包括40nm颗粒和80nm颗粒，其中全类属单克隆抗体固 定于40nm颗粒上，而不同的全类属多克隆抗体固定于80nm颗粒上。
[0064] 在一些实施方案中，全类属结合剂通过衔接物固定于颗粒上。在某些实施方案中， 颗粒和全类属结合剂之间的衔接物为蛋白质衔接物（例如，蛋白L、蛋白A、蛋白G或蛋白A/ G)，或生物素-抗生物素蛋白，抗生物素蛋白链菌素，或中性抗生物素蛋白（neutravidin)， 或抗物种抗体，以固定缀合物上的另一种抗体（例如，抗-兔子或抗-小鼠抗体），能够结合 重组蛋白质标记物（例如，His标记物或FLAG标记物）的试剂，DNA或DNA-样分子，或合成 的免疫球蛋白-结合部分（例如，ProMetric BioSciences模拟配体）。
[0065] 在一些实施方案中，装置是适用于检测血液样品或血液制品样品中的细菌的侧向 流动装置，所述装置包括用于样品的流动通道和结合多种细菌抗原的全类属结合剂（例 如，全类属抗体），其中全类属结合剂固定于一群80nm金颗粒上，并且进一步包括固定于一 群40nm金颗粒上的全类属结合剂（例如，全类属抗体）。在进一步的实施方案中，全类属结 合剂结合一种或多种革兰氏阳性细菌抗原，一种或多种革兰氏阴性细菌抗原，或两者。在不 同的实施方案中，结合革兰氏阳性细菌抗原的全类属结合剂与结合革兰氏阴性细菌抗原的 全类属结合剂可以在相同的金颗粒群上或在不同的金颗粒群上（例如，80nm金颗粒）。在 某些实施方案中，固定于80nm金颗粒上的全类属结合剂是多克隆抗体，而固定于40nm金颗 粒上的全类属结合剂是单克隆抗体。在进一步的实施方案中，装置包括固定于装置的流动 通道上的捕获结合剂（例如，捕获抗体），其中金颗粒沿着流动通道排列，使得样品在接触 捕获结合剂之前接触有色颗粒群。在某些实施方案中，捕获结合剂是全类属结合剂。在其 中捕获结合剂是全类属结合剂的实施方案中，捕获结合剂可以与固定于金颗粒上的全类属 结合剂相同，或与固定于金颗粒上的全类属结合剂不同。
[0066] 检测细菌的方法
[0067] 在一些实施方案中，本发明提供了一种装置和方法，其具有比现有装置和方法更 宽的反应性。特别地，所述装置和方法能够检测比现有装置和方法更宽范围的细菌属、细菌 种和/或细菌菌株。例如，所述装置和方法能够检测至少100、150、200、250、300、350、400、 450或500种不同的细菌。在一些实施方案中，本发明提供了一种方法或装置，其包括能够 检测超过1 X 107、1 X 106、1 X 105、1 X 104、1 X 103或1 X 102菌落形成单位（CFU) /mL细菌或相 等浓度的源自该细菌水平的抗原的全类属抗体。
[0068] 在一些实施方案中，本发明提供了一种筛选液体样品中细菌的存在的方法。在该 方法的不同实施方案中，样品可以是任何生物流体，包括透析样品。在一些实施方案中，透 析样品选自选自血液透析流体和腹膜透析流体。在一些实施方案中，样品是其中已经保存 了组织的流体样品。在一些实施方案中，组织选自血细胞培养物、干细胞培养物以及骨和软 骨移植物材料。在一些实施方案中，样品是血液或血液制品，包括但不限于全血、白细胞、 造血干细胞、血小板、红细胞、血浆、骨髓和透析流体，包括将本发明的侧向流动装置接触样 品，并且检测抗体群与样品的结合，其中结合表示样品中存在细菌，而没有结合表示样品中 不存在细菌。在某些实施方案中，样品是透析流体，包括血液透析流体和腹膜透析流体。
[0069] 在一些实施方案中，本发明提供了一种筛选食物或饮料产品或食物或饮料加工中 细菌存在的方法。例如，本发明的方法可以用于测试携带液体（如啤酒或奶）的管线中存 在或不存在细菌。该方法还可以用于测试水样中存在或不存在细菌。在一些实施方案中， 这些方法包括将本发明的侧向流动装置接触饮料样品或水样并检测抗体群与样品的结合， 其中结合表示饮料或水样中存在细菌，而没有结合表示饮料或水样中不存在细菌。
[0070] 在本发明的某些实施方案中，在将样品接触全类属抗体之前或同时，对样品进行 处理。优选地，处理暴露了革兰氏阴性细菌抗原或革兰氏阳性细菌抗原上用于全类属抗体 的结合位点。例如，可以通过从细菌的细胞壁或细胞膜分裂抗原来暴露细菌抗原上的结合 位点，由此暴露结合位点；诱导细菌分泌抗原，由此暴露结合位点；裂解细菌，由此释放胞 内细菌抗原，并且因此暴露抗原上的结合位点；或通过诱导细菌抗原上的构象改变，由此暴 露结合位点。这样的处理包括通过物理方式机械破坏样品中的细菌细胞，所述物理方式包 括，但不限于，超声波处理、煮沸或均质，使用，例如，Dounce均质机。所述处理还可以是使 用化合物或组合物的通过化学方式的样品处理，所述化合物或组合物例如为去污剂、碱溶 液（用于碱裂解）、酸溶液（用于酸裂解）、EDTA、EGTA、金属离子、阴离子、阳离子、表面活 性剂、螯合剂和/或酶（例如，溶葡萄球菌素、溶菌酶、变溶菌素、labiase、无色肽酶、胰蛋白 酶、蛋白酶K、自溶素、噬菌体编码的裂解酶，及其组合）。处理将暴露革兰氏阴性细菌抗原 或革兰氏阳性细菌抗原上针对全类属抗体的结合位点。
[0071] 在一些实施方案中，该方法用于检测血液样品或血液制品样品中的细菌，该方法 包括将样品与结合了多种细菌抗原的全类属结合剂（例如，全类属抗体）接触，其中全类 属结合剂固定于一群80nm金颗粒上，并且进一步包含固定于一群40nm金颗粒上的全类属 结合剂（例如，全类属抗体）。在各种实施方案中，该方法包括在允许全类属结合剂与细菌 抗原之间结合的条件下将样品与全类属结合剂接触并且在允许固定化捕获结合剂与带有 固定化全类属结合剂的金颗粒之间结合的条件下将固定化捕获结合剂（例如，全类属结合 剂，如全类属抗体）与金颗粒接触。在某些实施方案中，全类属结合剂结合一种或多种革兰 氏阳性细菌抗原、一种或多种革兰氏阴性细菌抗原，或两者。在各种实施方案中，结合革兰 氏阳性细菌抗原的全类属结合剂可以与结合革兰氏阴性细菌抗原的全类属结合剂在相同 群或不同群的金颗粒（例如，80nm金颗粒）上。在某些实施方案中，固定于80nm金颗粒上 的全类属结合剂是多克隆抗体，而固定于40nm金颗粒上的全类属结合剂是单克隆抗体。在 其中捕获结合剂是全类属结合剂的进一步的实施方案中，捕获结合剂与固定于金颗粒上的 全类属结合剂相同或与固定于金颗粒上的全类属结合剂不同。
[0072]在进一步的方面中，本发明提供了包含可检测颗粒的试剂盒，所述的可检测颗粒 如有色颗粒，包括金、银或钛颗粒，其中颗粒大小为约60nm至约120nm，并且其中颗粒包含 直接或通过衔接物固定于其上的多价结合剂。在一些实施方案中，多价结合剂是全类属结 合剂，如用于检测样品中的革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌或两者的全类属抗体。在一 些实施方案中，颗粒为约80nm。在一些实施方案中，试剂盒包含不同大小的可检测颗粒，如 80nm和40nm。在一些实施方案中，试剂盒包含80nm金颗粒，含有或不含40nm金颗粒。试 剂盒进一步包含使用可检测颗粒来检测样品中细菌存在的说明书。在一些实施方案中，试 剂盒进一步包含在其上固定有捕获全类属抗体的固体表面。在一些实施方案中，固体表面 是侧向流动装置的组成部分。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含用于预处理样品的试 剂。
[0073]以下实施例打算用来进一步说明本发明的某些实施方案而不是用来限制本发明 的范围。 实施例
[0074] 实施例1
[0075]我们在模型侧向流动系统中测量了从不同大小（40nm和80nm)的金颗粒产生的视 觉信号，以确定那种颗粒产生了最高信号强度应答/颗粒（图1A-1C)。将系统设计成捕获 高比例的流过条带的颗粒，以获得通过不同大小的颗粒产生的视觉信号的指示。使用了根 据本发明的侧向流动装置。在这个模型中，流动装置利用了 Millipore硝基纤维素膜上成 条带的IgG抗体作为捕获结合剂，以及流过条带的蛋白A覆盖的金颗粒。对于加入反应中 的给定数量的颗粒，与通过40nm金颗粒产生的红/粉线相比，80nm金颗粒获得了更高对比 强度的紫色线，使得来自80nm珠子的线更易于观察和解释。图1B和1C是分别使用不同数 量的40nm和80nm颗粒产生的条带的图像。使用Gelanalyzer2010软件分析了图像，以提 供针对捕获线强度的数值。图1A显示了信号强度相对于加入反应中的颗粒数量的曲线，证 明了通过等量较大金颗粒产生了提高的信号强度。
[0076]令人惊讶地，提高颗粒大小也提高了捕获线上产生的视觉上可检测的信号的强 度，由此提高了灵敏度。然而，更多数量的较小颗粒，其比较大颗粒具有更大的表面积体积 比，预期将产生更好的信号和较快的结果。此外，作为实践物质，捕获区域中的金的量是有 限的。因此，特别令人惊讶的是较低量的较大颗粒比较高量的较小颗粒产生了更好的结果。
[0077] 实施例2
[0078] 为了测试不同大小的金颗粒的有效性，我们使用针对各种革兰氏阴性和革兰氏阳 性细菌产生的抗体混合物构建了模型免疫试验系统。我们将抗体结合80nm胶态金（"强 化的检测剂"）颗粒并将其性能与40nm胶态金（"通用检测剂"）颗粒进行比较。我们使 用缓冲溶液，通过从10 8CFU/mL开始制备十倍稀释，针对八种生物体中的每一种制备了四个 水平的细菌裂解物。对于每个裂解物水平，我们在96