用于测量非稀释类型免疫层析法试剂中的样品的添加剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫层析法（免疫色谱法，immunochromatographicmethod)。
【背景技术】
[0002] 在临床检查领域，使用需要简单操作和短的测量时间并且即使在定量的情况下能 够实现以小的廉价装置测量的免疫层析法的测量试剂极为普遍。为了进一步改善简单性和 快捷性，对于开发允许直接使用血液样本（全血、血清或血浆）作为样品同时没有预处理如 稀释的免疫层析法的需求日益增加。
[0003] 然而，即使在利用以血液样本可以直接用作样品的方式设计的测量系统的免疫层 析法的情况下，如果血液样本中的被分析物的浓度足够高而超过测量系统定量的上限，则 必须使用血液样本的稀释样品。然而，就直接使用血液样本作为样品的情况和使用稀释的 血液样本作为样品的情况而言，测量系统中这两种样品的行为从未被充分研宄过。
[0004] 专利文献1公开了重均分子量为2000至9000的非离子型水溶性聚合物用作反应 加速剂，其充当免疫层析法中的样本稀释液的添加剂。在该文献中描述了，如果重均分子 量大于9000并且测试样本中非离子型水溶性聚合物的浓度增加以获得足够的反应加速效 果，则测试溶液铺展性的劣化会延长在检测位点获得恒定显色所需的时间或者在测试条之 间标记体的检测强度方面会发生变化。
[0005] 引用列表
[0006] 专利文献
[0007] 专利文献1:日本临时公开专利公开号2004-233127
【发明内容】
[0008] 技术问题
[0009] 本发明的目的是提供一种免疫测定方法，所述方法降低当血液样本（全血、血清 或血浆）被稀释并在设计为使用血液样本直接作为样品而无预处理如稀释的免疫层析法 中用作样品时引起的与理论值（下文也称为参照值或基准值）的偏差，并且本发明的目的 还在于提供用于该方法的试剂。
[0010] 问题的解决方案
[0011] 本发明的发明人发现，在设计为使用血液样本（全血、血清或血浆）直接作为样品 的免疫层析法（下文也称为非稀释方法）中，当被分析物处于超过测量系统的定量的上限 的高浓度时并且将血液样本稀释并用作样品，样品中被分析物的测量值可能偏离理论值。 作为对于减少这种偏差的方法的深入研宄的结果，本发明的发明人发现，在非稀释方法中 在测量稀释的血液样本时，当在羟乙基淀粉存在下进行测量时，即使将稀释的血液样本用 作用于测量的样品，也可以减少与理论值的偏差，由此完成了本发明。
[0012] 本发明具有以下构成。
[0013] [1]一种进行血液样本的免疫层析的方法，所述方法使用免疫层析装置，所述免疫 层析装置装配有（1)样品垫和（2)具有被固定的能够特异结合至被分析物的组分的膜，所 述样品垫和膜以自上游的（1)和（2)的顺序布置（配置或排列，arrange)，其中羟乙基淀粉 存在于测量系统中。
[0014] [2] [1]所述的进行免疫层析的方法，其中血液样本是全血、血清或血浆。
[0015] [3] [1]或[2]所述的方法，其中所述免疫层析装置还包括（3)缀合物垫 (conjugatepad)，所述缀合物垫以自上游的（1)、（3)和（2)的顺序布置。
[0016] [4] [1]至[3]所述的进行免疫层析的方法，其中导致羟乙基淀粉存在于测量系统 中的方式（手段或方法，means)是在（1)样品垫、（2)具有被固定的能够特异结合至被分析 物的组分的膜、和（3)缀合物垫、以及（5)血液样本稀释液中的任意一个或多个中包含羟乙 基淀粉。
[0017] [5] -种用于免疫层析的试剂，其中免疫层析装置包括（1)样品垫和（2)其上固 定有能够特异结合至被分析物的组分的膜，所述样品垫和所述其上固定有能够特异结合至 被分析物的组分的膜以自上游的（1)和（2)的顺序布置，并且羟乙基淀粉被包含在（1)和 (2)中的一个或多个中。
[0018] [6]用于免疫层析的试剂，其中所述免疫层析装置还包括（3)缀合物垫，所述缀合 物垫以自上游的（1)、（3)和（2)的顺序布置，并且其中羟乙基淀粉被包含在（1)至（3)中 的一个或多个中。
[0019] [7] -种用于免疫层析的血液样本稀释液，所述血液样本稀释液包含羟乙基淀粉。
[0020] 发明的有益效果
[0021] 本发明提供的免疫层析法，即使稀释的血液样本在非稀释方法中用作用于测量的 样品，也可以抑制测量值与理论值的偏差并且防止准确性的降低。
[0022] 因此，即使样品中的被分析物处于超过测量系统定量的上限的高浓度并且稀释的 血液样本用作样品，也可以通过使用本发明的免疫层析法进行准确测量。
[0023] 附图简述
[0024] [图1]图1是本发明免疫层析装置的一种形式的示意图。
[0025] [图2]图2是显示参考方法的测量结果与实施例3的测量结果或比较例2的测量 结果之间的相关性的示意图。
【具体实施方式】
[0026] 在本发明中使用的羟乙基淀粉（化学名称：淀粉，2-羟乙基醚，下文也称为HES) 是可以通过水解支链淀粉（其是高度支化的玉米淀粉组分），接着进行羟乙基化获得的高 聚合物的糖化合物。该糖化合物在葡萄糖分子C4和C1之间具有糖苷键（a-1，4-糖苷键） 以形成主链，并且还在C6和C1之间具有糖苷键（a-1，6-糖苷键）以形成支链。葡萄糖分 子的C2或C6的羟基基团被羟乙基基团取代。
[0027] HES的性质由分子量、轻乙基基团的取代度、分散度（分子量分布的程度）、C2/C6 比（被羟乙基基团取代的C2和C6之间的比例）等单独或彼此组合地表示。例如，当分子量 为70, 000且羟乙基基团的取代度是0. 5时，所述性质可以由"HES70000/0. 5"表示，等等。
[0028] 尽管HES可以以常规方式从玉米淀粉制备，但是含HES的灌输溶液（输液， transfusionsolution)也是可用的，其在临床上用作血衆替代物/体外循环稀释液。可 商购的含ffiS的灌输溶液包括HESPANDER(注册商标）流体溶液和SALINHES(注册商标） 流体溶液6%(二者均由？代861111^1(&1^如?&11生产和销售 ；重均分子量：约70,000， 羟乙基基团的取代度：〇. 50至0. 55)。此外，以下HES制剂可以单独或彼此组合地使用： Hetastarch(重均分子量：约670, 000,轻乙基基团的取代度：0. 75) ;Pentastarch(重均分 子量：约260, 000,羟乙基基团的取代度：0. 5);Elohes(重均分子量：约200, 000,羟乙基 基团的取代度：〇. 62)trimmer(重均分子量：约200, 000,羟乙基基团的取代度：0. 5);和 Voluven(重均分子量：约130, 000,羟乙基基团的取代度：0. 4)。
[0029] 在本发明的免疫层析法中，导致HES存在于测量系统中的方法包括（A)其中预先 将HES与溶液状态的样品混合的方法和（B)其中HES被包含在免疫层析装置的一个或多个 构件中的方法。
[0030] (A)的方法可以是这样的方法：其中HES被包含在血液样本稀释液中。在这种情 况下，稀释液中ffiS的浓度优选为1. 0重量％至2. 5重量％。样品和稀释液之间的混合比 (稀释比例）可以在考虑样品中被分析物的浓度、免疫层析法的定量的上限、添加至样品垫 的样品量等下通过实验设置。例如，如果血浆中的BNP是被分析物并且免疫层析法的定量 的上限和下限分别是10pg/mL和800pg/mL，则10倍稀释是优选的。
[0031] 优选将HES在使用前溶解在合适的缓冲溶液中。只要对免疫层析法的性能，例如 抗原和抗体的稳定性和敏感性没有有害作用，可以使用在免疫层析法中使用的任何缓冲 剂，包括磷酸盐缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、Tris缓冲溶液、硼酸缓冲溶液和柠檬酸缓冲溶 液。在这种情况下，优选的pH范围是5. 5至9.0。这同样适用于在免疫层析法中使用的添 加剂（非特异反应抑制剂、敏化剂、稳定剂和防腐剂）。
[0032] (B)的方法将在下文中与免疫层析装置的描述相关地进行描述。
[0033] 本发明的免疫层析装置具有（1)样品垫和（2)其上固定有能够特异结合至被分析 物的组分的膜，其以自上游的（1)和（2)的顺序布置。下文中，假定被分析物是抗原并且能 够特异结合