一种Cortactin蛋白的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药诊断试剂领域，具体涉及一种涉及Cortactin蛋白的应用，特别 是涉及Cortactin蛋白作为乳腺癌转移EMT相关标志物用于制备乳腺癌转移诊断试剂。
【背景技术】
[0002] 乳腺癌是女性第二大发病率的恶性肿瘤，乳腺癌转移是致死的主要原因。通常， 乳腺癌转移是不可治愈的。在临床中，乳腺癌转移的诊断多需要借助影像学检查或医生触 诊，而在乳腺癌转移的早期，很难使用现有的设备和方法进行诊断，现有技术下也没有特异 性和敏感性均达到要求的诊断标志物。目前临床使用的乳腺癌分子标志物如ER、PR、Her2、 Ki67、P53、CK5/6、T0PII等在乳腺癌早期和乳腺癌转移阶段的表达均未有显著差异。因此， 现有的乳腺癌诊断标志物并不能诊断或预测乳腺癌转移的发生和风险。
[0003] 皮细胞-间充质转化（EMT)，是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细 胞的生物学过程。在胚胎发育、慢性炎症、组织重建、癌症转移和多种纤维化疾病中发挥了 重要作用，其主要的特征有细胞黏附分子（如E-钙黏蛋白）表达的减少、细胞角蛋白细胞 骨架转化为波形蛋白（Vimentin)为主的细胞骨架及形态上具有间充质细胞的特征等。乳 腺癌转移与EMT的发生机制与微环境密不可分，其特异性标志物对于临床有着极高的预后 和治疗价值。但是目前，乳腺癌EMT研宄的证据和手段仍不完整，不具备寻找新的EMT靶点 的条件。
【发明内容】
[0004] 本发明中的Cortactin是指皮层肌动蛋白结合蛋白，是一种微丝骨架结合蛋白。 可作为Src激酶直接磷酸化的底物受到酪氨酸磷酸化信号通路的调控，从而成为信号通路 与细胞骨架重要的联系分子。Cortactin与肌动蛋白纤丝的侧面相结合，并直接参与皮层 细胞骨架的组建，它可以通过影响细胞运动前沿微丝骨架重组从而提高细胞迀移的能力。 (Weaver, A. Μ. , Cortactin and tumor invasiveness. Cancer Lett, 2008. 265 (2):p. 14.)本 发明的目的是提供一种Cortactin蛋白在制备乳腺癌转移诊断试剂中的应用，为乳腺癌复 发转移风险的评估提供有力的工具。
[0005] 进一步的，上述应用中，Cortactin蛋白可作为乳腺癌转移EMT相关标志物，用于 诊断与EMT相关的乳腺癌转移。
[0006] 进一步的，上述应用中，Cortactin蛋白可以作为乳腺癌转移诊断试剂反应底物， 用于诊断与EMT相关的乳腺癌转移。本发明所述的诊断检测可以采用常规的技术方法，如 利用抗原抗体反应的原理制备Cortactin蛋白抗体，利用抗体检测人体内Cortactin蛋白 水平，或者利用Cortactin蛋白检测人体内Cortactin蛋白抗体的水平。本发明所述的诊 断检测样本可以选择血浆、血清或体液等。
[0007] 本发明是建立在人乳腺癌细胞株在活体内自然发生的EMT过程上。本发明以具有 人源性乳腺微环境的活体动物模型为基础进行实验，该动物模型具有人源性乳腺微环境， 能够较好的模拟临床。通过在人源性乳腺微环境的活体动物模型中提取背景高度一致的 细胞系进行高通量蛋白组学对比实验，发现Cortactin蛋白可用作乳腺癌转移EMT相关标 志物，然后使用细胞学、分子生物学、动物模型、以及临床标本检测等方法，证明Cortactin 可以调节乳腺癌细胞株EMT的状态，Cortactin的调节可以影响乳腺癌细胞株的转移效率， Cortactin表达与EMT相关的乳腺癌转移高度相关。
[0008] 本发明通过对乳腺癌组织的石蜡标本进行蛋白Cortactin的检测，可对乳腺癌患 者转移风险进行预测，Cortactin蛋白的下调和缺失与乳腺癌转移高风险相关；目前临床 上尚无成熟的乳腺癌转移相关蛋白标志物的检测，Cortactin蛋白的临床免疫组化检测将 为乳腺癌复发转移风险的评估提供有力的工具。
【附图说明】
[0009] 图1为MDA-MB-231-br银染二维凝胶电泳图。
[0010] 图2为MDA-MB-231银染二维凝胶电泳图。
[0011] 图3为Cortactin表达进行下调对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的细胞学形态影 响。
【具体实施方式】
[0012] 以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
[0013] 在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理 解的含义。
[0014] 下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只 是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
[0015] 在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
[0016] 下面结合具体实施例对本发明进一步说明。
[0017] 实施例1 创建具有人源性微环境的乳腺癌小鼠模型（参照文献Wang J，Xia TS，Liu XA，Ding Qj Du Qj Yin Hj Wang S. A novel orthotopic and metastatic mouse model of breast cancer in human mammary microenvironment. Breast Cancer Res Treat. 2010Apr ； 120 (2) : 337-44. PMID: 19350386.公开的方法造模）。在移植正常人源性乳腺组织中接种人 乳腺癌细胞，提高原位成瘤率，检测并收集对侧人源性组织中的转移乳腺癌细胞及瘤组织。 用于乳腺癌EMT相关转移蛋白标志物的鉴定和提取。造模结果如表1所示： 表1病理学检查MDA-MB-231的原位成瘤和转移成瘤情况
【主权项】
1. 一种Cortactin蛋白的应用，其特征在于将Cortactin蛋白用于制备乳腺癌转移诊 断试剂。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于Cortactin蛋白可作为乳腺癌转移EMT相关 标志物，用于诊断与EMT相关的乳腺癌转移。
3. 如权利要求1所述的应用，其特征在于Cortactin蛋白作为乳腺癌转移诊断试剂反 应底物用于制备乳腺癌转移诊断试剂。
【专利摘要】本发明公开了一种Cortactin蛋白的应用，将Cortactin蛋白用于制备乳腺癌转移诊断试剂。Cortactin蛋白可作为乳腺癌转移EMT相关标志物，用于诊断与EMT相关的乳腺癌转移。本发明通过在人源性乳腺微环境的活体动物模型中提取背景高度一致的细胞系进行高通量蛋白组学对比实验，发现Cortactin蛋白可用作乳腺癌转移EMT相关标志物，使用细胞学、分子生物学、动物模型、以及临床标本检测等方法，证明Cortactin可以调节乳腺癌细胞株EMT的状态，Cortactin的调节可以影响乳腺癌细胞株的转移效率，Cortactin表达与EMT相关的乳腺癌转移高度相关。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN104655856
【申请号】CN201510066650
【发明人】王水, 查小明, 夏添松, 梁梦迪
【申请人】南京医科大学第一附属医院
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月9日