NHS)来活化微球表面修饰的羧基，混合溶解后置于避光处Ih ;
[0052]在8000rpm条件下离心5min，弃上清液并用MES缓冲液(10mM，pH 6.0)洗涤3次去掉多余的活化剂，最后用磷酸缓冲液(PBS，10mM，pH 7.4)重悬至lmL，保存待用。
[0053](2)乳胶-抗体结合物的制备
[0054]在ImL前处理好的聚苯乙稀乳胶微球中加入5 μ L I μ g/mL的癌胚抗原标记抗体，室温振汤反应Ih ；
[0055]将反应后的溶液在9000rpm条件下离心5min，弃上清液并用磷酸缓冲液(PBS，1mM, pH 7.4)洗涤3次，最后用10%牛血清白蛋白溶液(BSA)重悬至原体积，保存待用。
[0056](3)目标物免疫结合垫的制备
[0057]将制好的乳胶-抗体结合物喷涂到玻璃纤维膜上，得到目标物免疫结合垫。
[0058](4)具有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(NC膜)的制备
[0059]在一条硝酸纤维素膜上喷涂上lmg/mL的癌胚抗原包被抗体和羊抗鼠二抗，其中癌胚抗原包被抗体作为检测线，羊抗鼠二抗作为质控线。
[0060](5)基于聚苯乙烯乳胶的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备
[0061]将样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、具有检测线和质控线的硝酸纤维膜和吸水垫四种粘贴物分别依次粘贴到塑料底衬板上，并且相邻粘贴物之间相互重叠部分长度为2mm，得到基于聚苯乙烯乳胶的癌胚抗原免疫层析试纸条，干燥封装，保存于温度4°C?常温条件下。
[0062]实施例3
[0063]—种基于聚苯乙烯乳胶的前列腺特异抗原免疫层析试剂盒的制备方法具体操作步骤如下:
[0064](I)聚苯乙烯乳胶微球的前处理
[0065]所用聚苯乙烯乳胶微球原始质量浓度为I %，直径300nm，表面为羧基修饰；
[0066]取10 μ L乳胶微球，加入90 μ L 2_ (N-吗啉)乙磺酸缓冲液(MES缓冲液，1mM, pH6.0)稀释10倍；
[0067]取10yL稀释好的浓度为0.1 %的乳胶微球，加入4mg 1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)和4mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)来活化微球表面修饰的羧基，混合溶解后置于避光处Ih ;
[0068]在8000rpm条件下离心7min，弃上清液并用MES缓冲液(10mM，pH 6.0)洗涤3次去掉多余的活化剂，最后用磷酸缓冲液(PBS，10mM，pH 7.4)重悬至lmL，保存待用。
[0069](2)乳胶-抗体结合物的制备
[0070]在ImL前处理好的聚苯乙烯乳胶微球中加入4 μ L I μ g/mL的前列腺特异抗原标记抗体，室温振荡反应Ih;
[0071]将反应后的溶液在9000rpm条件下离心5min，弃上清液并用磷酸缓冲液(PBS，1mM, pH 7.4)洗涤3次，最后用10%牛血清白蛋白溶液(BSA)重悬至原体积，保存待用。
[0072](3)目标物免疫结合垫的制备
[0073]将制好的乳胶-抗体结合物喷涂到玻璃纤维膜上，得到目标物免疫结合垫。
[0074](4)具有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(NC膜)的制备
[0075]在一条硝酸纤维素膜上喷涂上lmg/mL的前列腺特异抗原包被抗体和羊抗鼠二抗，其中前列腺特异抗原包被抗体作为检测线，羊抗鼠二抗作为质控线。
[0076](5)基于聚苯乙烯乳胶的前列腺特异抗原免疫层析试纸条的制备
[0077]将样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、具有检测线和质控线的硝酸纤维膜和吸水垫四种粘贴物分别依次粘贴到塑料底衬板上，并且相邻粘贴物之间相互重叠部分长度为2mm，得到基于聚苯乙烯乳胶的前列腺特异抗原免疫层析试纸条，干燥封装，保存于温度4°C?常温条件下。
[0078]实施例4:
[0079]如图1，其中I为样品玻璃纤维膜，长度为14mm ；2为免疫识别垫，长度为4mm ；3为硝酸纤维膜，长度为20mm ；4为检测线，宽度为Imm ；5为质控线，宽度为Imm ；6为吸水垫，长度为16_。检测液体毛细作用方向从左至右。
[0080]实施例5:
[0081]如图2为利用基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒进行目标物检测过程中，检测结果的判定依据。箭头方向为检测样品毛细作用方向。具体检测结果判定依据如下所示:
[0082]右一为检测结果无效示意图，无论检测线是否出线，只要质控线不出线即判定检测结果无效；
[0083]右二为检测结果阴性示意图，即检测样品中不含目标物或者含极少目标物；
[0084]右三为检测结果弱阳性示意图，即检测样品中含有一定量的目标物；
[0085]右四为检测结果阳性示意图，即检测样品中含有大量目标物。
【主权项】
1.一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒，试剂盒包括试纸条、干燥剂和吸管，其特征在于，试纸条底部为塑料底衬板，样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴在塑料底衬板上，所述硝酸纤维素膜上分别设有检测线和质控线。2.根据权利要求1所述的基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒，其特征在于，所述塑料底衬板上相邻粘贴物之间相互重叠部分长度为2mm。3.根据权利要求1所述的基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试纸条干燥封装，保存在温度4°C?常温条件下。4.一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)聚苯乙烯乳胶微球的前处理 所用聚苯乙烯乳胶微球原始质量浓度为1%，直径200?500nm，表面为羧基修饰； 取10 μ L乳胶微球，加入90 μ L 2- (N-吗啉)乙磺酸缓冲液(即MES缓冲液，1mM, pH6.0)稀释10倍； 取10yL稀释好的浓度为0.1 %的乳胶微球，加入2?4mg 1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐(EDC)和2?4mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)来活化微球表面修饰的羧基，混合溶解后置于避光处I?2h ; 在8000?9000rpm条件下离心5?lOmin，弃上清液并用MES缓冲液(10?20mM，pH6.0)洗涤3次去掉多余的活化剂，最后用磷酸缓冲液(10?20mM，pH 7.4)重悬至lmL，保存待用； (2)乳胶-抗体结合物的制备 在ImL前处理好的聚苯乙烯乳胶微球中加入3?5 μ L I μ g/mL的癌症标志物标记抗体，室温振汤反应Ih ； 将反应后的溶液在8000?9000rpm条件下离心5?lOmin，弃上清液并用磷酸缓冲液(10?20mM，pH 7.4)洗涤3次，最后用10?15%牛血清白蛋白溶液重悬至lmL，保存待用； (3)目标物免疫结合垫的制备 将制好的乳胶-抗体结合物喷涂到玻璃纤维膜上，得到目标物免疫结合垫； (4)具有检测线和质控线的硝酸纤维素膜(NC膜)的制备 在一条硝酸纤维素膜上喷涂上lmg/mL的癌症标志物包被抗体和羊抗鼠二抗，其中癌症标志物包被抗体作为检测线，羊抗鼠二抗作为质控线； (5)基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试纸条的制备 将样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、具有检测线和质控线的硝酸纤维膜和吸水垫四种粘贴物分别依次粘贴到塑料底衬板上，并且相邻粘贴物之间相互重叠部分长度为2mm，得到基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试纸条，干燥封装，保存于温度4°C?常温条件下。5.根据权利要求4所述的基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒的使用方法，其特征在于，所述癌症标志物为甲胎蛋白，癌胚抗原或前列腺特异抗原，癌症标志物的标记抗体与包被抗体也为上述标志物对应的标记抗体与包被抗体。
【专利摘要】本发明公开了一种基于聚苯乙烯乳胶的癌症标志物免疫层析试剂盒，试剂盒包括试纸条、干燥剂和吸管，其特征在于，试纸条底部为塑料底衬板，样品玻璃纤维膜、免疫结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴在塑料底衬板上，所述硝酸纤维素膜上分别设有检测线和质控线。本发明同时公开了上述试剂盒的使用方法。本发明能够快速检测出血液中的癌症标志物，操作简便，检测灵敏度高，无需任何仪器辅助。
【IPC分类】G01N33/544
【公开号】CN105137066
【申请号】CN201510465955
【发明人】陈伟, 邓怡, 陈玉英
【申请人】江苏巨珩新材料科技有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年7月31日