一种肌酐的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及化学发光检测领域，特别设及肌酢的检测方法。
【背景技术】
[0002] 肌酢是肌酸代谢的最终产物，每20克肌肉带血肌酸可产生1毫克肌酢。肌酢主要 由肾小球滤过排出体外，临床上检测肌酢是常用的了解肾功能的主要方法之一，其是评估 肾小球率过率、糖尿病性肾病、肾衰竭W及肾病综合症不可或缺的指标。并且，肌酢还可W 在急性屯、肌梗塞、慢性屯、力衰竭、结肠直肠癌和肌肉萎缩症的临床诊断中作为生物标记物。 因此，建立新的快速、高效、低成本的肌酢分析方法是很有意义的。
[0003] 常规的肌酢检测方法有化ff6法和酶催化法。常规使用的化ff6法是W非特异性 光谱光度测量法为基础的，该方法利用分光光度计对肌酢进行检测，该仪器会导致测量结 果偏高；而酶催化法具有较低的检测灵敏度和较窄的线性范围；近年来还建立了一些检测 方法，如生物传感分析、离子对色谱法、阳离子交换色谱法、毛细管电泳法、液相色谱-质谱 联用技术、气相色谱-质谱联用技术W及反相高效液相色谱法等。但该些方法大部分具有 耗时、仪器昂贵、操作复杂、成本高等缺点，且一些方法也仅仅局限于实验室中的检测分析
[0004] 化学发光分析是一种常用的分析检测方法，具有高灵敏度、线性范围宽、所用仪器 设备简单、操作方便、分析速度快、背景噪声小、价廉等优点。并常与流动注射、电化学、毛细 管电泳等方法联用，已广泛应用于化学、药学、生命科学、环境科学、食品科学和临床医学等 诸多领域。本发明希望研究一种利用化学发光体系检测肌酢的方法。
【发明内容】
[0005] 本发明解决的技术问题在于提供一种肌酢的检测方法，灵敏度高，方法简便。
[0006] 本发明公开了一种肌酢的检测方法，包括W下步骤：
[0007] 将钻离子溶液、过氧化氨溶液、碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液及待测肌酢溶液在流动 注射分析装置中混合反应，检测得到反应产物的发光强度；
[000引根据预定的标准曲线和所述反应产物的发光强度，得到待测肌酢溶液中的肌酢含 量。
[0009] 优选的，所述预定的标准曲线的获得方法为：
[0010] 将钻离子溶液，过氧化氨溶液、碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液及系列标准浓度的肌酢 溶液在流动注射分析装置中混合反应，分别检测得到系列反应产物的发光强度；
[0011] 根据肌酢溶液的标准浓度与发光强度，得到标准曲线。
[0012] 优选的，所述待测肌酢溶液中的肌酢浓度为IX 1(T?3X
[0013] 优选的，所述钻离子溶液中的钻离子浓度为0. 005?0. 2mM。
[0014] 优选的，所述过氧化氨溶液的浓度为0. ImM?5. OmM。
[0015] 优选的，所述缓冲液的抑值为7. 4?12. 5。
[0016] 优选的，所述钻离子溶液中钻离子浓度为0. 02mM，过氧化氨溶液的浓度为ImM，碳 酸钢/碳酸氨钢缓冲液抑9. 5。
[0017] 与现有技术相比，本发明肌酢的检测方法为；将钻离子溶液、过氧化氨溶液、碳酸 钢/碳酸氨钢缓冲液及待测肌酢溶液在流动注射分析装置中混合反应，检测得到反应产物 的发光强度；根据预定的标准曲线，得到待测肌酢溶液中的肌酢含量。本发明利用钻离子催 化过氧化氨氧化肌酢，导致发光。由于该方法的发光物为肌酢本身反应的产物，而且没有肌 酢存在时钻离子和过氧化氨反应产生的背景信号较低，因此，本发明检测方法的灵敏度高。 其次，本发明利用了流动注射分析装置，保证了混合过程与反应时间的高度重现性，在非平 衡状态下高效的完成率试样的在线处理与测定，从而使得检测快捷方便。
【附图说明】
[0018] 图1为流动注射-化学发光分析平台的结构示意图；
[0019] 图2为化学发光强度-过氧化氨溶液浓度曲线图；
[0020] 图3为化学发光强度-钻离子溶液浓度曲线图；
[0021] 图4为化学发光强度-pH曲线图；
[0022] 图5为实施例1得到的标准曲线。
【具体实施方式】
[0023] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是 应当理解，该些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的 限制。
[0024] 本发明实施例公开了一种肌酢的检测方法，包括W下步骤：
[0025] 将钻离子溶液、过氧化氨溶液、碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液及待测肌酢溶液在流动 注射分析装置中混合反应，检测得到反应产物的发光强度；
[0026] 根据预定的标准曲线和所述反应产物的发光强度，得到待测肌酢溶液中的肌酢含 量。
[0027] 本发明采用流动注射与化学发光相结合，构建了肌酢的检测方法。本发明发灵敏 度高，选择性好，仪器设备简单，操作简单，分析速度快。本发明采用的流动注射分析装置， 保证了混合过程与反应时间的高度重现性，在非平衡状态下高效的完成率试样的在线处理 与测定，从而使得检测快捷方便。所述流动注射装置包括；样品流通通管路A、B、C，A处添 加钻离子溶液，B处添加过氧化氨溶液及缓冲液，C处添加水；D为流动注射累，E为进样阀； F为化学发光检测仪；G为废液池；H为计算机控制系统。钻离子溶液，过氧化氨溶液和待 测肌酢溶液在F处反应，发光，检测得到反应产物的发光强度。所述钻离子溶液中的钻离 子浓度优选为0. 005?0. 2mM，更优选为0. 01?0. ImM。所述过氧化氨溶液的浓度优选为 0. ImM?5. OmM，更优选为0. 9mM?3. OmM。所述缓冲液的抑值优选为7. 4?12. 5,更优选 为8?11。
[002引得到所述反应物的发光强度后，根据预定的标准曲线和所述反应产物的发光强 度，得到待测肌酢溶液中的肌酢含量。
[0029] 所述预定的标准曲线的获得方法为：
[0030] 将钻离子水溶液，过氧化氨溶液、碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液及系列标准浓度的肌 酢溶液在流动注射分析装置中混合反应，分别检测得到系列反应产物的发光强度；
[0031] 根据肌酢溶液的标准浓度与发光强度，得到标准曲线。
[0032] 在所述方法中，所述钻离子溶液中的钻离子浓度优选为0. 005?0. 2mM，更优选为 0. 01?0. ImM。所述过氧化氨溶液的浓度优选为0. ImM?5. OmM，更优选为0. 9mM?3. OmM。 所述缓冲液的抑值优选为7. 4?12. 5,更优选为8?11。
[0033] 优选的对钻离子溶液的浓度，过氧化氨溶液浓度及碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液的pH 进行筛选。具体为；将过氧化氨溶液浓度、碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液的抑值及肌酢溶液的 浓度确定为固定值，将钻离子溶液的浓度在0. 005?0. 6mM范围内取值，根据钻离子浓度和 发光强度的关系，确定发光强度最强处的钻离子浓度为最佳值。
[0034] 将钻离子溶液的浓度、碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液的抑值及肌酢溶液的浓度确定为 固定值，将过氧化氨溶液浓度在0. ImM?5. OmM范围内取值，根据过氧化氨溶液浓度和发光 强度的关系，确定发光强度最强处的过氧化氨溶液浓度为最佳值。
[0035] 将钻离子溶液的浓度、过氧化氨溶液浓度及肌酢溶液的浓度确定为固定值，将碳 酸钢/碳酸氨钢缓冲液的抑值在7. 4?12. 5范围内取值，根据碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液 的抑值和发光强度的关系，确定发光强度最强处的碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液的抑值为最 佳值。
[0036] 经过筛选后，得到的钻离子水溶液中钻离子浓度为0. 02mM，过氧化氨溶液的浓度 为ImM，碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液抑9. 5。
[0037] 将筛选后的最佳浓度的钻离子水溶液，过氧化氨溶液、碳酸钢/碳酸氨钢缓冲液 及标准浓度的肌酢溶液在流动注射分析装置中混合反应，检测得到反应产物的发光强度； 根据肌酢溶液的标准浓度与发光强度，得