一种任意组合式免疫多组份检测方法及装置的制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种任意组合式免疫多组份检测方法及装置，属于生物检测分析技术 领域。
【背景技术】
[0002] 个体化治疗（individualized drug therapy)是以每个患者的信息为基础决定治 疗方针，从基因组成或表达变化的差异来把握治疗效果或毒副作用等应答的个性，对每个 患者进行最适宜药物疗法的治疗。目前的个体化医疗集中体现在分子诊断的应用方面，也 就是通过基因组测序或基因芯片检测，预测被检测对象在哪些疾病上有较高的风险。基于 个人特异性DNA序列得到了较快的发展，但是蛋白水平上的健康预测发展的较为缓慢，限 制了个体化治疗领域的发展。例如，个体化肿瘤治疗需要同时检测不同的肿瘤标志物，提高 诊断的准确性，减少假阳性或假阴性出现率，根据准确地诊断结果确定治疗手段及给药的 类别和剂量。由于不同患者的癌症发病种类不同、癌变部位不同，需要检测的标志物也各不 相同；同时，一种癌细胞不是只分泌一种标志物，因个体差异及细胞变异，同一种病的病人 血液中的肿瘤标志物的高低也是不一样的。所以个体化肿瘤治疗需要对某种癌细胞可能分 泌的标志物进行检测并对其动态变化进行监测，才能对病情变化做出准确判断。
[0003] 以抗体为基础的免疫反应是对特定对象检测的最基本、最普遍方法。在过去的几 十年间，各种免疫方法已经广泛地应用到生命科学研究及临床检测中。但是，目前的免疫分 析技术中，无论是放射免疫分析（RIA)还是后来逐渐发展起来的非放射性免疫分析方法， 都很难实现多组份及高通量检测。荧光免疫分析虽然可以使用多种荧光染料标记，但每种 荧光探针都有较大的峰宽，存在严重的光谱重叠，不适合多组份的标记。半导体荧光量子点 因其独特的一元激发/多元发射、耐光漂白、发射波长可调等光学性质在临床检测方面受 到关注。应用多色荧光量子点可在同一样品中同时测定多种标志物，但测定的数目有限，通 常只能够同时测定几个组分。面对个体化治疗所需的如此繁多的疾病标志物，如今的检测 手段很难满足对这些疾病标志物同时测定及高通量检测的要求。因此，发展一种多组份、高 通量的临床免疫检测方法就显的尤为重要。
[0004] 此外，传统的基于多孔板的免疫反应方式也不利于多组份免疫分析。首先，多孔板 活性位点有限，在包被不同的抗体时会有歧视效应，很难实现在多孔板的一个孔中包被多 种抗体，从而很难对多个组分同时进行免疫分析。其次，实际样品中免疫分析的对象的浓度 也差别很大，不同浓度的样品在多孔板的同一个孔中进行免疫反应时相互间的干扰严重， 高浓度分析物会对低浓度样品的检测带来很大的干扰，这也对在多孔板中进行多组份免疫 分析带来很大的挑战。特别是针对不同癌症患者、不同的癌症发病种类、不同癌变部位，需 要检测的标志物的种类也各不相同，不可能针对不同的病人包被不同的免疫多孔板。因此， 多孔板方式的免疫分析无法满足针对个体化诊疗检测的需求。
[0005] 免疫磁性微球是免疫学和超顺磁性磁珠相结合而发展起来的新型材料，是一种包 被有抗体或具有抗体结合功能的超顺磁性微球。在免疫检测中，免疫磁珠替代传统酶标板 作为固相载体，包被在磁珠表面的抗体（或抗原）可与环境中特异性抗原（或抗体）结合， 形成抗原-抗体复合物，在外加磁场作用下，使特异性抗原（或抗体）与其它物质分离。这 种分离方法使整个反应在液相中进行，克服了放射免疫测定和传统酶联免疫测定方法中抗 原抗体反应发生在固/液相之间等的缺点，具有灵敏度高、检测速度快、特异性高、重复性 好等优点，因而磁性粒子可广泛应用于生物医学检测，如检测体内各种抗原或抗体，癌细 胞、环境、生物样品及食品中的微生物。免疫磁珠的超顺磁性使固/液相分离更加简便，可 简化清洗等繁杂的传统操作；磁珠微小、比表面积大、与生物分子等物质偶联时容量大、悬 浮稳定性好，有利于抗原抗体反应顺利进行。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种任意组合式免疫多组份检测方法及装置，本发明是基于 磁性微球可根据不同检测需求易于进行不同组合的特点，等离子体质谱可进行多组分同时 测定以及精准定量的特点；利用本发明方法及装置能够实现同一个人不同疾病标志物以及 不同人不同疾病标志物的同时、高通量免疫检测分析；本发明方法及装置有望在临床检测、 个体化治疗和精准医学等领域发挥积极的作用。
[0007] 本发明所提供的组合式免疫多组份检测装置，包括若干个存储容器A、若干个存储 容器B和若干个免疫反应容器A，所述存储容器A和所述存储容器B的数量相应，所述免疫 反应容器A的数量不小于所述存储容器A的数量；
[0008] 每个所述存储容器A中均引出一输液管A，用于与所述免疫反应容器相连通；一个 或多个所述存储容器A与一个所述免疫反应容器相连通；
[0009] 每个所述存储容器B中均引出一输液管B，用于与所述免疫反应容器相连通；一个 或多个所述存储容器B与一个所述免疫反应容器相连通；
[0010] 所述免疫反应容器与电感耦合等离子体质谱仪的进样器相连通。
[0011] 上述的检测装置中，所述存储容器A和所述存储容器B与所述免疫反应容器之间 的连通均通过计算机控制，通过现有的程序即可实现上述控制。
[0012] 上述的检测装置中，所述检测装置还包括磁分离装置，如磁铁，用于对所述免疫反 应容器中的产物进行分离，因此通过磁分离的方式吸引住磁珠，进而将磁珠与液体分离。
[0013] 所述检测装置还包括使用说明书，所述使用说明书中记载如下内容：
[0014] (1)标准曲线的建立，包括如下步骤：
[0015] 1)将不同的包被肿瘤标志物抗体的磁性微球置于所述存储容器A中；根据检测目 标，将相应的所述磁性微球输入至相应的所述免疫反应容器中进行免疫反应；所述免疫反 应容器中置有肿瘤标志物抗原标准品；
[0016] 2)将不同的标记金属的肿瘤标志物抗体的抗体置于所述存储容器B中；
[0017] 3)步骤1)中所述免疫反应结束后，将所述标记金属的肿瘤标志物抗体的抗体输 入至所述免疫反应容器中进行免疫反应，输入的所述标记金属的肿瘤标志物抗体的抗体与 步骤1)中输入的所述磁性微球包被的肿瘤标志物抗体相结合；
[0018] 4)将步骤3)中所述免疫反应的产物进行解离，然后输入至所述电感耦合等离子 体质谱仪中进行检测，得到金属的质谱峰强度；
[0019] 5)变化所述标准品中所述肿瘤标识物的浓度，重复1)_4)的步骤至少3次；以标 准品中肿瘤标志物的浓度为横坐标，以金属的质谱峰强度为纵坐标，建立标准品中肿瘤标 志物的浓度与金属的质谱峰强度之间的标准曲线；
[0020] (2)检测样本中肿瘤标志物的检测，包括如下步骤：
[0021] 重复步骤⑴中1)_4)的步骤，得到金属的质谱峰强度，根据所述标准曲线，即得 到检测样本中肿瘤标志物的浓度；仅将步骤（2)中的所述免疫反应容器中置有所述检测样 本。
[0022] 本发明进一步提供利用上述装置进行组合式免疫多组份检测的方法，包括如下步 骤：
[0023] (1)标准曲线的建立，包括如下步骤：
[0024] 1)将不同的包被肿瘤标志物抗体的磁性微球置于所述存储容器A中；根据检测目 标，将相应的所述磁性微球输入至相应的所述免疫反应容器中进行免疫反应；所述免疫反 应容器中置有肿瘤标志物抗原标准品；
[0025] 2)将不同的标记金属的肿瘤标志物抗体的抗体置于所述存储容器B中；
[0026] 3)步骤1)中所述免疫反应结束后，将所述标记金属的肿瘤标志物抗体的抗体输 入至所述免疫反应容器中进行免疫反应，输入的所述标记金属的肿瘤标志物抗体的抗体与 步骤1)中输入的所述磁性微球包被的肿瘤标志物抗体相结合；
[0027] 4)将步骤3)中所述免疫反应的产物进行解离，然后输入至所述电感耦合等离子 体质谱仪中进行检测，得到金属的质谱峰强度；
[0028] 5)变化所述标准品中所述肿瘤标识物的浓度，重复1)_4)的步骤至少3次；以标 准品中肿瘤标记物的浓度为横坐