相色谱-串联四极杆质谱仪（6410B，安捷伦科技有限公 司），超纯水仪（Simplicity，默克密理博公司），超声波提取仪（KQ-250B，昆山市超声仪器 有限公司）、漩涡混合器（V0RTEX-5,江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司）。
[0044] 喹乙醇、氯霉素、己烯雌酚、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮购于农业部 环境保护科研监测所；金刚烷胺购自百灵威科技有限公司；金刚乙胺、地塞米松购自德国 Dr. Ehrenstorfer公司；利巴韦林购自Sigma公司；甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯试剂，购自 Tedia公司；娃哈哈饮用纯净水，购自杭州娃哈哈集团有限公司。
[0045] 实施例1
[0046] 1、色谱条件优化
[0047] 本研究选用2. 1 X 150mm，5 y m的C18色谱柱在相对较短时间内保证11种非法添 加药物的有效分离。实验比较甲醇-水、乙腈-水体系作为流动相对11种非法添加药物的 分离效果的影响，结果表明待测化合物在乙腈-水流动相中的选择性优于甲醇-水体系且 由于待测化合物极性差异较大，实验采用梯度洗脱方式获得理想的色谱分离效果，单个运 行过程时间仅需lOmin。
[0048] 2、质谱条件优化
[0049] 表1 11种非法添加药物的优化质谱条件（带*者为定量离子）
[0050]
[0051] 采用流动注射方式，在正离子和负离子模式下对每种化合物进行一级质谱扫描获 得其分子离子峰；在确定各类化合物的准分子离子峰后分别对其进行二级质谱分析，获得 其碎片离子信息，确定定量离子和辅助定性离子。通过优化碎裂电压（Fragmentor，V)、碰 撞电压（Collision Energy，eV)等参数，使11种非法添加药物的准分子离子与特征碎片离 子产生的离子对强度达到最大；对毛细管电压、雾化压力、干燥气温度、干燥气流量等进行 优化，使每种待测化合物的离子化效率达到最佳。
[0052] (1)喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、地塞米松、氯霉素、呋喃它酮、呋喃唑 酮检测条件：离子源：API-ES ;毛细管电压：3000V ;雾化压力：35psi ;干燥气温度：325°C ; 干燥气流量：l〇L/min ;离子极性：正；质量扫描模式:MRM模式。
[0053] (2)呋喃妥因、呋喃西林、己烯雌酚测条件：离子源：API_ES ;毛细管电压：3000V ; 雾化压力：30psi ;干燥气温度：300°C ;干燥气流量：10L/min ;离子极性：负；质量扫描模 式:MRM模式。其它质谱参数见表1 ;11种非法添加药物的提取离子流谱图见图1至图11 所示。
[0054] 3、样品前处理优化
[0055] 待测11种非法添加药物溶于甲醇、乙腈等有机试剂，实验选用甲醇/水（50+50) 作为提取试剂，加入金刚乙胺-D4和氯霉素-D5内标后，振荡混匀后超声提取30min，过 0. 22 y m有机滤膜后进样检测，结果显示甲醇/水体系对11种非法添加药物的提取效率高 达90%以上。且样品无需进一步净化，直接用于HPLC-MS/MS检测，即可较好的提取中兽药 散剂中非法添加药物。
[0056] 4、线性范围与检出限
[0057] 将11种非法添加药物的标准溶液添加到空白基质中做标准曲线，配制浓度为50、 100、200、500、1000、2000、5000 y g/kg 的标准溶液（含金刚烷胺-D4 浓度均为 1000 y g/kg 和氯霉素-D5浓度均为400 y g/kg)，绘制11种非法添加药物的标准曲线，相关系数均大 于0. 99(见表2)。该方法中喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、地塞米松、氯霉素、呋 喃它酮、咲喃唑酮的检出限为50 y g/kg(S/N多3)，咲喃妥因、咲喃西林、己稀雌酸检出限为 100yg/kg(S/N 彡 3)。
[0058] 5、回收率与精密度
[0059] 实验考察了该方法的回收率及精密度，在空白样品中添加3个不同水平（200、 1000、5000 yg/kg)的11种非法添加药物按实验方法测定回收率，每个水平重复测定6 次。结果显示，11种非法添加药物的平均回收率为90. 2%~111%，相对标准偏差均小于 8.24% (见表 3)。
[0060] 表3方法加标回收率及精密度
[0061]
[0062] 实施例2
[0063] 实际样品分析
[0064] 实验对白头翁散、止痢散、清瘟败毒散、银翘散、穿心莲散、黄连解毒散、扶正解毒 散、消食平胃散、荆防败毒散、公英散、清肺止咳散、五皮散、七补散、桑菊散等35份市售中 兽药散剂进行HPLC-MS/MS检测（样品总离子流图见图12和图13所示），检测结果显示待 测中兽药散剂中均未检出11类非法添加药物。
[0065] 结论
[0066] 本文采用高效液相色谱串联质谱技术建立了中兽药散剂中11种非法添加药物的 分析方法。该方法操作简便快速、灵敏度高、专属性强、重复性好，可以同时测定11种非法 添加药物，实现了其高通量分析，可满足中兽药散剂中11种非法添加药物的监控要求。
[0067] 上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对发明保护范围 的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需 要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征在于：包括以下步 骤： (1)采用有机溶剂超声提取方法对待测兽药散剂进行预处理，有机溶剂为甲醇-水，甲 醇和水的体积比为0. 9-1. 1:0. 9-1. 1 ; ⑵通过液相色谱-串联质谱法对提取液中的喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、 地塞米松、氯霉素、己烯雌酚、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林和呋喃唑酮进行检测。2. 根据权利要求1所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征 在于：步骤（1)中，甲醇-水中的甲醇和水的体积比为1:1。3. 根据权利要求1所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征 在于：步骤（1)中，所述兽药散剂和甲醇-水的比例为（0. 4-0. 6)g: (4. 5-5. 5)ml。4. 根据权利要求1所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征 在于：步骤（1)中，所述超声时间为15_45min;超声的温度为25-35°C。5. 根据权利要求1所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征 在于：步骤（1)中，将超声提取后的溶液进行过滤，有机滤膜的孔径为〇. 22ym或0. 45ym。6. 根据权利要求1所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征 在于：步骤（2)中，液相色谱-串联质谱法的色谱条件为：采用十八烷基健合硅胶柱，流动 相由A相和B相组成，A相为水，B相为乙腈，采用梯度洗脱。7. 根据权利要求6所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征 在于：所述C18柱的粒径为5ym，柱内径为2.Imm或4. 6mm，柱长为50mm、150mm或250mm; 柱温为30°C，进样量：5yL。8. 根据权利要求7所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特征 在于：所述C18柱的粒径为5ym，柱内径为2. 1mm，柱长为150mm〇9. 根据权利要求6或7所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其 特征在于： 喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、地塞米松、氯霉素、呋喃它酮和呋喃唑酮的检 测条件：流速：〇. 2mL/min;梯度洗脱程序：0-2min，B相保持5% ;2-8min，B相从5%升至 95% ;8. 1-lOmin，B相降至 5% ;10min后停止； 呋喃妥因、呋喃西林和己烯雌酚的检测条件：流速：〇. 3mL/min，梯度洗脱程序：0-51^11，8相从20%升至50%;5-7111111，8相从50%升至95% ;7-8111111，8相保持95%; 8. 1-lOminB相降至 5% ;10min后停止。10. 根据权利要求9所述的用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，其特 征在于：步骤（2)中，液相色谱-串联质谱法的质谱条件为： 喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、地塞米松、氯霉素、呋喃它酮和呋喃唑酮的检 测条件：离子源=API-ES;毛细管电压：3000V;雾化压力：35psi;干燥气温度：325°C;干燥 气流量：l〇L/min;离子极性：正；质量扫描模式:MRM模式； 呋喃妥因、呋喃西林和己烯雌酚的检测条件：离子源=API-ES;毛细管电压：3000V;雾 化压力：30psi;干燥气温度：300°C;干燥气流量：10L/min;离子极性：负；质量扫描模式： MRM模式。
【专利摘要】本发明公开了一种用于测定兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法，包括以下步骤：(1)采用有机溶剂超声提取方法对待测兽药散剂进行预处理，有机溶剂为甲醇-水，甲醇和水的体积比为0.9-1.1:0.9-1.1；(2)通过液相色谱-串联质谱法对提取液中的喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、地塞米松、氯霉素、己烯雌酚、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林和呋喃唑酮进行检测。本发明的样品预处理简单，以甲醇/水(50+50)作为提取试剂超声提取，过滤膜后即可上机检测，且回收率良好；本发明的方法具有更低的检出限，喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、地塞米松、氯霉素、呋喃它酮、呋喃唑酮的检出限为50μg/kg；呋喃妥因、呋喃西林和己烯雌酚的检出限为100μg/kg。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105203654
【申请号】CN201510578690
【发明人】王晓利, 赵汝松, 苑金鹏, 王珊珊, 陈相峰, 李磊, 赵金, 宁凡盛, 王超
【申请人】山东省分析测试中心
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月11日