一种植物油中污染物快速免疫检测方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品安全检测领域，具体设及一种植物油中污染物快速免疫检测方法 和应用。
【背景技术】
[0002] 植物油中的污染物主要来自于原材料、生产过程、包装材料中的污染。例如植物 油中的黄曲霉毒素、玉米赤霉締酬等真菌毒素W及农药残留主要来自于受污染的棒油原 料；植物油中的苯并（a)巧主要来自于棒油工序的原料炒制过程；而邻苯二甲酸醋类化合 物、双酪A等主要来自于生产过程的塑料器皿或塑料包装材料。我国现行食用油国家标准 《食用植物油卫生标准》（GB2716-2005)规定花生油、玉米胚油黄曲霉毒素B1残留限量为 20yg/kg，其它油中黄曲霉毒素B1残留限量为20yg/kg;苯并（a)巧残留限量为lOyg/ kg;农药残留按照GB2763的规定执行。
[0003] 现有检测植物油中污染物的方法必须经过一个比较复杂的样品前处理过程。典 型步骤包括：1)用极性有机溶剂与植物油振荡混合；2)静置或离屯、，使极性有机溶剂与植 物油分离；3)取极性有机溶剂相，加入非极性有机溶剂，除去其中残余油脂；4)用旋转蒸 发仪、或氮吹仪将除去油脂的极性有机溶剂相蒸干或吹干；5)用水、缓冲溶液、或有机试剂 将残余物复溶，用色谱或免疫方法、或其它方法进行检测。显然，现有植物油中污染物检测 方法存在操作复杂、样品处理时间长、需要用大量有机溶剂、需要配套样品前处理仪器等缺 陷，难W实现现场快速检测。
[0004] 直接在油水混合体系中进行免疫检测的研究至今未见报道。其原因在于在油水混 合体系中，非极性的油脂会与抗体蛋白或目标化合物的非极性部分结合，从而改变蛋白构 象，干扰抗原、抗体反应。
[0005] 相关文献可参见：
[0006] 1)D.Zhang,P.Li,Y.Yang,Q.Zhang,W.Zhang,Z.XiaoandX.Ding,Talan ta, 2011,85, 736-742.
[0007] 2)Bao L. ;Liang C. Jrucksess M. W. ;Xu Y. ;Lv N. ;Wu Z. ;Jing P. ;Rry F. S. J AOAC Int 2012,95化），1689-1700.
[000引扣鲍蕾；吕宁点振兴；静平；许艳丽注彦斐；王丽；王江；果旗；王雄.粮食科技 与经济 2012 (05)，16-18.
[0009] 4)《食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和巧光光度法》 (GB/T18979-2007)
[0010] 5)《食品中玉米赤霉締酬的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》（GB/T 23504-2009)
【发明内容】
[0011] 因此，本发明的目的是提供一种不需要分离油相、直接用免疫试剂在油水混合物 体系中快速检测食用油中污染物的检测方法和应用，该检测方法是通过对包被在纳米金、 量子点、巧光微球、磁性微球等标记材料上的污染物抗体进行亲水性保护实现的。所谓对抗 体进行亲水性保护，是指将抗体按一定量包被在上述标记材料上W后，在材料上再结合一 层亲水性聚合物，使抗体处于水化层保护中。本发明可W实现在油水混合物中免疫检测的 原因在于1)标记材料表面的水化层阻止了油脂靠近抗体，从而保护了抗体活性；2)油脂中 的污染物根据分配定律，会有一部分通过扩散进入水相，在油水充分混合的条件下，很快达 到平衡，在水相中的污染物会扩散到抗体表面，与抗体发生免疫反应。
[0012] 与现有植物油中污染物检测方法相比，本方法操作更简单、检测更方便、检测时间 更短，无需有机溶剂、经济环保，无需其他辅助样品处理设备，适合现场检测。
[0013] 针对上述目的，本发明提供的技术方案如下：
[0014] 一方面，本发明提供一种植物油中污染物检测方法，包括W下步骤：
[0015] 1)根据污染物在植物油中的残留限量，按适当的重量体积比将植物油与纯净水或 提取溶液混合；
[0016] 2)然后，剧烈振荡10-60秒，使植物油和纯净水或提取溶液充分混合均匀；
[0017] 3)再然后，直接将混合液滴到免疫层析检测卡的加样孔上，或直接用免疫层析检 测试纸薩取混合液，反应3-5分钟。
[0018] 4)最后，直接观察检测卡或检测试纸T线和C线出现情况，定性判断植物油中污染 物是否超标；也可W利用检测卡/检测试纸读数仪，根据T线和C线显色情况，定量检测植 物油中污染物残留量。
[0019] 另一方面，本发明还提供一种本发明在用于植物油中污染物残留检测中的应用。
[0020] 优选地，所述植物油中污染物残留检测包括植物油中黄曲霉毒素、苯并（a)巧、 农药残留、邻苯二甲酸醋类化合物、玉米赤霉締酬、双酪A、呕吐毒素、髓曲霉毒素、伏马毒素 等的检测。
[0021] 在
【发明内容】
中引入了一系列简化形式的概念，运将在【具体实施方式】部分中进一步 详细说明。本
【发明内容】
部分并不意味着要试图限定出所要求保护的技术方案的关键特征和 必要技术特征，更不意味着试图确定所要求保护的技术方案的保护范围。
[002引 W下结合附图，详细说明本发明的优点和特征。
【附图说明】
[0023] 本发明的下列附图在此作为本发明的一部分用于理解本发明。附图中示出了本发 明的实施方式及其描述，用来解释本发明的原理。在附图中，
[0024]图1为抗体亲和性保护的原理示意图；其中，1为纳米金、量子点、巧光微球、磁性 微球等标记材料，2为污染物抗体，3为亲水性聚合物，4为由亲水性聚合物形成的标记性材 料表面水化层。
[0025] 图2为免疫层析检测卡结构示意图；其中，5为样品垫，6为金标垫，7为T线，8为 C线，9为塑料底板，10为硝酸纤维素膜，11为吸水纸
[002引图3为检测植物油中苯并（a)巧时，当油水重量体积比为1:4时，本发明检测方 法对植物油中苯并（a)巧的检测标准曲线。图中横坐标为苯并（a)巧浓度（yg/Kg)，纵 坐标为T线相对巧光值灯％)的自然对数。
【具体实施方式】
[0027] 在下文的描述中，提供了大量的细节W便能够彻底地理解本发明。然而，本领域技 术人员可W了解，如下描述仅设及本发明的较佳实施例，本发明可W无需一个或多个运样 的细节而得W实施。此外，为了避免与本发明发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未 进行描述。
[0028] 实施例1
[0029] 1)取平均粒径为25皿的纳米金颗粒的溶液，用0.Imol/L的碳酸钟溶液调节抑 值为7. 5,向溶液中加入浓度为3yg/mL的黄曲霉毒素B1单克隆抗体，反应30分钟后，加 入含亲水性聚合物PV- 3的封闭缓冲液，继续反应30分钟。标记与封闭完成后，如附图 1所示，纳米金表面形成保护抗体的水化层。经4°C、12000r/min离屯、30分钟后，去除上 清，然后用纳米金稀释液将标记有抗体的纳米金重悬。用喷金划膜仪将重悬后的纳米金W 1. 5yL/cm速度喷到玻璃纤维素膜上；然后室溫真空干燥20小时，制成金标垫；用喷金划膜 仪W〇.8iiL/cm速度将AFB1-BSA偶联蛋白（0.04mg/mL)及羊抗鼠抗体（0. 2mg/mL)分别 包被在硝酸纤维素膜的T线和C线位置，37°C干燥4小时，制成抗原包被膜；将玻璃纤维素 膜浸在样品垫处理液（溶液组成：〇. 1MpH8. 0TRIS-HCL缓冲液，含0. 5%BSA，2%化。'一 35, 0. 03%Proclin-300)中，2秒钟后取出，37°C干燥4小时，制成样品垫；按照本领域公知 的方法，将金标垫、抗原包被膜、样品垫组装成黄曲霉毒素B1免疫层析检测卡。室溫保存备 用。
[0030] 2)按1:1的重量体积比将植物油与纯净水混合。
[0031] 3)然后，剧烈振荡10-60秒，使植物油和纯净水充分混合均匀；
[0032] 4)再然后，直接将混合液滴到黄曲霉毒素B1免疫层析检测卡的加样孔上，反应3 分钟。
[0033] 5)最后，直接观察如图2所示检测卡T线和C线出现情况，当样品中黄曲霉毒素 B1含量小于1. 5yg/Kg时，检测卡T线、C线位置均有红色金线出现；当样品中黄曲霉毒素 B1含量大于1. 5yg/Kg时，检测卡T线位置没有红色金线出现。因此，可W根据检测卡T线 是否出现判定样品中黄曲霉毒素含量是否大于1. 5yg/Kg。
[0034] 实施例2
[0035] 1)黄曲霉毒素B1免疫层析检测卡制备方法同实施例1
[0036] 2)按1:4的重量体积比将不同植物油样品与纯净水混合。
[0037] 3)然后，剧烈振荡10-60秒，使植物油和纯净水充分混合均匀；
[0038]4)再然后，直接将混合液滴到黄曲霉毒素B1免疫层析检测卡的加样孔上，反应3 分钟。
[003引 W最后，直接观察检测卡T线和C线出现情况，T线位置出现红色金线，记为阴性， 即油样中黄曲霉毒素B1含量小于2yg/Kg，T线位置不出现红色金线，记为阳性，即油样中 黄曲霉毒素B1含量大于2yg/Kg。
[0040] 6)同时，利用国标方法《食品中黄曲