一种大米中205种农药残留量的检测方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及分析化学、食品安全领域，具体地说，是一种大米中农药残留量的检测 方法。
【背景技术】：
[0002] 随着农业生产中农药应用的增加，人们逐渐发现其在植物内的残留，可通过植物 源食品传递给人类。因此，农药在农产品中的残留问题给人们身体健康带来了较大的隐患，
[0003] 随着全球经济一体化和食品贸易国际化，食品安全已成为一个世界性的挑战和全 球重要的公共卫生问题。植物性食品安全已成为全世界关注的焦点，其中农药残留问题是 影响植物性食品安全的最主要农药。我国是大米出口国，每年出口大米200多万吨，主要出 口日本、韩国和非洲一些国家。随着人们的食品安全意识的提高和技术贸易壁垒的需要，各 国对农产品中农药残留限制越来越严，要求检验的项目越来越多，方法的检测低限要求越 来越高。以出口大米为例，日本规定的输日大米农残检验项目逐年增加。
[0004] 目前，有关农药残留检测我国国家标准检测方法共有76个，涉及502种化学物质， 可以用于出口农产品检测的方法仅有16个，涉及检测项目50项，其余60个方法已不适用。 行业标准检测方法有305个，涉及检测项目338种化学物质，多为单残留分析方法，远远不 能满足出口大米农残检验的实际需要。因此，急需建立一套大米中多类农药残留集成化检 测方法。
【发明内容】
：
[0005] 本发明的目的是克服现有不足问题，提供一种大米中205种农药残留量的检测方 法，液相色谱/串联质谱法检测大米中205种农药残留量的方法，可方便、准确、高效地同时 检测大米中205种农药残留量。
[0006] 本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种大米中205种农药残留量的检 测方法，按照下述步骤及物质比例进行检测：
[0007] 1、样品提取：
[0008] 5g(精确到0.0 lg)大米样品置于50mL离心管中，加入10mL水，加盖，涡旋混合1 分钟，再向离心管中乙腈（〇. 1 %乙酸）15mL，涡旋1分钟，之后加入6g无水硫酸镁与1. 5g 醋酸钠，剧烈振摇20s，使块状结晶充分散开。4000转/分的标准转速离心5分钟；
[0009] 2、样品净化：
[0010] 取离心后的上清液中取8mL上层溶液，并置于15mL的离心管中，该离心管中之前 已经添加了 PSA400mg，无水硫酸镁1200mg，C18400mg，涡旋混合15min，4000转/分的标准 转速离心5分钟；
[0011] 3、液相色谱-质谱/质谱仪测定：
[0012] 按照液相色谱一质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，质谱分离采用在正离 子模式下进行母离子全扫描，再对其子离子进行全扫描；通过被测样品的质谱和相关信息， 得到其定性和定量结果；定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度 允许偏差不超过规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。定量测定时采用标准曲 线法。
[0013] 作为优选，在步骤3中所述液相色谱分析条件为：
[0014] 色谱柱：反相C18色谱柱
[0015] 流动相A :5ml (1M甲酸胺溶液）+895ml二次水+100ml甲醇；
[0016] 流动相B :5ml (1M甲酸胺溶液）+95ml二次水+900ml甲醇；梯度洗脱。
[0017]柱温：40°C
[0018]流速：0? 4mL/min
[0019]进样量：10uL
[0020] 作为优选，所述反相 C18 柱为 Phenomenex Synergi 2. 5 u Fusion-RP C18100A 50X2. 0mm(i. d)。
[0021] 作为优选，所述梯度洗脱程序为：
[0022] 0~1分钟，流动相A100 %，流动相B 0 % ;
[0023]1~15分钟，流动相A100~0%，流动相B 0~100%;
[0024]15~18分钟，流动相A 0 %，流动相B 100 %;
[0025] 18. 01，流动相 A 100%，流动相 B 0% ?
[0026]18. 01~20分钟，流动相A100%，流动相B0%?
[0027] 作为优选，在步骤3中所述质谱条件为：
[0028] a)离子源：电喷雾离子源
[0029] b)扫描方式：正离子扫描
[0030] c)检测方式：多反应监测（MRM)
[0031] d)离子化电压 IS:+5500V :5500. 00V
[0032] e)雾化气（GS1) :55. OOPsi
[0033] f)辅助气（GS2) :60.0 OL/min
[0034] g)气帘气（CUR) :35. OOPsi
[0035] h)离子源温度（TEM) :550°C
[0036] i)分别设定母离子、子离子、去簇电压（DP)、碰撞室入口电压（EP)、碰撞室
[0037] 出口电压（CXP)、碰撞气能量（CE)。
[0038] 作为优选，在步骤3中标准工作溶液的配置方法为：农药混合标准溶液自A组至K 组共分10组，见表1,每一组中每种农药标准品的浓度均为100 u g/mL乙腈溶液：
[0039] 表1205种农药标准溶液
[0040]
【主权项】
1. 一种大米中205种农药残留量的检测方法，其特征在于：按照下述步骤及物质比例 进行检测： (1) 样品提取： 将5g大米样品置于50mL离心管中，加入10mL水，加盖，涡旋混合1分钟，再向离心管 中加含0. 1 %乙酸的乙腈5mL，涡旋1分钟，之后加入6g无水硫酸镁与1. 5g醋酸钠，剧烈振 摇20s，使块状结晶充分散开，4000转/分的标准转速离心5分钟； (2)样品净化： 取离心后的上清液中取8mL上层溶液,并置于15mL的离心管中，该离心管中之前已经 添加了PSA400mg，无水硫酸镁1200mg，C18 400mg，涡旋混合15min，4000转/分的标准转速 离心5分钟； (3) 液相色谱-质谱/质谱仪测定： 按照液相色谱一质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，质谱分离采用在正离子模 式下进行母离子全扫描，再对其子离子进行全扫描；通过被测样品的质谱和相关信息，得到 其定性和定量结果；定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许 偏差不超过规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物；定量测定时采用标准曲线法。
2. 根据权利要求1所述的一种大米中205种农药残留量的检测方法，其特征在于：所 述步骤（3)中液相色谱分析条件为： 色谱柱：反相C18色谱柱 流动相A:5ml(1M甲酸胺溶液）+895ml二次水+100ml甲醇； 流动相B:5ml(1M甲酸胺溶液）+95ml二次水+900ml甲醇；梯度洗脱； 柱温：40°C流速：〇? 4mL/min 进样量：10iiL。
3. 根据权利要求2所述的一种大米中205种农药残留量的检测方法，其特征在于：所 述步骤（3)中液相色谱分析条件为：反相C18色谱柱为作为优选，所述反相C18色谱柱为 PhenomenexSynergi2. 5uFusion-RPC18 100A50X2.0mm(i.d)。
4. 根据权利要求2所述的一种大米中205种农药残留量的检测方法，其特征在于：所 述步骤（3)中液相色谱分析条件为：梯度洗脱的梯度变化为： 0~1分钟，流动相A100 %，流动相B 0 % ; 1~15分钟，流动相A100~0%，流动相B 0~100% ; 15~18分钟，流动相A 0%，流动相B 100% ; 18.01分钟，流动相A 100%，流动相B 0% ; 18. 01~20分钟，流动相A 100%，流动相B 0%。
5. 根据权利要求1所述的一种大米中205种农药残留量的检测方法，其特征在于：步 骤（3)中所述质谱条件为： 离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描 检测方式：多反应监测（MRM) 离子化电压IS:+5500V:5500. 00V 雾化气（GS1) :55.OOPsi辅助气（GS2) :60.OOL/min 气帘气（CUR) :35.OOPsi 离子源温度（TEM) :550°C 分别设定母离子、子离子、去簇电压（DP)、碰撞室入口电压（EP)、碰撞室出口电压 (CXP)、碰撞气能量（CE)。
6.根据权利要求1所述的一种大米中205种农药残留量的检测方法，其特征在于：所 述步骤（3)中标准工作溶液的配置方法为： 农药混合标准溶液自A组至K组共分10组，见表1，每一组中每种农药标准品的浓度均 为100iiL/mL乙腈溶液： 表1 205种农药标准溶液 表1 205种农药标准溶液
混合标准储备液：从每组农药混合标准溶液中各取10yL于一个lml棕色安瓶中，加 900yL乙腈，置于-18°C冰箱中保存；205种农药的浓度相当于1yg/mL; 标准工作溶液：取混合标准储备液0.2mL用甲醇定容至lOmL容量瓶中，再根据需要用 乙腈将混合标准储备液逐级稀释；逐级稀释浓度为：〇.lng/mL，0. 25ng/mL，0. 5ng/mL，2ng/ mL,5ng/mL,lOng/mL,15ng/mL,20ng/mL〇
7.根据权利要求1-5任一所述的一种大米中205种农药残留量的检测方法，其特征在 于： 所述205种农药包括下表2至少一种农药： 表2 205种农药
CN104698114A 权利要求书 9/12页
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【专利摘要】本发明涉及分析化学、食品安全领域。一种大米中205种农药残留量的检测方法，该方法样品经样品乙腈提取，提取液经过QuEChERS方法净化后，采用色谱柱:Phenomenex Synergi2.5 Fusion-RP C18 100A50×2.0mm（i.d）分析柱，以甲醇－甲酸铵水溶液为流动相，梯度洗脱，电喷雾、正离子扫描模式分离与检测205种农药。通过对质谱条件的一系列优化，兼顾各成分的灵敏度，建立了最佳质谱分析条件。205种农药检出限均低于10μg/kg，205种农药的回收率范围均在50%~130%以内。方法检测限、回收率和精密度等技术指标满足国内外对大米中农药残留量检测的有关要求。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104698114
【申请号】CN201410585638
【发明人】陈溪, 董伟峰, 崔晗
【申请人】陈溪, 董伟峰, 崔晗
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2014年10月28日