LH)的含量，具体步骤如下:
1、尿液中LH的正常基数在20mlU/ml左右，所以初步设定了范围为10U/ml?100U/ml的一系列梯度检测线，分别为 10mlU/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml、70U/ml、80U/ml、90U/ml和100U/ml，根据实验设计的需要，检测线也可以是其他梯度范围的数值。
[0026]2、检测线中包被有上述梯度浓度的α-LH单克隆抗体和抗β-LH单克隆抗体，用于特异的与LH进行结合；胶体金垫上含有胶体金颗粒，用于与LH结合；对照线上包被羊抗鼠LH多克隆抗体。
[0027]3、往第一孔洞中加入过量待检测尿液，然后进行观察，10多分钟后，观察到，检测线10mlU/ml至50mlU/ml均显示红色，检测线60mlU/ml以上不显色，贝丨」可以得出，尿液中的LH含量在大约50mlU/ml。
[0028]实施例3采用本发明的梯度梯度胶体金免疫层析定量检测装置，检测血清中甲型肝炎病毒IgM抗体(HAV IgM)的含量，方法步骤如下:
1、检测线上包被有不同浓度的抗人-1gM μ链抗体，检测线设置为五条，成梯度分布，由第I条线开始进行梯度稀释。
[0029]2、胶体金垫上固着胶体金标记的甲型肝炎病毒抗原(HAV)，还包被有胶体金标记的兔IgGo
[0030]3、对照线上包被有抗兔IgG多克隆抗体。检测线与对照线互相垂直，与吸水方向平行。
[0031]4、将待测血清加入到第一空洞即加样孔中，加入量尽可能过量，使待测物质与胶体金标抗原充分结合；等待10?20分钟，然后观察梯度检测线的颜色变化情况，对照浓度标不线，显色的检测线浓度最尚者即为样品中HAV IgM的最终浓度。
[0032]以基因重组抗人-1gM μ链抗体、抗兔IgG多克隆抗体分别固相于硝酸纤维素膜检测区(T)和对照区(C)，当样本中含有抗HAV IgM时，抗HAV IgM能与胶体金标记HAV抗原结合形成复合物，该复合物在层析过程中又与(T)线区的抗人-1gM μ链抗体结合形成红色沉淀条带。当样本中不含抗HAV IgM时，胶体金标记的HAV抗原无法与(T)线区的抗人-1gM μ链抗体结合。无论样本中是否含有抗HAV IgM，(C)线区的抗兔IgG多克隆抗体都会与胶体金标记的兔IgG结合形成一条红色对照线。(C)线的显色是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为该试剂的内控标准。
[0033]实施例4采用本发明的梯度梯度胶体金免疫层析定量检测装置，检测样品中金黄色葡萄球菌肠毒素B (SEB)的含量，方法步骤如下:
1、检测线上包被有已知量的不同浓度的兔抗SEB型多克隆抗体，按梯度分布。
[0034]2、胶体金垫上固着胶体金标记的兔抗SEB型多克隆抗体。
[0035]3、对照线上包被羊抗兔IgG。检测线与对照线互相垂直，与吸水方向平行。
[0036]4、将待测样品加入到加样孔中，加入量尽可能过量，使待测物质与胶体金标抗原充分结合；等待10?20分钟，然后观察梯度检测线的颜色变化情况，对照浓度标示线，显色的检测线浓度最高者即为样品中金黄色葡萄球菌肠毒素B的最终浓度。
【主权项】
1.一种梯度胶体金免疫层析定量检测装置，包括:试剂卡槽，衬板，样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水纸；其特征在于:所述试剂卡槽包括上壳体和下壳体，上壳体与下壳体通过卡扣连接，所述上壳体设有第一孔洞和第二孔洞；所述衬板固定于试剂卡槽内部；所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次排列连接于衬板上表面；样品垫置于第一孔洞下方；硝酸纤维素膜置于第二孔洞下方；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线。2.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于:所述胶体金垫上含有胶体金颗粒，或者金标抗原或抗体。3.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于:所述检测线包被有已知量的抗原或抗体，浓度呈梯度分布。4.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于:所述对照线为抗原或二抗，对照线阳性，表明检测成立。5.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于:所述上壳体的第二孔洞外围设有浓度标示线，所述浓度标示线与检测线一一对应。6.根据权利要求1所述的梯度胶体金免疫层析定量检测装置，其特征在于:所述第一孔洞为加样孔，为长条状。7.一种梯度胶体金免疫层析定量检测方法，采用如权利要求1所述的检测装置，包括以下步骤: (1)根据检测样品初步设定检测线条数，并进行梯度浓度设置； (2)在加样孔中加入过量体积的待测样品； (3)经过10?20分钟后，观察梯度检测线的颜色变化情况，对照浓度标示线，显色的检测线浓度最高者即为样品中待测物质的最终浓度。8.梯度胶体金免疫层析定量检测装置的用途，用于定量检测样品中病毒抗原或抗体、细菌或细菌毒素、激素、肿瘤标记物的含量。
【专利摘要】本发明属于生物检测技术领域，涉及一种快速梯度定量检测装置、方法及用途。一种梯度胶体金免疫层析定量检测装置，包括：试剂卡槽，衬板，样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水纸；所述试剂卡槽包括上壳体和下壳体，上壳体与下壳体通过卡扣连接，所述上壳体设有第一孔洞和第二孔洞；所述衬板固定于试剂卡槽内部；所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次排列连接于衬板上表面；样品垫置于第一孔洞下方；硝酸纤维素膜置于第二孔洞下方；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线。本发明提供的梯度胶体金免疫层析定量检测装置及方法，检测装置的结构简单，检测方法步骤简便，易于操作，并且能够快速准确的检测出待测物质的浓度。
【IPC分类】G01N33/558
【公开号】CN104991059
【申请号】CN201510422606
【发明人】张姝倩, 邵祝军, 葛安山, 陈宴霞
【申请人】青岛中创生物科技有限公司, 青岛康大食品有限公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月17日