0083] 以PeptideFDR<0· 05对数据进行筛选过滤。导入Maxquant软件（属于 ProteinScape2. 1软件的一部分）进行Label-free分析。主要参数如下：
[0084]Mainsearchppm：6Missedcleavage：2
[0085]MS/MStoleranceppm:20De-Isotopic:TRUE
[0086]enzyme：Trypsindatabase：ipi.human. 3. 87.fasta
[0087]Fixedmodification：Carbamidomethyl(C)
[0088]Variablemodification：0xidation(M),Acetyl(ProteinN-term)
[0089]Decoydatabasepattern：reverse
[0090]Lablefreequantification(LFQ)：TRUE
[0091]LFQminratiocount：2
[0092]Matchbetweenruns ：2 min
[0093]PeptideFDR：0. 05
[0094]ProteinFDR：0. 05
[0095] 筛选出12个foldchange(比值）> 1.5或者〈0.6的差异蛋白（见表2)，从而获 得区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者蛋白特征谱。其中，比值> 1.5的蛋白为 表达上调的蛋白，比值〈0. 6的蛋白为表达下调的蛋白，所述比值为所述儿童潜伏结核感染 者的相应蛋白的平均表达量与所述儿童活动性结核病患者的对应蛋白的平均表达量的比 值。
[0096] 最终所得区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者蛋白特征谱中含有表达 差异的12种蛋白质，儿童潜伏结核感染者与活动性结核病患者比较存在差异的蛋白质包 括表达上调的蛋白质和表达下调的蛋白质；表达上调的蛋白质为TSSK4、L0X和RASGRF2 ;表 达下调的蛋白质为XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11。儿童活 动性结核病患者与潜伏结核感染者比较存在差异的蛋白质包括表达下调的蛋白质和表达 上调的蛋白质；表达下调的蛋白质为TSSK4、L0X和RASGRF2 ;表达上调的蛋白质为XRCC4、 PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11。
[0097] 与儿童活动性结核病患者比较，如果待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2的表达量上 调，且XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11 的表达量下调，所 述儿童为儿童潜伏结核感染者；若待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2中有至少一个蛋白质不 上调，或待测儿童XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11 中有至 少一个蛋白质不下调，则待测儿童不为儿童潜伏结核感染者。
[0098] 与儿童潜伏结核感染者比较，如果待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2的表达量下调， 且XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11 的表达量上调，所述儿 童为儿童活动性结核病患者；若待测儿童TSSK4、L0X和RASGRF2中有至少一个蛋白质不下 调，或待测儿童XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、0CRL、ATG2B和PCF11 中有至少 一个蛋白质不上调，则待测儿童不为儿童活动性结核病患者。
[0099] 表2、12种蛋白在NCBI数据库中的编号及对应基因号
[0101] 注：LTBI:TB列为儿童潜伏结核感染者与活动性结核病患者相比，蛋白质的表达 的上调或下调情况；差异倍数列中各数值表示与活动性结核病患者相比儿童潜伏结核感染 者各蛋白的相对表达量。
[0102] 7、数据分析
[0103] (1)样本检测总离子流强度一致，说明样本仪器检测上样量基本一致，具有定量分 析意义。
[0104] (2)样本检测TIC离子流峰型基本一致，说明样本酶解较完全，且各样本无蛋白损 失，这与SDS-PAGE图谱也相符合。
[0105] (3)样本肽段的串联质谱峰分布比较平均，且大部分出现在有效梯度内，说明液相 色谱条件较适合样本分析。
[0106] (4)样本的离子流峰保留时间比较一致，说明色谱比较稳定且重复性好，适合比较 同一保留时间内的质谱峰，适合定量分析。
【主权项】
1. 检测12种蛋白质含量的系统在制备区分或辅助区分儿童潜伏结核感染者和活动性 结核病患者产品中的应用； 所述 12 种蛋白质为 TSSK4、LOX、RASGRF2、XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、 0CRL、ATG2B 和 PCF11。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测蛋白质含量的系统包括利用液 相色谱-电喷雾电离串联质谱检测蛋白质含量所需的试剂和/或仪器。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述检测蛋白质含量的系统还包括 进行蛋白质的提取、蛋白质的定量和/或蛋白质的酶解所需的试剂和/或仪器。4. 根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述检测蛋白质含量的系统还 包括数据处理系统，所述数据处理系统用来依据液相色谱-电喷雾电离串联质谱的检测结 果确定所述12种蛋白质的含量。5. 根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：所述儿童为3个月-16岁的儿 童。6. 以权利要求1所述12种蛋白质作为标志物的区分潜伏结核感染者和活动性结核病 患者的系统在制备区分或辅助区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者产品中的应 用。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述系统为权利要求1-5中任一所述检 测12种蛋白质含量的系统。8. 区分或辅助区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的系统，为权利要求1-5 中任一所述检测12种蛋白质含量的系统。9. 区分或辅助区分潜伏结核感染者和活动性结核病患者的蛋白特征谱，其特征在于： 所述特征谱中差异表达的蛋白质为TSSK4、LOX、RASGRF2、XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、 SF3B1、NKD2、OCRL、ATG2B 和 PCF11。10. 区分或辅助区分潜伏结核感染者和活动性结核病患者的方法，包括检测待测儿童 中 TSSK4、LOX、RASGRF2、XRCC4、PAMRl、ZMYM5、ATPl 1A、SF3B1、NKD2、OCRL、ATG2B 和 PCFll 的含量。
【专利摘要】本发明公开了区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的蛋白特征谱。本发明所提供的特征谱中差异表达的蛋白质为TSSK4、LOX、RASGRF2、XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、OCRL、ATG2B和PCF11；与儿童活动性结核病患者比较，儿童潜伏结核感染者TSSK4、LOX和RASGRF2的表达量上调，XRCC4、PAMR1、ZMYM5、ATP11A、SF3B1、NKD2、OCRL、ATG2B和PCF11的表达量下调。实验证明，这12种蛋白质组成的蛋白质谱可以区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105241986
【申请号】CN201510574277
【发明人】申阿东, 李洁琼, 孙琳, 徐放, 綦辉, 肖婧, 申晨, 焦伟伟, 郭雅洁, 王咏红, 佟月娟
【申请人】首都医科大学附属北京儿童医院
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年9月10日