和部分峰定性
[0058] 分别制备黄芪、防风和麸炒白术的阴性对照样品，按2. 3项供试品溶液制备方法 同法制备。
[0059] 分别取空白溶剂、供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液，过0. 45 μ m滤膜，按 2. 1项色谱条件进样测定，进行色谱峰归属和部分峰定性分析。
[0060] 结果，空白溶剂进样在本系统条件下在IOOmin左右有溶剂峰出现，见图1，分析指 纹峰时应予以排除；在当前色谱条件下，选择归一化面积大于0. 5%的色谱峰作为指纹峰， 共选择了 22个指纹峰，见图2 ;对22个指纹峰采用阴性样品对照，进行峰归属分析，得峰2、 5、6、7、8、10、11、13、14、15、21为来源黄芪的色谱峰，峰1、3、4为来源防风的色谱峰，峰16、 17、18、19、22为来源麸炒白术的色谱峰，见图3-5 ;以对照品溶液结合随行对照的方式，鉴 定了其中10个主要指纹峰，分别为升麻素苷（1)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷（2)、升麻素（3)、 5-0-甲基维斯阿米醇苷（4)、芒柄花苷（7)、毛蕊异黄酮（10)、槲皮素（11)、芒柄花素（13)、 白术内酯III (16)、白术内酯I (17)，其中峰9和峰20存在干扰，结合纯品随行对照可能为 亥茅酚苷（9)和白术内酯II (20)。
[0061 ] 2. 5参照峰和共有峰的选择
[0062] 在本系统下测定了 12批自生产的玉屏风散，比较所得的色谱图，按共有峰出现率 100%计，确定了 22个共有峰。毛蕊异黄酮在41. 9min左右出峰，其与相邻峰的分离度良好， 无干扰峰，在测定时比较稳定，峰面积适中，因此选作参照峰。在此色谱条件下，毛蕊异黄酮 的理论塔板数不得低于140000。
[0063] 2. 6稳定性试验
[0064] 取同一供试品溶液，分别于制备后0、4、8、12、2处注入液相色谱仪，记录指纹图 谱。结果表明，各主要共有指纹峰的相对保留时间无明显变化，RSD在0.01% -0. 13% ;相 对峰面积RSD集中在0. 38 % -3. 0 %，个别峰稍大于3. 0 %，见表2和表3。说明样品制备液 在24h内稳定。
[0065] 表2样品稳定性试验结果（相对保留时间）
[0070] 2· 7精密度试验
[0071] 取同一份供试品溶液，按2. 1项色谱条件进样测定，分别在同一天连续进样6次进 行精密度试验，记录指纹图谱。结果表明，各主要共有指纹峰的的相对保留时间无明显变 化，RSD在0. 01% -0. 05% ;相对峰面积RSD集中在0. 25% -2. 25%，个别峰稍大于3. 0%， 见表4和表5。表明仪器精密度良好。
[0072] 表4样品精密度试验结果（相对保留时间）
[0073]
[0075] 表5样品精密度试验结果（相对峰面积）
[0076]
[0078] 2· 8重现性试验
[0079] 精密称取同一批玉屏风散粉末6份，按照2. 3项方法制备供试品溶液，按照2. 1项 色谱条件进样分析，记录指纹图谱。结果表明，各主要共有指纹峰的的相对保留时间无明显 变化，RSD在0. 01 % -0. 27%;相对峰面积RSD集中在0. 30% -2. 67%，个别峰稍大于3. 0%， 见表6和表7。表明该方法重复性良好。
[0080] 表6样品重现性试验结果（相对保留时间）
[0081]
[0085] 2. 9对照指纹图谱的建立和相似度评价
[0086] 将12批自生产的玉屏风散色谱图原始信号导入《中国药典》相似度评价软件"中 药色谱指纹图谱相似度评价系统A版"，计算生成对照指纹图谱（平均值法）；指纹图谱 (S1-S12)及对照指纹图谱（RFP)对比见图7,相似度均在0. 9以上，对照指纹图谱可见图8。
[0087] 综上所述，本发明所述玉屏风制剂指纹图谱的构建方法，较为全面的将每味中药 的主要成分都进行的控制，有别于药典标准和文献评价方法，并且对每味药材的色谱指标 峰做了定性鉴别和峰归属，使得质量控制更为全面和精确。
[0088] 实施例2
[0089] 本实施例一种玉屏风散指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：
[0090] (1)供试品溶液的制备
[0091] 取待测样品粉末（批号：20150120的玉屏风散，香雪制药股份有限公司自生 产）lg，精密称定，加50mL甲醇回流提取2h，过滤，滤液浓缩至干后，加甲醇定容至10mL，即 得；
[0092] (2)检测
[0093] 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，所述高效液相色谱仪的 条件如下：
[0094] 色谱柱（YMC Hydrosphere C1S，4. 6X25〇mm，5 μπι);流动相乙腈（A)-体积浓度 0. 05%磷酸（B)，梯度洗脱（梯度同表1);流速1.0 mL/min ;柱温30°C ;进样量10 μ L ;检测 波长230nm，检测器：紫外检测。
[0095] 待测样品的指纹图谱如图9所示。
[0096] 通过与对照指纹图谱（图8)比较，可知，该待测样品的指纹图谱与对照指纹谱图 的相似度为0.981，可以认为该待测样品质量稳定，符合质量要求，为合格产品。
[0097] 实施例3
[0098] 本实施例一种玉屏风颗粒指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：
[0099] (1)供试品溶液的制备
[0100] 取待测样品颗粒5包（现有市售的玉屏风颗粒），混合均匀后，碾碎过三号筛，取 2g，精密称定，加50mL甲醇回流提取2h，过滤，滤液浓缩至干后，加甲醇定容至10mL，即得；
[0101] ⑵检测
[0102] 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，所述高效液相色谱仪的 条件如下：
[0103] 色谱柱（YMC Hydrosphere C1S，4. 6X250mm，5 μπι);流动相乙腈（A)-体积浓度 0. 05%磷酸（B)，梯度洗脱（梯度同表1);流速1.0 mL/min ;柱温30°C ;进样量10 μ L ;检测 波长230nm，检测器：紫外检测。
[0104] 待测样品的指纹图谱如图10所示。
[0105] 通过与对照指纹图谱（图8)比较，可知，该待测样品的指纹图谱与对照指纹谱图 的相似度不到〇. 5,可以认为该待测样品质量存在问题。
[0106] 以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实 施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存 在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0107] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护 范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种玉屏风制剂指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤： 取玉屏风制剂，粉碎或不粉碎后精密称定，加入甲醇回流提取l_3h，过滤，即得供试品 溶液； 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由22个共有特征峰构成 的玉屏风制剂指纹图谱，其中， 所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，体积浓度0. 02-0. 1 %磷酸 水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。2. 根据权利要求1所述的玉屏风制剂指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度 洗脱方式为：〇-6〇1^11，流动相4的体积百分数由15%变化至35%;6〇-8〇1^11，流动相八的 体积百分数由35 %变化至47% ;80-95min，流动相A的体积百分数由47 %变化至70% ; 95-110min，流动相A的体积百分数由70%变化至90%。3. 根据权利要求1所述的玉屏风制剂指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述流动相B 为体积浓度0. 05 %磷酸水溶液。4. 根据权利要求1-3任一项所述的玉屏风制剂指纹图谱的构建方法，其特征在于，所 述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；所述流动相的流速为1.0 mL/min ;柱温 30°C ;检测波长230nm〇5. -种玉屏风制剂指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 取玉屏风制剂，粉碎或不粉碎后精密称定，加入甲醇回流提取l_3h，过滤，即得供试品 溶液； 精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，即得，其中， 所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，体积浓度0. 02-0. 1 %磷酸 水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。6. 根据权利要求5所述的玉屏风制剂指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述梯度 洗脱方式为：〇-6〇1^11，流动相4的体积百分数由15%变化至35%;6〇-8〇1^11，流动相八的 体积百分数由35 %变化至47% ;80-95min，流动相A的体积百分数由47 %变化至70% ; 95-110min，流动相A的体积百分数由70%变化至90%。7. 根据权利要求5所述的玉屏风制剂指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述流动相B 为体积浓度0. 05 %磷酸水溶液。8. 根据权利要求5-7任一项所述的玉屏风制剂指纹图谱的检测方法，其特征在于，所 述高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；所述流动相的流速为1.0 mL/min ;柱温 30°C ;检测波长230nm〇
【专利摘要】本发明涉及一种玉屏风制剂指纹图谱的构建方法及检测方法。所述构建方法包括如下步骤：取玉屏风制剂，粉碎或不粉碎后精密称定，然后精密加入甲醇，回流提取1-3h，过滤，即得供试品溶液；精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由22个共有特征峰构成的玉屏风制剂指纹图谱，其中，所述高效液相色谱仪采用的流动相为：以乙腈为流动相A，体积浓度0.02-0.1％磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式。该构建方法建立了由22个共有峰组成的玉屏风制剂液相色谱指纹图谱，共有峰具有特征性，可全面有效地控制玉屏风制剂的质量，同时鉴定了其中10个主要指纹峰，并对全部的共有峰进行了峰归属，结果可靠，重复性好。
【IPC分类】G01N30/88, G01N30/06
【公开号】CN105044260
【申请号】CN201510378950
【发明人】张洪坤, 周劲松, 黄玉瑶, 王永辉, 连林生, 张健
【申请人】广州市香雪制药股份有限公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月30日