区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的蛋白特征谱的制作方法_2

文档序号:9488326阅读:来源:国知局
016]A2、进行蛋白质的定量所需的试剂和/或仪器;
[0017]A3、进行蛋白质的酶解所需的试剂和/或仪器;
[0018]A4、所述数据处理装置。
[0019] 所述进行蛋白质的提取所需的试剂和/或仪器可为利用液相色谱-电喷雾电离 串联质谱检测蛋白质含量所需的试剂和/或仪器,具体来说,利用液相色谱-电喷雾电离 串联质谱检测蛋白质含量所需的试剂和/或仪器可由液相色谱串联质谱仪以及进行液相 色谱-电喷雾电离串联质谱所需的试剂组成。所述液相色谱串联质谱仪可为液相色谱-电 喷雾电离串联质谱仪(Q-ExactiveThermoFinnigan),所述进行液相色谱-电喷雾电离 串联质谱所需的试剂可为与所述液相色谱-电喷雾电离串联质谱仪(Q-ExactiveThermo Finnigan)配套的试剂。
[0020] 所述进行蛋白质的提取所需的试剂和/或仪器可为默克公司的ProteoExtract Albumin/IgGRemovalKit。
[0021] 所述进行蛋白质的定量所需的试剂和/或仪器可为利用牛血清标准蛋白法进行 蛋白质的定量所需的试剂和/或仪器或试剂盒,如ThermoScientificPierceBCA蛋白定 量分析试剂盒,货号为NCI3225CH。
[0022] 所述进行蛋白质的酶解所需的试剂和/或仪器可为利用胰蛋白酶酶解蛋白质所 需的试剂和/或仪器。所需试剂可为8M尿素溶液、1MDTT溶液、1ΜIAA溶液和/或胰蛋 白酶。
[0023] 上述应用中,所述12种蛋白质含量可为血浆、血清或血液中所述12种蛋白质的含 量。
[0024] 上述应用中,所述儿童可为3个月-16岁的儿童。
[0025] 为解决上述技术问题,本发明还提供了以所述12种蛋白质作为标志物的区分儿 童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的系统在制备区分或辅助区分儿童潜伏结核感染 者和活动性结核病患者产品中的应用。
[0026] 上述应用中,所述系统可为所述检测12种蛋白质含量的系统。
[0027] 为解决上述技术问题,本发明还提供了区分或辅助区分儿童潜伏结核感染者和活 动性结核病患者的系统。
[0028] 本发明所提供的区分或辅助区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的系 统,为所述检测12种蛋白质含量的系统。
[0029] 为解决上述技术问题,本发明还提供了区分或辅助区分儿童潜伏结核感染者和活 动性结核病患者的蛋白特征谱。
[0030] 本发明所提供的区分或辅助区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的 蛋白特征谱中,差异表达的蛋白质为表达上调的蛋白质和表达下调的蛋白质;与儿童活 动性结核病患者相比较,儿童潜伏结核感染者中所述表达上调的蛋白质为TSSK4、L0X和 RASGRF2,所述表达下调的蛋白质为XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B 和PCF11 ;与儿童潜伏结核感染者相比较,儿童活动性结核病患者中所述表达下调的蛋白 质为TSSK4、L0X和RASGRF2,所述表达上调的蛋白质为XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、 NKD2、OCRL、ATG2B和PCF11。
[0031] 为解决上述技术问题,本发明还提供了区分或辅助区分潜伏结核感染者和活动性 结核病患者的方法。
[0032] 本发明所提供的区分或辅助区分潜伏结核感染者和活动性结核病患者的方法,包 括检测待测儿童中 12 中蛋白质--TSSK4、LOX、RASGRF2、XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、 SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11的含量。所述12种蛋白质的含量可为血浆、血清或血液 中所述12种蛋白质的含量,即所述待测儿童中TSSK4、L0X、RASGRF2、XRCC4、PAMR1、ZMYM5、 ATP11A、SF3B1、NKD2、OCRL、ATG2B和PCF11 的表达量。
[0033] 与所述儿童活动性结核病患者比较,如果所述待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2的 表达量上调,且XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、OCRL、ATG2B和PCF11 的表达量 下调,所述儿童为或候选儿童潜伏结核感染者;若所述待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2中有 至少一个蛋白质不上调,或所述待测儿童XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、 ATG2B和PCF11中有至少一个蛋白质不下调,则所述待测儿童不为或候选不为儿童潜伏结 核感染者。
[0034] 与所述儿童潜伏结核感染者比较,如果所述待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2的表 达量下调,且XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、OCRL、ATG2B和PCF11 的表达量上 调,所述儿童为或候选为儿童活动性结核病患者;若所述待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2 中有至少一个蛋白质不下调,或所述待测儿童XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、 0CRUATG2B和PCF11中有至少一个蛋白质不上调,则所述待测儿童不为或候选不为儿童活 动性结核病患者。
[0035] 其中,"上调"体现为比值> 1. 5,"下调"体现为比值〈0. 6,所述比值为某一蛋白在 所述待测儿童中的表达量与在儿童活动性结核病患者中的表达量的比值或某一蛋白在所 述待测儿童中的表达量与在儿童潜伏结核感染者中的表达量的比值,所述表达量即蛋白质 在血浆中的含量。儿童活动性结核病患者中的表达量为待测儿童所属儿童群体中活动性结 核病患者中该蛋白质的平均表达量;儿童潜伏结核感染者中的表达量为待测儿童所属儿童 群体中潜伏结核感染者中该蛋白质的平均表达量。
[0036] 上述方法中,确定所述待测儿童是否为儿童潜伏结核感染者以用现有技术确诊的 儿童活动性结核病患者作为参照,确定所述待测儿童是否为儿童活动性结核病患者以用现 有技术确诊的儿童潜伏结核感染者作为参照,现有技术可以为病原学诊断和/或临床诊 断。
[0037] 上述方法中,所述儿童可为3个月-16岁的儿童。
[0038] 实验证明,本发明从3个月-16岁的儿童潜伏结核感染者与活动性结核病患者的 血浆样本中利用液相色谱-电喷雾电离串联质谱筛选得到的12种蛋白质的蛋白质谱,其 中儿童潜伏结核感染者与活动性结核病患者血浆中的TSSK4、L0X和RASGRF2含量的比值 > 1. 5,儿童潜伏结核感染者与活动性结核病患者血浆中的XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、 SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11含量的比值〈0. 6,表明,这12种蛋白质组成的蛋白质谱 可以区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者,检测血浆中这12种蛋白质含量的试 剂和仪器可以用来区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者。
[0039] 本发明所提供的筛查疑似潜伏结核感染者和活动性结核病患者的儿童蛋白质组 学产物,可用于建立血浆特征代谢产物模型以及应用于儿童潜伏结核感染和活动性结核 病的鉴别诊断。本发明与其它儿童结核病的检测方法比较,具有以下优点:
[0040] 第一,本发明采用非标记定量蛋白质组学方法对儿童潜伏结核感染者与活动性结 核病患者血浆的检测,并采用了传统统计学与现代生物信息学方法相结合的方法进行数据 处理,从而得到儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者血浆蛋白质质谱检测模型,并且 所发现的一系列蛋白质为寻找新的更理想的标志物提供了基础和资源。
[0041] 第二,与以往的血浆学检测方法比较具有较高的敏感性和特异性,并能用于区分 儿童潜伏结核感染与活动性结核病的药物研究中。
[0042] 第三,本发明模型的构建方法设计合理可行,为提供区分儿童潜伏结核感染和活 动性结核病的临床治愈率提
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