毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的装置及检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及分析、检测领域，具体涉及一种毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的装置以及采用所述装置进行检测的检测方法。
【背景技术】
[0002]毛细管电泳色谱(CEC)以内含色谱固定相的毛细管为分离柱，是用电渗流或电渗流结合压力流来推动流动相的一种液相色谱法，其兼具毛细管电泳及高效液相色谱的双重分离机理，既可分离带电物质也可分离中性物质。
[0003]基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD1-T0F-MS)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱，其无论是在理论上还是在设计上都是十分简单和高效的。基本原理是将样品分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，基质从激光中吸收能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离，电离的样品在电场作用下飞过真空的飞行管，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即通过离子的质量电荷之比(M/Z)与离子的飞行时间成正比来分析离子，并测得样品分子的分子量。MALD1-T0F是一种软电离技术，不产生或产生较少的碎片离子。它可直接应用于混合物的分析，也可用来检测样品中是否含有杂质及杂质的分子量。分子量也是生物大分子如多肽、蛋白质等鉴定中首要的参数，也是基因工程产品报批的重要数据之一。MALD1-T0F的准确度高达0.1%?0.01%，远远高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术，目前可测定生物大分子的分子量尚达600KDa。
[0004]Olivares、Smith和Hen1n等分别在1987-1988年提出毛细管电泳-质谱联用(CE-MS)技术，在CE中，紫外检测器由于通过样品的光程较短导致灵敏度较低，特别对一些紫外吸收较弱的化合物的检测。近年由于大气压电离(API)、电喷雾电离(ESI)及新型质谱仪的快速扫描等新技术的出现，足以满足CE窄峰形的特点，使得CE-MS，CE-MS-MS均得到快速发展，并正在成为实验室的重要常规分析方法之一。与CE相连的MS最常用的电离方式是ESI，可以直接把样品分子从液相转移到气相，而且可以测定分子量较大的样品。CE-MS所使用的缓冲液最好是易挥发、低浓度，可获得较好的离子流响应。与质谱相连的CE中常使用加入较高含量的有机溶剂(例如甲醇、乙睛)的缓冲液或者使用非水毛细管电泳，有利于离子喷雾过程，可以增进检测的灵敏度。天然植物药各组分之间以及药物与其代谢产物之间往往结构比较相似，用CE-MS无论对分离及鉴定都显示了优势。Hen1n等用同轴套管流体接口，全扫描质谱方式分离了 8种合成的异唾琳生物碱，对威氏黄柏(Phenllodendronwilsonii)树皮中的8种组分进行了分离并鉴定了其中的6种。Unge等用同样接口将卢竹碱等巧种叫噪类生物碱和生物胺基线分离。此外，离子喷雾(1nspray，ISP)、大气压化学电离(APCI)等也被应用在CE — MS中。但是，将毛细管电泳色谱和激光飞行质谱进行联用尚未见报道。
【发明内容】
[0005]为扩大分析检测领域的测试手段，本发明的目的之一是提供一种毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的装置。
[0006]本发明的另一目的是提供一种毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的检测方法以及用途。
[0007]本发明提供的毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的装置，其包括毛细管电泳仪以及依次连接的馏分收集点靶仪以及激光飞行质谱仪，其中，所述毛细管电泳仪的毛细管出口与所述馏分收集点靶仪的点样针相连接，所述点样针为非绝缘材质且连接有接地线。
[0008]上述的毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的装置中，所述激光飞行质谱仪为基质辅助激光诱导解离飞行时间质谱仪。
[0009]上述的毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的装置中，所述装置还包括基质输送装置，其与所述馏分收集点靶仪相连接用以向所述激光飞行质谱仪输送基质。
[0010]本发明提供的毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的检测方法为采用以上技术方案任一项所述的装置对待检测的样品进行检测。
[0011]进一步地，所述检测方法为:首先将待检测的样品通过毛细管电泳仪进行分离，然后将分离得到的样品通过激光飞行质谱仪进行质谱检测。
[0012]本发明还提供了以上技术方案任一项所述的装置在检测富勒烯或其衍生物中的用途、尤其是在检测生物样本中的富勒烯或其衍生物中的用途。
[0013]进一步地，所述富勒烯衍生物可以为现有的任意种类，如羟基化、氨基化或羧基化修饰的富勒烯，优选为富勒醇；又如高分子材料如聚乙二醇、环糊精等与富勒烯形成的包合物。进一步地，所述生物样本包括但不限于血浆、胆汁、粪便、尿液中的一种或多种。
[0014]本发明提供的毛细管电泳色谱与激光飞行质谱联用的装置首次将毛细管电泳色谱与激光飞行质谱进行联用，填补了分析检测领域的空白。由于毛细管电泳的分离原理不同于常见的液相色谱，其所分离出的馏分带有较高的电压，因此无法直接与激光飞行质谱仪联用，本发明将常规的点靶仪绝缘点样针设置成非绝缘材质的部件，并使其作接地处理，可有效解决电压差的问题，继而可使毛细管电泳仪与激光飞行质谱仪进行联用。本发明的联用装置可采用现有型号的仪器，无需特别复杂的改造，而且还可以明显缩短管路长度，制造成本低，非常具有实用价值。
[0015]采用本发明的联用装置进行检测，可明显简化操作，简化检测流程，提供了新的分析检测手段。
[0016]本发明的联用装置以及检测方法特别适用于富勒烯或其衍生物、尤其适用于生物样本中的富勒烯或其衍生物的检测，生物样本中的富勒烯或其衍生物含量通常较低，一般可低至Ing/mL，普通的液相色谱难以将其分离，毛细管电泳色谱则具有较好的分离效果，但是常规的方法需将分离、质谱检测分开进行，而本发明的技术则可将二者联用检测，大大简化了检测流程，并且具备较高检测的准确性以及可重复性。
【附图说明】
[0017]图1A、1B分别为实施例2所得的毛细管电泳色谱图以及质谱图；
[0018]图2为实施例2不同的富勒醇的毛细管电泳色谱图。
【具体实施方式】
[0019]下面通过实施例对本发明进行详细说明，以使本发明的特征和优点更清楚。但应该指出，实施例用于理解本发明的构思，本发明的范围并不仅仅局限于本文中所列出的实施例。
[0020]如没有特别说明，本发明实施例所使用的原料、仪器均为市售产品，本发明实施例所述的操作为本领域常规技术。
[0021]实施例1
[0022]1、仪器
[0023]基质输送栗(配有在线脱气机):Agilent1260 Iso Pump G1310B&DegasserG1322A
[0024]毛细管电泳仪:AgilentCapillary Electrophoresis 7100
[0025]蛋白质馈分收集点革巴器:Bruker Proteineer Fc II
[0026]基质辅助激光诱导解离飞行时间质谱仪:Bruker