一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒及其使用方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物领域，具体涉及一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒及其使用方法。
【背景技术】
[0002]随着社会和经济的快速发展，健康问题越来越备受人们的关注，而癌症已经严重威胁到人类的健康和生命，所以对癌症的诊断提出了更多的要求。目前对癌症的诊断主要是传统诊断方法包括影像诊断(X射线，B超，CT和核磁共振等)，化学诊断(生化检验，血液检验等)以及细胞学和组织学诊断等。后两种的诊断主要是对癌症标志物进行检测，癌症标志物就是癌症患者体内癌细胞在增殖，生长，转移等过程中产生和释放的某些物质，多以抗原、激素等形式存在于寄主血液或者癌细胞中，所以现在癌症标志物的检测对癌症的诊断有很大的实用价值。癌症标志物主要有甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原(PSA)以及一些糖类抗原等。目前检测癌症标志物的方法主要有:放射免疫测定，酶标电泳法，化学发光法以及ELISA法等，这些方法存在着检测灵敏度不高，价格昂贵和耗时长等缺点。市场上现在快速检测癌症标志物的基于胶体金的金标试纸法，检测快速、灵敏度高，但是也存在不稳定，全血检测抗干扰能力差，成本较高等缺点。
【发明内容】
[0003]发明目的:本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒。
[0004]本发明的另一目的在于提供上述试剂盒的使用方法。
[0005]技术方案:为了达到上述目的，本发明具体是这样来实现的:一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒，试剂盒包括试纸条、干燥剂和吸管，试纸条底部为塑料底衬板，样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴在塑料底衬板上。
[0006]其中，所述塑料底衬板上相邻粘贴物之间相互重叠部分长度为2mm。
[0007]其中，所述试纸条干燥封装，保存在温度4°C?常温条件下。
[0008]—种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒的使用方法，包括以下步骤:
[0009](I)聚苯乙烯乳胶微球的前处理
[0010]所用聚苯乙烯乳胶微球原始质量浓度为1% (即聚苯乙烯占乳胶微球的质量百分数)，直径200?500nm，表面为羧基修饰；
[0011]取10 μ L乳胶微球，加入90 μ L 2_ (N-吗啉)乙磺酸缓冲液(即MES缓冲液，1mM,pH 6.0)稀释10倍；
[0012]取100 μ L稀释好的浓度为0.1 %的乳胶微球，加入2?4mg 1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)和2?4mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)来活化微球表面修饰的羧基，混合溶解后置于避光处I?2h ;
[0013]在8000?9000rpm条件下离心5?lOmin，弃上清液并用MES缓冲液(10?20mM，pH 6.0)洗涤3次去掉多余的活化剂，最后用磷酸缓冲液(10?20mM，pH 7.4)重悬至lmL，保存待用；
[0014](2)乳胶-抗体结合物的制备
[0015]在ImL前处理好的聚苯乙烯乳胶微球中加入3?5 μ L I μ g/mL的癌症标志物标记抗体，室温振荡反应Ih;
[0016]将反应后的溶液在8000?9000rpm条件下离心5?lOmin，弃上清液并用磷酸缓冲液(10?20mM，pH 7.4)洗涤3次，最后用10?15%牛血清白蛋白溶液重悬至lmL，保存待用；
[0017](3)目标物免疫结合垫的制备
[0018]将制好的乳胶-抗体结合物喷涂到玻璃纤维膜上，得到目标物免疫结合垫；
[0019](4)具有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(NC膜)的制备
[0020]在一条硝酸纤维素膜上喷涂上lmg/mL的癌症标志物包被抗体和羊抗鼠二抗，其中癌症标志物包被抗体作为检测线，羊抗鼠二抗作为质控线；
[0021](5)基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试纸条的制备
[0022]将样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、具有检测线和质控线的硝酸纤维膜和吸水垫四种粘贴物分别依次粘贴到塑料底衬板上，并且相邻粘贴物之间相互重叠部分长度为2mm，得到基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试纸条，干燥封装，保存于温度4°C?常温条件下。
[0023]其中，所述癌症标志物为甲胎蛋白，癌胚抗原或前列腺特异抗原，癌症标志物的标记抗体与包被抗体也为上述标志物对应的标记抗体与包被抗体。
[0024]有益效果:本发明与传统技术相比，具有如下优点:
[0025]1、本发明提供了一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒，能够快速检测出血液中的癌症标志物，操作简便，检测灵敏度高，无需任何仪器辅助；
[0026]2、本发明所用聚苯乙烯乳胶相比于传统试纸所用的胶体金，降低了生产成本，并且提高了全血检测的稳定性，解决了血液非特异性吸附干扰胶体金显色造成的假阳性；
[0027]3、本发明为通用型免疫层析试纸条，只要将所用的抗体进行替换即可检测其他目标物；
[0028]4、本发明操作简单，检测灵敏度高，抗干扰强，易于推广应用，适用于医院、检验检疫以及家庭等需要现场检测的场所。
【附图说明】
[0029]图1为本发明试纸条的侧面结构示意图，其中I为样品玻璃纤维素膜、2为免疫结合垫、3为硝酸纤维素膜、4为检测线、5为质控线、6为吸水垫以及7为塑料底衬板；
[0030]图2为本发明正面检测结果判定示意图。
【具体实施方式】
[0031]实施例1:
[0032]—种基于聚苯乙烯乳胶的甲胎蛋白免疫层析试剂盒的制备方法具体操作步骤如下:
[0033](I)聚苯乙烯乳胶微球的前处理
[0034]所用聚苯乙烯乳胶微球原始质量浓度为I %，直径300nm，表面为羧基修饰；
[0035]取10 μ L乳胶微球，加入90 μ L 2_ (N-吗啉)乙磺酸缓冲液(MES缓冲液，1mM, pH6.0)稀释10倍；
[0036]取10yL稀释好的浓度为0.1 %的乳胶微球，加入2mg 1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)和2mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)来活化微球表面修饰的羧基，混合溶解后置于避光处Ih ;
[0037]在9000rpm条件下离心5min，弃上清液并用MES缓冲液(10mM，pH 6.0)洗涤3次去掉多余的活化剂，最后用磷酸缓冲液(PBS，10mM，pH 7.4)重悬至lmL，保存待用。
[0038](2)乳胶-抗体结合物的制备
[0039]在ImL前处理好的聚苯乙稀乳胶微球中加入3 μ L I μ g/mL的甲胎蛋白标记抗体，室温振汤反应Ih ；
[0040]将反应后的溶液在9000rpm条件下离心5min，弃上清液并用磷酸缓冲液(PBS，1mM, pH 7.4)洗涤3次，最后用10%牛血清白蛋白溶液(BSA)重悬至原体积，保存待用。
[0041](3)目标物免疫结合垫的制备
[0042]将制好的乳胶-抗体结合物喷涂到玻璃纤维膜上，得到目标物免疫结合垫。
[0043](4)具有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(NC膜)的制备
[0044]在一条硝酸纤维素膜上喷涂上lmg/mL的甲胎蛋白包被抗体和羊抗鼠二抗，其中甲胎蛋白包被抗体作为检测线，羊抗鼠二抗作为质控线。
[0045](5)基于聚苯乙烯乳胶的甲胎蛋白免疫层析试纸条的制备
[0046]将样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、具有检测线和质控线的硝酸纤维膜和吸水垫四种粘贴物分别依次粘贴到塑料底衬板上，并且相邻粘贴物之间相互重叠部分长度为2mm，得到基于聚苯乙烯乳胶的甲胎蛋白免疫层析试纸条，干燥封装，保存于温度4°C?常温条件下。
[0047]实施例2
[0048]—种基于聚苯乙烯乳胶的癌胚抗原免疫层析试剂盒的制备方法具体操作步骤如下:
[0049](I)聚苯乙烯乳胶微球的前处理
[0050]所用聚苯乙烯乳胶微球原始质量浓度为I %，直径300nm，表面为羧基修饰；取10 μ L乳胶微球，加入90 μ L 2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液(MES缓冲液，1mM, pH 6.0)稀释10倍；
[0051]取10yL稀释好的浓度为0.1 %的乳胶微球，加入3mg 1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)和4mg N-羟基琥珀酰亚胺(