一种血液前处理液的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及用于血液处理的处理液，具体涉及一种血液前处理液。
【背景技术】
[0002]血液中包括血清、白细胞、红细胞及血小板等，但是很多疾患因子首先影响血液成分的变化，例如循环肿瘤细胞(circulating tumor cell，CTC)，通常把进入人体外周血的肿瘤细胞称为循环肿瘤细胞。血液成份分析，主要是对血液中白血球、红血球等分析计数，要分析这些成份，需要对血液进行前处理，防止血液凝固、物质分解和细胞死亡等，如专利公开号为CN103743616的发明专利申请，就公开了血液分析仪用稀释液，其成份包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠、乙二胺四乙酸盐、咪唑、嘌呤、防腐剂等，其作用是使血样物质稳定，防止血液凝固、物质分解和细胞死亡等。专利公开号为CN103323582的发明专利申请，则公开了针对白细胞分类的试剂盒，包括溶血剂、稀释液和抑制剂，其溶血剂可以溶化红细胞和血小板，抑制剂可以抑制试剂对白细胞的损伤，用于白细胞的分类计数。但上述二种发明，针对血液中数量较多的白细胞、红细胞进行计数，但对血液中数量少的疾患因子，如循环肿瘤细胞的计数，尤如大海捞针，很难计算清楚，因此需要针对少数物质计数专门设计一种血液前处理液。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种白细胞、疾患因子与靶细胞等得到浓缩与纯化，且不会损伤细胞的表面生物活性的血液前处理液。
[0004]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种血液前处理液，其成份及浓度如下:氯化纳浓度为3?8g/L,磷酸二氢钾浓度为0.1?0.2g/L,磷酸氢二纳浓度为I?2g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为3?5%，离子去污剂质量百分浓度为0.1?1%，蛋白保护剂质量百分浓度为0.5?3%，Procl in-300质量百分浓度为0.01?0.05%，余量为纯化水，所述离子去污剂为高碳醇、脂肪酸、高碳脂肪胺、脂肪酰胺、环氧乙烷或聚乙二醇，所述蛋白保护剂为甘油或多糖。
[0005]所述多糖为半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麦芽糖的至少其中一种。
[0006]与现有技术相比，本发明的优点在于一种血液前处理液，其由氯化纳、磷酸二氢钾、磷酸氢二纳、小牛血清白蛋白、离子去污剂、蛋白保护剂、Proclin-300及水组成，其中离子去污剂可以降低界面自由能，改变欲除去物与基质的界面性质，通过吸附层的电荷相斥，过滤或磁力吸附，使欲除去物，例如血清，血红蛋白从基质上移去，再经卷离，乳化，分散，增溶等作用，随溶液去除。甘油或活性多糖与小牛血清白蛋白的生物活性相融合增强作用，不但可以防止血液凝固、物质分解和细胞死亡等，还可以除去从全血中血清与血红蛋白等组分，保护靶细胞，例如循环肿瘤细胞，未分化或分化型白细胞的生物活性。因此利用本发明的血液前处理液，血液离心后，白细胞、疾患因子与靶细胞等得到浓缩与纯化，且不会损伤细胞的表面生物活性；可直接用于细胞计数或细胞培养后的免疫荧光、荧光定量或定性检测循环肿瘤细胞等疾患因子。
【具体实施方式】
[0007]以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
[0008]实施例1
一种血液前处理液，其成份及浓度如下:氯化纳浓度为3g/L，磷酸二氢钾浓度为0.2g/L,磷酸氢二纳浓度为2g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为3%，离子去污剂高碳醇质量百分浓度为0.1%，蛋白保护剂甘油质量百分浓度为0.5%，Proclin-300质量百分浓度为0.01%，余量为纯化水。处理时取7.5ml新鲜血液加入血液前处理液4.4ml，上下跌倒四五次放入离心机中离心10分钟弃去上清液，保留细胞。
[0009]实施例2
一种血液前处理液，其成份及浓度如下:氯化纳浓度为5g/L，磷酸二氢钾浓度为0.lg/L,磷酸氢二纳浓度为lg/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为4%，离子去污剂脂肪酸或高碳脂肪胺质量百分浓度为0.5%，蛋白保护剂半乳糖(或阿拉伯糖或葡萄糖或麦芽糖)质量百分浓度为1.5%，Proclin-300质量百分浓度为0.03%，余量为纯化水。
[0010]实施例3
一种血液前处理液，其成份及浓度如下:氯化纳浓度为8g/L，磷酸二氢钾浓度为0.15g/L,磷酸氢二纳浓度为1.5g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为5%，离子去污剂环氧乙烷或聚乙二醇质量百分浓度为1%，蛋白保护剂为半乳糖和阿拉伯糖配制的混合多糖(或葡萄糖和麦芽糖、半乳糖和麦芽糖、葡萄糖和阿拉伯糖等配制)，其质量百分浓度为3%，Proclin-300质量百分浓度为0.05%，余量为纯化水，混合多糖配制的比例以与小牛血清白蛋白的生物活性相融合效果好为佳，可以是1:0.1?10，以质量比1:1为好。
[0011]实施例4
一种血液前处理液，其成份及浓度如下:氯化纳浓度为8g/L，磷酸二氢钾浓度为
0.15g/L,磷酸氢二纳浓度为1.5g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为5%，离子去污剂环氧乙烷或聚乙二醇质量百分浓度为1%，蛋白保护剂为半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麦芽糖配制混合多糖，其质量百分浓度为2%，Proclin-300质量百分浓度为0.05%，余量为纯化水，混合多糖配制的比例以与小牛血清白蛋白的生物活性相融合效果好为佳，可以是1:0.1?10:0.1?10:0.I?10，以质量比I:1:1:1为好。
【主权项】
1.一种血液前处理液，其特征在于成份及浓度如下:氯化纳浓度为3?8g/L，磷酸二氢钾浓度为0.1?0.2g/L,磷酸氢二纳浓度为I?2g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为3?5%，离子去污剂质量百分浓度为0.1?1%，蛋白保护剂质量百分浓度为0.5?3%，Proclin-300质量百分浓度为0.01?0.05%，余量为纯化水，所述离子去污剂为高碳醇、月旨肪酸、高碳脂肪胺、脂肪酰胺、环氧乙烷或聚乙二醇，所述蛋白保护剂为甘油或多糖。2.如权利要求1所述的血液前处理液，其特征在于所述多糖为半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麦芽糖的至少其中一种。3.如权利要求1所述的血液前处理液，其特征在于成份及浓度如下:氯化纳浓度为3g/L,磷酸二氢钾浓度为0.2g/L，磷酸氢二纳浓度为2g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为3%，离子去污剂高碳醇质量百分浓度为0.1%，蛋白保护剂甘油质量百分浓度为0.5%，Proclin-300质量百分浓度为0.01%，余量为纯化水。4.如权利要求2所述的血液前处理液，其特征在于成份及浓度如下:氯化纳浓度为5g/L,磷酸二氢钾浓度为0.lg/L，磷酸氢二纳浓度为lg/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为4%，离子去污剂脂肪酸或高碳脂肪胺质量百分浓度为0.5%，蛋白保护剂半乳糖质量百分浓度为1.5%，Proclin-300质量百分浓度为0.03%，余量为纯化水。5.如权利要求2所述的血液前处理液，其特征在于成份及浓度如下:氯化纳浓度为Sg/L,磷酸二氢钾浓度为0.15g/L，磷酸氢二纳浓度为1.5g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为5%，离子去污剂环氧乙烷或聚乙二醇质量百分浓度为1%，蛋白保护剂为半乳糖和阿拉伯糖按质量比1:1配制的混合多糖，其质量百分浓度为3%，Proclin-300质量百分浓度为0.05%，余量为纯化水。6.如权利要求2所述的血液前处理液，其特征在于成份及浓度如下:氯化纳浓度为8g/L,磷酸二氢钾浓度为0.15g/L，磷酸氢二纳浓度为1.5g/L，小牛血清白蛋白质量百分浓度为5%，离子去污剂环氧乙烷或聚乙二醇质量百分浓度为1%，蛋白保护剂为半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和麦芽糖按质量比1:1:1:1配制混合多糖，其质量百分浓度为2%，Proclin-300质量百分浓度为0.05%，余量为纯化水。
【专利摘要】本发明公开了一种血液前处理液，其由氯化纳、磷酸二氢钾、磷酸氢二纳、小牛血清白蛋白、离子去污剂、蛋白保护剂、Proclin-300及水组成，其中离子去污剂可以降低界面自由能，改变欲除去物与基质的界面性质，通过吸附层的电荷相斥，过滤或磁力吸附，油或活性多糖与小牛血清白蛋白的生物活性相融合增强作用；因此利用本发明的血液前处理液，血液离心后，白细胞、疾患因子与靶细胞等得到浓缩与纯化，且不会损伤细胞的表面生物活性。
【IPC分类】G01N1/34, G01N1/28, G01N1/40
【公开号】CN104931317
【申请号】CN201510316586
【发明人】张晓晶, 沈挺, 乐飚
【申请人】宁波美晶医疗技术有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月11日