石营蒲105g、胆南星70g、当归140g、僵蚕105g、六神曲70g、郁金 7〇g、甘草7〇g、制白附子35g，共制成1000粒。
[0107] 2、制备方法；W上十六味，僵蚕、六神曲粉碎成细粉，过筛，备用；其余黄茂等十四 味加水煎煮H次，第一次2小时，第二次1. 5小时，第H次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压 浓缩至相对密度为1.36(6(TC)的稠膏，加入上述细粉，混合均匀，真空干燥，粉碎成细粉， 用80%己醇适量制粒，在7(TC干燥，装入胶囊，即得。
[0108] 逼施例2液相色谱法检测天麻素
[0109] 一、方法学研究
[0110] 1、测定波长的选择：
[011。 称取天麻素对照品适量，W己膳-0. 05%磯酸溶液（3 : 97)混合液溶解，在200? 900nm范围内进行光谱扫描，结果天麻素在220nm波长处有最大吸收，与中国药典2010年版 一致，故检测波长选定为220nm。
[0112] 2、色谱条件与系统适用性试验：
[0113] W十八焼基娃焼键合娃胶(耐水型）为填充剂；流动相由己膳和重量体积比为 0. 05%磯酸水溶液构成；流速为0. 6ml/min ;检测波长为220皿。对流动相中己膳和0. 05% 磯酸水溶液的体积比进行了考察，结果见表1。
[0114] 表1流动相比例考察结果 [011 引
【主权项】
1. 一种治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法，所述药物组 合物由以下十六味药材制备而成： 黄芪、党参、丹参、柴胡、酸枣仁、远志、天麻、钩藤、石菖蒲、胆南星、当归、僵蚕、六神曲、 郁金、甘草、制白附子； 其特征在于：所述检测方法包括采用液相色谱法检测天麻素，所述液相色谱的条件包 括： 填充剂为耐水型十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相为混合液I ;所述混合液I由体积比为1-20 : 99-80的A液、B液组成；所述A 液选自乙腈、甲醇或乙腈-甲醇混合液，所述B液选自重量体积百分浓度0. 01%-1. 0%的磷 酸水溶液或重量体积百分浓度〇. 01%-0. 5%的醋酸水溶液； 流速为 〇· 5ml/min_l· Oml/min，优选为 0· 6ml/min ; 柱温为20-40°C，优选为30°C ; 检测器为紫外检测器，检测波长220nm。
2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述混合液I中，A液为乙腈，B液为 重量体积百分浓度〇. 05%磷酸水溶液，A液、B液的体积比为3 : 97。
3. 根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法检测天麻素，包 括如下步骤： (1) 色谱条件与系统适用性试验 以耐水型十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；在所述色谱条件下，理论板数以天麻素峰 计算应不低于5000 ; (2) 对照品溶液的制备 取天麻素对照品，精密称定，加流动相制成每Iml含50 μ g天麻素的溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备 取所述药物组合物约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量， 水浴回流40分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 l〇ml，蒸干，残渣加流动相适量使溶解，转移至IOml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤 过，取续滤液，即得； (4) 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1〇μ 1，注入效液相色谱仪，测定，即得。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括采 用液相色谱法检测黄芪甲苷，所述液相色谱的条件包括： 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶 流动相为混合液II ;所述混合液II由体积比为25-45 : 75-55的C液和D液组成； 所述C液选自乙腈、甲醇或乙腈-甲醇混合液，所述D液选自水、或重量体积百分浓度 0. 05%-2. 0%的无机酸或有机酸的水溶液； 检测器为蒸发光散射检测器检； 漂移管温度为65-130°C，优选为IKTC。
5. 根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述混合液II中，C液为乙腈，D液 为水，C液和D液的体积比为35 : 65。
6. 根据权利要求4或5所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法检测黄芪甲苷， 包括如下步骤： (1) 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；在所述色谱条件下，理论板数以黄芪甲苷峰计算 应不低于4000 ; (2) 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. 2mg黄芪甲苷的溶液，即得； (3) 供试品溶液的制备 取所述药物组合物约5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，用甲醇适量 洗涤滤纸及滤渣，合并滤液，蒸干，残渣加水30ml分次使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取 4次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次30ml，弃去氨液，再用水洗涤3次， 每次30ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (4) 测定 分别精密吸取对照品溶液10 μ 1、20 μ 1，供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，用 外标两点法对数方程计算，即得。
7. 根据权利要求1至6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括采 用薄层色谱法鉴定丹参素钠； 所述薄层色谱条件包括：采用硅胶G薄层板和体积比为3-7 :1-4:0. 5-2,优选为 5 : 2 : 1的溶剂E、溶剂F和溶剂G组成的展开剂；所述溶剂E选自氯仿、乙酸丁酯、正丁 醇、二氯甲烷或乙醚，所述溶剂F选自乙酸乙酯、甲酸甲酯、丙酮、乙醇或甲醇，所述溶剂G选 自水、甲酸甲酯、冰醋酸或甲酸。
8. 根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述展开剂中，溶剂E为氯仿，溶剂F 为丙酮，溶剂G为甲酸，溶剂E、溶剂F、溶剂G的体积比5 : 2 : 1。
9. 根据权利要求7或8所述的检测方法，其特征在于，所述薄层色谱法鉴定丹参素钠， 包括如下步骤： (1) 取所述药物组合物，加水20-40ml，密塞，超声处理20-60分钟，取上清液加稀盐 酸调节PH值至2,加选自乙酸乙酯、石油醚和乙醚中的一种溶剂振摇提取1-4次，每次 10-30ml，合并提取液，蒸干，残渣加选自甲醇、乙醇、乙腈、石油醚和乙醚中的一种溶剂使溶 解，作为供试品溶液； 优选的，取所述药物组合物，加水25ml，密塞，超声处理30分钟，取上清液加稀盐酸调 节pH值至2,加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解， 作为供试品溶液； (2) 另取丹参素钠对照品，加甲醇溶解作为对照品溶液； (3) 吸取上述两种溶液各2-10 μ 1，优选为5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，采用所 述展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视。
10. 根据权利要求1至9中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述药物组合物由以 下十六味药材制备而成： 黄芪100-200重量份、党参100-200重量份、丹参100-200重量份、柴胡30-120重量份、 酸枣仁70-150重量份、远志30-120重量份、天麻70-150重量份、钩藤70-150重量份、石菖 蒲70-150重量份、胆南星30-120重量份、当归100-200重量份、僵蚕50-200重量份、六神 曲30-120重量份、郁金30-120重量份、甘草30-120重量份、制白附子10-60重量份； 优选的，所述药物组合物由以下十六味药材制备而成：黄芪140重量份、党参140重量 份、丹参140重量份、柴胡70重量份、酸麥仁105重量份、远志70重量份、天麻105重量份、 钩藤105重量份、石菖蒲105重量份、胆南星70重量份、当归140重量份、僵蚕105重量份、 六神曲70重量份、郁金70重量份、甘草70重量份、制白附子35重量份； 通过如下方法制备： 以上十六味，僵蚕、六神曲粉碎成细粉，过筛，备用；其余十四味加水煎煮三次，第一次 2小时，第二次1. 5小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60°C下相对密度 为1. 36的稠膏，加入上述细粉，混合均匀，真空干燥，粉碎成细粉，用80%乙醇适量制粒，在 70°C干燥，装入胶囊，即得。
【专利摘要】本发明提供一种用于治疗癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的药物组合物痫愈的检测方法，该检测方法包括采用液相色谱法检测所述药物组合物中天麻素的含量；还可以包括采用高效液相色谱法检测所述药物组合物中黄芪甲苷的含量，以及采用薄层色谱法检测所述药物组合物中丹参素钠。本发明所述的检测方法，有助于更加准确地控制所述药物组合物质量，使所述药物组合物质量达到稳定、可控、高效及安全，克服现有技术的不足，为更好的地满足医疗的需要提供有力保证。
【IPC分类】A61P21-02, A61P25-08, G01N30-02, A61K9-48, A61K36-9066, G01N30-90
【公开号】CN104569166
【申请号】CN201310486071
【发明人】胡小虎, 吕慧锋
【申请人】西安千禾药业有限责任公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月16日