醇作为稀释液。上述采用高效液相色谱-质谱联用仪，正离子选择离子模式。该方法包括以下几个步骤：(1)取依匹哌唑原料或制剂粉末，以甲醇溶液作为稀释液制备得到样品溶液；(2)采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸或全氟丁酸水溶液和乙腈，进行梯度洗脱。(3)设置流动相流速为0.3-1.2ml/min，柱温控制在25℃-45℃之间。(4)取步骤(1)的样品溶液2μl，进样，记录质谱总离子流图。(5)采用质谱检测器，离子模式选择正离子，取(1)的样品溶液进样，记录imp17质谱离子流图。本发明采用的技术方案如下：样品前处理：稀释液：采用色谱级的甲醇。imp17标准溶液：用稀释液精密配制187.5ng/ml的imp17溶液。样品溶液：精密称取25mg样品于50ml的容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，进样。本发明使用色谱柱为：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。流速0.3-1.2ml/min。柱温25℃-45℃。流动相a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸或全氟丁酸水溶液，流动相b：乙腈，梯度如下：ab0min90％10％8min10％90％质谱检测器：正离子模式，[m+h]+:296附图说明：附图1：根据本发明实施例1得到的imp17质谱棒图；附图2：根据本发明实施例1得到的imp17标准品质谱总离子流图；附图3：根据本发明实施例2得到的依匹哌唑样品质谱总离子流图；附图4：根据本发明实施例3得到的依匹哌唑样品加样回收率质谱总离子流图。具体实施方式为了更好的理解本发明的技术方案，下面结合本发明的具体实施例作进一步说明，但其不限制于本发明。实施例一仪器与条件：高效液相色谱质谱联用仪：agilent1260infinity，ms检测器。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱流动相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸或全氟丁酸水溶液b：乙腈。梯度如下：0～8.0min，有机相比例由10％变为90％。柱温：45℃。流速：1.0ml/min选择正离子：296进样体积：2μl实验步骤：1)流动相a配制：精密量取1.0ml甲酸溶于1000ml水中，混匀。2)稀释液b：甲醇3)标准溶液c：精密称取约19mgimp17于50ml容量瓶中，加b溶解定容，摇匀，精密量取0.5ml置于另一10ml容量瓶中，加b定容，摇匀，再精密量取1.0ml置于另一100ml容量瓶中，摇匀，即得标准溶液c，进样，记录质谱棒图，见典型图1。记录imp17质谱总离子流图，见典型图2。实施例二仪器与条件：高效液相色谱仪：agilent1260infinity，ms检测器。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱流动相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸或全氟丁酸水溶液b：乙腈。梯度如下：0～8.0min，有机相比例由10％变为90％。柱温：45℃。流速：1.0ml/min选择正离子：296进样体积：2μl实验步骤：1)流动相a配制：精密量取1.0ml甲酸溶于1000ml水中，混匀。2)稀释液b：甲醇3)标准溶液c：精密称取约19mgimp17于100ml容量瓶中，加b溶解定容，摇匀，精密量取0.5ml置于另一10ml容量瓶中，加b定容，摇匀，再精密量取1.0ml置于另一100ml容量瓶中，摇匀，即得标准溶液c。4)样品溶液d:精密称取约25mg依匹哌唑样品置于50ml容量瓶中，加b定容，即得样品溶液d，进样。记录imp17质谱总离子流图，见典型图3。实施例三仪器与条件：高效液相色谱仪：agilent1260infinity，ms检测器。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱流动相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸或全氟丁酸水溶液b：乙腈。梯度如下：0～8.0min，有机相比例由10％变为90％。柱温：45℃。流速：1.0ml/min选择正离子：296进样体积：2μl实验步骤：1)流动相a配制：精密量取1.0ml甲酸溶于1000ml水中，混匀。2)稀释液b：甲醇3)标准溶液c：精密称取约19mgimp17于100ml容量瓶中，加b溶解定容，摇匀，精密量取0.5ml置于另一10ml容量瓶中，加b定容，摇匀，再精密量取1.0ml置于另一100ml容量瓶中，摇匀，即得标准溶液c。4)样品溶液e:精密称取约25mg依匹哌唑样品置于50ml容量瓶中，用标准溶液c溶解并滴定至刻度，混匀，进样。记录imp17质谱总离子流图，见典型图4。当前第1页12