条通过对苯乙醇胺A进行结构改造，在 苯乙醇胺A的氨基端引入末端代醛基的连接臂，突出了苯乙醇胺A本身的分子结构，增强了 免疫原性，使得制备得到的苯乙醇胺A单克隆抗体灵敏度高，特异性强，本发明试纸条成本 低，操作简单，尿液样品无需处理，可以直接检测，检测时间短，只需5min，方便携带，适用于 现场大量样品的筛查，储存简单、保质期长，在食品安全监管工作中可广泛推广使用。
【具体实施方式】
[0036] 下面通过实施例，对本发明的技术方案作进一步具体说明。下述对本发明实施方 式的说明旨在对本发明的总体构思进行解释，而不应当理解为对本发明的一种限制。
[0037] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0038] 实施例1、检测苯乙醇胺A的试纸条的构成
[0039] 根据本发明优选的实施方式的检测苯乙醇胺A的试纸条是由样品吸收垫1、结合 物释放垫2、反应膜3、吸水垫4依次黏贴在底板5上组成。样品吸收垫的末端与反应膜相 连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底 板的末端对齐；所述反应膜上有检测区6和质控区7,检测区和质控区均为与所述试纸条的 长相垂直的条带状检测区位于近于样品吸收垫的一侧，质控区位于近于吸水垫的一侧；所 述检测区包被有苯乙醇胺A半抗原-载体蛋白偶联物（苯乙醇胺A半抗原-牛血清白蛋白 的偶联物），质控区包被有羊抗鼠抗抗体；所述底板为PVC底板，样品吸收垫为无纺布，反应 膜为硝酸纤维素膜，结合物释放垫为喷涂有苯乙醇胺A单克隆抗体-胶体金标记物的玻璃 纤维；所述苯乙醇胺A残留检测试纸条在4°C~30°C环境中储存，有效期为12个月。
[0040] 实施例2、实施例1中所述试纸条的制备方法
[0041] 1.苯乙醇胺A半抗原的制备
[0042] I. 5g~3. Og苯乙醇胺A加入到丙酮中溶解，再加入0. 5g~1.0 g溴代戊酸，回 流反应5h，利用薄层层析色谱法追踪反应情况，待反应结束后，蒸干丙酮，将反应得到的物 质用水和乙酸乙酯萃取，蒸干得到粗产物，经过流动相为二氯甲烷：甲醇=5:1的柱层析纯 化，得到苯乙醇胺A半抗原0. 8g~I. 0g。
[0043] 取反应得到的苯乙醇胺A半抗原经核磁共振氢谱测定，化学位移在9. 72 ppm处的 酸基信号峰、在2. 40ppm、l. 58、及2. 43 ppm处为亚甲基信号峰，表明苯乙醇胺A半抗原合成 成功。
[0044] 2.免疫原的制备
[0045] 取8. Og~10.0 mg苯乙醇胺A半抗原，溶解于I. 5mL~2. OmL的二甲基甲酰胺 (DMF)中，得到反应液I ;取20mg~30mg碳化二亚胺（EDC)和20mg~30mg的N-羟基琥 珀酰亚胺（NHS)用0. 3mL~0. 5mL水充分溶解后加入至反应液I中，室温下搅拌24h，得 到反应液II ;取牛血清白蛋白（BSA)30mL~40mL，充分溶解在3. OmL~3. 6mL的磷酸盐缓 冲液PBS (pH为8. 0)中，将反应液II逐滴缓慢滴加到牛血清白蛋白溶液中，并于室温下搅拌 24h，得到反应液III ;用0.0 lmol/L的PBS在4°C透析3天，以除去未反应的小分子物质，得 到免疫原；于-20°C保存备用。
[0046] 3.包被原的制备
[0047] 取7. Og~10.0 mg苯乙醇胺A半抗原，溶解于I. 5mL~2. OmL的二甲基甲酰胺 (DMF)中，得到反应液I ;取20mg~30mg碳化二亚胺（EDC)和20mg~30mg的N-羟基琥 珀酰亚胺（NHS)用0. 3mL~0. 5mL水充分溶解后加入至反应液I中，室温下搅拌24h，得 到反应液II ;卵清白蛋白（OVA) 30mL~40mL，充分溶解在3. OmL~3. 6mL的磷酸盐缓冲液 PBS (pH为8. 0)中，将反应液II逐滴缓慢滴加到牛血清白蛋白溶液中，并于室温下搅拌24h， 得到反应液III ;用0.0 lmol/L的PBS在4°C透析3天，以除去未反应的小分子物质，得到包 被原；于-20°C保存备用。
[0048] 4.苯乙醇胺A半抗原-载体蛋白偶联物的鉴定
[0049] 将苯乙醇胺A半抗原、载体蛋白、苯乙醇胺A半抗原-载体蛋白偶联物用pH7. 4的 PBS配成0· 5mg/ml的溶液，以0· Olmol/L pH7. 4 PBS调零，用紫外分光光度计在波长200~ 800nm范围内扫描，得到苯乙醇胺A半抗原、载体蛋白、苯乙醇胺A半抗原-载体蛋白偶联物 的吸收曲线。三者出现不同的吸收曲线，表明苯乙醇胺A半抗原与载体蛋白偶联成功。
[0050] 5.苯乙醇胺A单克隆抗体的制备
[0051] (1)动物免疫
[0052] 将步骤2得到的免疫原注入Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150 μ g/只，使其产生 抗血清。
[0053] (2)细胞融合和克隆化
[0054] 取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按8:1 (数量配比）比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采 用间接竞争ELISA法测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化， 直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0055] (3)细胞冻存和复苏
[0056] 将杂交瘤细胞用冻存液制成I X IO6个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏 时取出冻存管，立即放入37 °C水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。
[0057] (4)单克隆抗体的制备与纯化
[0058] 增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37°C条件下进行培养，用辛 酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，_20°C保存。
[0059] 所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清 在细胞培养基中的终浓度为20 % (质量分数），碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0. 2 % (质量分数）；所述细胞培养基的PH为7. 4。
[0060] 6、羊抗鼠抗抗体的制备
[0061] 以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗 抗体。
[0062] 7.苯乙醇胺A单克隆抗体-胶体金标记物的制备
[0063] (1)胶体金的制备
[0064] 用双蒸去离子水将1%氯金酸（购于sigma公司，产品目录号T09041)稀释 成0. 01 % (质量百分含量），取100mL置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，在 持续高温、持续搅拌下加入2. 5mL 1%柠檬酸三钠（购于广州化学试剂厂，产品目录号 BG11-AG-01KG)，继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止，冷却至室温后用去离子水 恢复到原体积，4°C保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。
[0065] (2)苯乙醇胺A单克隆抗体-胶体金标记物的制备
[0066] 在磁力搅拌下，用0. 2mol/L碳酸钾溶液调胶体金的pH值至7. 0,按每毫升胶体金 溶液中加入30~60 μ g的标准向胶体金溶液中加入苯乙醇胺A单克隆抗体，继续搅拌混 匀30min，加入10 % BSA，使其在胶体金溶液中的终浓度为1 % (体积分数），静置lOmin。 12000r/min、4°C离心30min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金 体积1/20的复溶缓冲液将沉淀重悬，置4°C备用。
[0067] 复溶缓冲液：含酪蛋白0.02%~0· 1% (质量分数）、吐温-800. 02%~0.2% (质 量分数）、ρΗ7· 2的0· 02mol/L磷酸盐缓冲液。
[0068] 8.结合物释放垫的制备
[0069] 将结合物释放垫浸泡于含有牛血清白蛋白（牛血清白蛋白在缓冲液中的浓度为 I. 0% )、pH为7. 2、0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液中，均匀浸湿lh，37°C烘3h备用。用Isoflow 喷膜仪将制备好的苯乙醇胺A单克隆抗体-胶体金标记物均匀喷涂在结合物释放垫上，每 Icm结合物释放垫喷涂0.0 l~0. 04mL苯乙醇胺A单克隆抗